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腹腔镜与开腹输卵管切除手术对输卵管妊娠患者机体免疫功能的影响
目的 研究腹腔镜与常规开腹手术行输卵管切除对患者机体免疫功能的影响.方法 明确诊断为输卵管妊娠患者70例,分为腔镜组(35例)和开腹组(35例),分别行腹腔镜下或开腹患侧输卵管切除术.收集所有患者术前8h及术后24、72h血清,并对C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)进行检测.结果 两组患者术后24h CRP、IL-6及IL-8均升高,但腔镜组低于开腹组(P<0.05).两组术后72h CRP仍高于术前8h,腔镜组低于开腹组(P<0.05);而IL-6和IL-8开始回落,但腔镜组的IL-6和IL-8水平仍分别低于开腹组(P<0.05).结论 输卵管切除术后血清CRP、IL-6及IL-8均升高.腔镜组的CRP、IL-6和IL-8水平变化弱于开腹组.腹腔镜与开腹手术相比对机体免疫功能的影响更小.
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脂联素对人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-8表达的影响
目的 探讨脂联素对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌白细胞介素-8(IL-8)、单核细胞趋化因子-I(MCP-1)的影响.方法收集新生儿脐静脉并分离培养HUVECs,采用标记链霉素抗生物素-生物素法(LSAB法)荧光染色检测内皮细胞特有的Ⅷ因子相关抗原.将HUVECs随机分为对照组、TNF-α刺激组(分别以5、10、20、50μg/L TNF-α刺激)和脂联素干预组(以5、30、50mg/L脂联素进行干预,然后加入终浓度20μg/L的TNF-α).分别采用PCR及ELISA法检测各组IL-8及MCP-1的mRNA和蛋白表达水平.结果 荧光染色结果显示HUVECs胞质中Ⅷ因子相关抗原阳性,证实是血管内皮细胞.HUVECs经TNF-α刺激后,TNF-α刺激组IL-8及MCP-1的蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01),且随着TNF-α浓度的增加,MCP-1和IL-8的蛋白表达量也呈增加趋势.与20μg/L TNF-α刺激组相比,5mg/L的脂联素干预组IL-8及MCP-1的蛋白、mRNA表达均无显著差异;但30、50mg/L脂联素干预组IL-8及MCP-1的蛋白、mRNA表达明显减弱(P<0.01).结论 脂联素可能通过抑制血管内皮细胞趋化因子IL-8及MCP-1的表达来调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥其抗炎、抗动脉粥样硬化的作用.
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融合基因DNA疫苗STxB-VP1和MDC-VP1对CVB3的免疫效果研究
目的 构建融合基因DNA疫苗pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1,并免疫小鼠,观察其免疫效果.方法 从痢疾志贺菌PCR扩增志贺毒素B亚单位(STxB)基因片段,用RT-PcR法从小鼠脾细胞扩增巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)基因片段.将这两个基因片段分别与柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的衣壳蛋白VP1通过一个编码15肽的柔性接头(Linker)相连接,构建真核表达质粒peDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1.120只BAI B/c小鼠随机均分为6组,分别在胫骨前肌注射pcDNA3、pcD-NA3/STxB、pcDNA3/MDC、pcDNA3/VP1、pcDNA3/STxB-VP1和peDNA3/MDC-VP1,每3周1次,共3次.每次免疫后20d检测血清中中和抗体水平,后1次免疫后20d用7LD50的CVB3进行致死性攻击,观察小鼠生存率.结果 成功构建了融合基因疫苗pcD-NA3/STxB-VP1和peDNAa/MDC-VP1.各组小鼠的生存率分别是10%、10%、15%、40%、20%和75%,中和抗体水平及血中病毒滴度均与生存率一致.结论 与pcDNA3/VP1相比,pcDNA3/MDC-VP1可诱导产生高水平的中和抗体,提高小鼠生存率,而peDNA3/STxB-VP1仅诱导出低水平的中和抗体,小鼠的生存率降低.
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脑缺血再灌注的炎症损伤分子机制及吲哚美辛的保护作用
目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注炎症损伤的分子机制,并观察吲哚美辛对脑缺血再灌注炎症损伤的保护作用.方法 36只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,吲哚美辛3、6、9mg/kg组,每组6～8只.应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注24h后处死动物,以TTC染色法测定脑梗死范围和神经功能缺损情况,并分别采用ELISA、Western blot法检测脑组织中IL-8、IL-1β、TNF-α、髓过氧化物酶(MPO)含量以及细胞间黏附分子1(ICAM-1)、E选择素(E-selectin)的表达.结果 吲哚美辛能明显减小模型大鼠的脑梗死范围,减轻神经损伤症状;预先给予吲哚美辛(6、9mg/kg)可降低脑组织中MPO活性及IL-8、IL-1β、TNF-α的水平,并减少ICAM-1、E-selectin的表达(P＜0.05或0.01).结论 吲哚美辛可通过抑制脑缺血再灌注过程中炎症介质的表达和释放,降低脑缺血再灌注所致的炎症损伤.
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白介素8和干扰素α对离体培养的子宫内膜细胞的影响
目的探讨白介素8(IL-8)和干扰素α(IFN-α)对体外培养的子宫内膜异位症患者的子宫内膜细胞的影响.方法收集患者的子宫内膜组织进行体外培养、纯化,采用免疫组织化学的方法鉴定纯化的细胞.在培养基中加入不同浓度的IL-8(0.1、1、5、10、50ng/ml)和IFN-α-2b(10、50、100、1 000、10 000U/ml),对腺上皮细胞进行培养,24h后用MTT法检测细胞增殖的状况.同时,用含有1ng/ml IL-8的培养基对内膜细胞进行培养,24h后用透射电镜观察IL-8对腺上皮细胞和间质细胞的影响.结果细胞的增殖与IL-8的含量有着明显的剂量依赖关系,并且在IL-8浓度为10ng/ml时为显著(P<0.05).电镜观察发现在1ng/ml的IL-8的作用下,内膜细胞功能活跃,分泌旺盛,可见细胞外有胶原产生.而IFN-α-2b对腺上皮细胞的增殖却有明显的抑制作用(P<0.05).结论本研究明确了IL-8和IFN-α-2b对内膜细胞的影响,并且发现IL-8可以使内膜细胞分泌胶原纤维增多,这可能在子宫内膜异位症的发病机制中起着重要作用.IL-8可能是通过自分泌或者旁分泌的方式参与发病的.IFN-α-2b是一类免疫正调因子,它可以调节子宫内膜异位症患者的免疫功能.免疫刺激疗法有可能成为治疗子宫内膜异位症的一种新的方法.
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地奥司明对盆腔淤血所致大鼠慢性非细菌性前列腺炎的影响
目的 探讨地奥司明对大鼠慢性非细菌性前列腺炎(CNP)的作用及可能机制.方法 健康成年雄性SD大鼠32只,随机均分为假手术组(SO组)、前列腺炎模型组(CPM组)、前列腺炎模型+舍尼通治疗组(CPM-P组)、前列腺炎模型+地奥司明治疗组(CPM-D组).假手术组仅开腹暴露前列腺部,其余各组均行前列腺静脉结扎术,形成盆腔淤血,术后35d通过HE染色确认造模成功.地奥司明组给予地奥司明80mg/(kg.d)灌胃,PG组给予舍尼通60mg/(kg.d)灌胃,假手术组和CPM组给予同样体积的5％阿拉伯胶灌胃,2次/d,连续7d,末次给药后1h处死大鼠.ELISA法检测血清白介素10(IL-10)、IL-8、IL-1β、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平,HE染色观察前列腺组织的病理学改变并进行组间比较.结果 地奥司明组和PG组血清IL-1 β、IL-8及NO水平明显低于CPM组(P＜0.05),IL-10水平明显高于CPM组(p＜0.05),MDA水平与CPM组比较无明显差异.HE染色显示,与CPM组比较,PG组及地奥司明组前大鼠前列腺的慢性炎性改变明显减轻.结论 地奥司明对盆腔淤血所致慢性前列腺炎具有与舍尼通相似的治疗作用,其机制可能与通过降低血清IL-1β、IL-8、NO水平,并提高IL-10的水平来减轻局部的炎症反应有关.
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葛根素对火药烟雾致支气管上皮细胞损伤的防护效应
目的 研究火药烟雾损伤支气管上皮细胞模型中炎性细胞因子IL-8和IL-6的变化,以及葛根素对上述损伤的防护作用.方法 用不同浓度(100、50、25、12.5μg/ml)的葛根素预处理细胞后,建立火药烟雾损伤支气管上皮细胞(BEAS-2B)模型.采用MTT法检测火药烟雾对细胞存活率的影响,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-8和IL-6的浓度.结果 以正常对照组细胞存活率作为100％,火药烟雾刺激后,BEAS-2B细胞的存活率下降至48.53％±4.44％,加入葛根素后细胞存活率明显提高,且呈剂量依赖性；细胞培养上清液中IL-8(P＜0.05)、IL-6(P＜0.01)浓度升高.加入葛根素后,IL-8、IL-6浓度逐渐下降(P＜0.05),亦呈浓度依赖性.结论 火药烟雾可致体外培养支气管上皮细胞存活率降低并促进炎性细胞因子IL-8和IL-6分泌,中药葛根素可逆转这种损伤效应.
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PDTC对创伤复合内毒素所致大鼠ALI的保护作用
为观察(PDTC)对创伤复合内毒素所致大鼠急性肺损伤的保护作用并探讨其作用机制,用多功能小型生物撞击机对大鼠右上前胸壁撞击并经尾静脉注射内毒素5mg/kg进行致伤,致伤前经尾静脉注射PDTC 120mg/kg,观察伤后48h死亡率、肺组织MPO、NF-κB活性变化,同时检测TNFα、IL-8 mRNA的表达及蛋白含量.结果发现,PDTC预处理能够显著降低复合损伤后48h大鼠的死亡率,其MPO、NF-κB活性与TNFα、IL-8 mRNA表达被显著抑制.说明PDTC能够通过抑制NF-κB的活化,减少致炎细胞因子基因表达与合成释放,减轻炎细胞浸润,从而对复合损伤大鼠起到保护的作用.
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IL-8在强直性脊柱炎活动期的表达与意义
目的探讨趋化因子IL-8在强直性脊柱炎(AS)活动期的表达及意义.方法通过cDNA微阵列及RT-PCR技术检测活动期AS患者和对照组[健康志愿者、类风湿关节炎(RA)及膝关节外伤患者]的外周血、关节液中单个核细胞和滑膜细胞IL-8的表达,比较AS患者组与各对照组IL-8表达情况的差异.结果在活动期AS患者外周血单个核细胞(PBMC)或关节液单个核细胞(SFMC)中IL-8的表达均明显高于健康志愿者PBMC中的表达,在RA患者PBMC中IL-8的表达亦高于健康志愿者PBMC中的表达,关节滑膜细胞IL-8的表达水平在AS患者也明显高于膝关节外伤患者.结论 IL-8在活动期AS中存在高表达,可能是AS的一种重要的炎症介质,介导AS滑膜甚至其他受累组织炎症的发生和发展.
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免疫吸附清除内毒素休克家兔血浆TNF的实验研究
研究表明,内毒素休克病人血清肿瘤坏死因子(TNF)水平明显增高.TNF不仅对组织有直接损伤作用,而且可诱导或协同内毒素(LPS)诱导其它炎症因子分泌,放大炎症效应,是引起全身炎症反应综合征(SIRS)重要的炎性介质.近年国外研究抗TNF单克隆抗体被动免疫防治内毒素休克取得成功,但被动免疫必须在LPS攻击前或同时进行才有效,临床难以实施.本实验以生物凝胶A作为载体,通过理化处理使之与抗TNF单克隆抗体共价结合,制成免疫吸附柱,运用血液灌流技术,清除循环TNF.
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抗原激活红细胞和白细胞免疫反应主干道的实验研究
目的测定抗原对红细胞和白细胞免疫反应主干道的作用.方法癌细胞(5×106/ml)和(或)卡介苗(0.1mg)或酵母菌(5×108/ml)加到全血细胞悬液0.2ml(或白细胞0.2ml)和枸橼酸抗凝的新鲜血浆0.3ml(或生理盐水0.3ml)37℃温育1h,采用免疫酶联法检测IL-8水平.分组:①抗原(癌细胞或酵母菌或卡介苗)0.2ml加入全血细胞悬液0.2ml和血浆0.3ml;②生理盐水0.2ml加入全血细胞悬液0.2ml和血浆0.3ml;③抗原0.2ml加入白细胞悬液0.2 ml和血浆0.3ml;④生理盐水0.2ml加入白细胞悬液0.2ml和血浆0.3ml.结果癌细胞、卡介苗和酵母菌能激活血液免疫反应,但没有加血浆组中,这些抗原不能激活血液免疫反应,在这些抗原加入全血细胞和血浆组,IL-8激活指数(2.124±0.860)明显高于这些抗原加入白细胞和血浆组的IL-8激活指数(0.390±0.080),P＜0.01.结论结果表明在血液免疫反中存在红细胞和白细胞免疫反应主干道路线图,红细胞和补体在血液免疫反应路线图中具有重要作用.
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红细胞调控白细胞免疫功能新的自然实验研究体系
目的用血液免疫反应路线图实验体系评估红细胞在白细胞免疫活性中的作用.方法将0.3ml血浆加入0.2ml全血细胞悬液(全血细胞组)或0.2ml白细胞悬液(白细胞组)中,37℃温育1h,用免疫酶联法测定IL-8和IL-12水平,流式细胞仪测定白细胞膜CD4、CD8、CD35和CXCR4表达量.结果全血细胞组IL-8和IL-12水平(分别为5.96±4.26、9.84±2.23ρB*pg-1*ml-1)明显低于白细胞组(分别为15.09±9.86、13.59±3.69ρB*pg-1*ml-1,P<0.05),淋巴细胞CD4、CD35、CXCR4表达量(分别为37.79±12.00、154.66±70.00、34.40±20.45)明显高于白细胞组(分别为18.54±11.32、83.26±35.99、16.69±11.09,P<0.01),粒细胞CD35表达量(603.63±257.64)明显高于白细胞组(384.86±174.16,P<0.01).成人全血细胞组淋巴细胞和粒细胞CD35和CXCR4表达量明显高于脐血全血细胞组(P<0.05或P<0.01).结论红细胞是白细胞(包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、树突状细胞、粒细胞等)免疫功能的调控者和指导者,脐血红细胞免疫调节功能明显下降;本研究为红细胞免疫调控活性测定提供了新的近似自然的方法.
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原发性肝癌患者红细胞调控IL-8新的实验体系研究
目的采用血液免疫反应路线图实验体系探讨原发性肝癌患者红细胞调控白细胞分泌IL-8的能力.方法将癌细胞(S180)悬液0.2ml(5×106/ml)或生理盐水0.2ml加至枸橼酸抗凝全血细胞悬液(或白细胞悬液)0.2ml和血浆0.3ml中,37℃水浴1h,酶联免疫法测定反应液中IL-8含量.结果原发性肝癌患者全血细胞实验组、全血细胞对照组、白细胞实验组和白细胞对照组的IL-8含量(pg/ml)分别为376.35±243.96、353.64±271.92、461.27±277.11和424.97±278.93,正常人相应各组则分别为11.36±6.93、4.98±4.35、29.41±30.66和20.77±24.20;原发性肝癌患者全血细胞实验组、白细胞实验组和正常人全血细胞实验组、白细胞实验组的癌细胞激活率(%)分别为0.22±0.24、0.25±0.53、2.49±2.33和0.75±0.21;原发性肝癌患者全血细胞实验组、全血细胞对照组和正常人全血细胞实验组、全血细胞对照组的红细胞IL-8吸附率(%)分别为0.22±0.18、0.17±0.33、1.18±2.29和0.86±0.49.原发性肝癌患者红细胞IL-8激活率及IL-8吸附率均明显低于正常人(P<0.01).结论采用血液免疫反应路线图实验体系测定红细胞对IL-8的调控作用方法简便、实用.原发性肝癌患者红细胞对IL-8含量的调控能力明显下降.
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IL-8基因真核表达载体的构建及其在OVCAR-3卵巢癌细胞中的表达
目的:构建白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)基因真核表达载体,瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞,为进一步探讨其与肿瘤发生发展关系奠定基础.方法:采用RT-PCR法自健康志愿者外周血单个核细胞扩增IL-8基因,构建pcDNA3.1(+)/IL-8重组质粒;脂质体介导将外源基因转入OVCAR-3卵巢癌细胞,半定量RT-PCR、Western印迹及ELISA法鉴定其mRNA及蛋白瞬时表达后,MTT法检测细胞转染前后生长增殖特性的改变,FCM检测细胞周期的变化.结果:重组质粒双酶切电泳结果显示,相应位置(300 bp,5 400 bp)可见2条清晰特异的DNA条带;DNA测序结果进一步显示,重组质粒中插入的基因片段全长 300 bp,编码序列与GenBank报道的基因序列相符,阅读框保持不变;RT-PCR、Western 印迹检测及ELISA检测结果显示,转染后OVCAR-3细胞IL-8 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);MTT检测结果显示,IL-8转染细胞组转染3 d后的光密度值(D值)显著高于未转染细胞组(P<0.05);FCM分析结果显示,OVCAR-3细胞转染IL-8基因后进入S期的细胞比例显著增高,增殖指数也相应上升,与未转染及空质粒转染组细胞相比,差异显著(P<0.05).结论:IL-8基因真核表达载体成功构建并瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞;IL-8可以自分泌方式促进卵巢癌OVCAR-3细胞生长增殖.
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丙泊酚对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞促炎细胞因子mRNA的影响
目的:研究不同浓度丙泊酚(异丙酚)对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA表达的影响.方法:分离巯基乙酸盐诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为7组.A组:阴性对照组;B组:阳性对照组,脂多糖(LPS)10 ng/ml孵育细胞;C组:单用丙泊酚组,500 μg/ml孵育细胞;D,E,F,G组:丙泊酚+LPS组,不同浓度丙泊酚(0.5,5,50,500 μg/ml)孵育2 h后加入LPS 10 ng/ml继续孵育1～4 h.用RT-PCR法检测巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA的水平.结果:在内毒素诱导下,腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA的水平均显著增高;丙泊酚对LPS刺激后TNF-α,IL-6 mRNA表达水平的增高有抑制作用,并呈浓度依赖性;但对LPS刺激下IL-8 mRNA表达水平增高的影响无统计学意义.结论:丙泊酚能在转录水平抑制内毒素刺激下小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子的产生.
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白细胞介素8水平检测诊断难治性肺炎支原体肺炎价值研究
目的:探讨白细胞介素8(IL-8)水平检测诊断难治性肺炎支原体肺炎的临床价值.方法:选择难治性肺炎支原体肺炎40例为观察组,同期在本院儿科门诊体检健康儿童40例为对照组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组IL-8水平,并比较两组IL-8水平的差异.结果:观察组急性期IL-8水平非常显著高于对照组(P＜0.01);恢复期与对照组比较,差异不显著(P＞0.05).结论:IL-8水平检测对难治性肺炎支原体肺炎具有较高的临床诊断和预测价值.
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小儿肺炎血清肿瘤坏死因子、白细胞介素-6、8水平检测的临床意义
目的 探讨血清肿瘤坏死因子(TNF)、IL-6和IL-8在小儿普通肺炎及重症肺炎的水平变化及临床意义,为小儿重症肺炎的防治提供理论依据.方法 入选患儿于入院3d内抽取空腹静脉血约2 mL,取上清液,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测26例重症肺炎患儿血清TNF、IL-6、IL-8的水平,并与20例普通肺炎和16例健康小儿进行对照.组间比较采用SPSS13.0软件统计分析.结果 血清TNF、IL-6、IL-8水平在重症肺炎组[(0.89 ±0.30)ng/L,(298±39) ng/L,(1.01±0.079) ng/L]显著高于普通肺炎组[(0.39 ±0.19) ng/L,(113±26) ng/L,(0.52 ±0.028) ng/L]和健康对照组[(0.21 ±0.11)ng/L,(98±19) ng/L,(0.09 ±0.019)ng/L],普通肺炎组高于健康对照组；重症肺炎与普通肺炎TNF、IL-6、IL-8水平比较(P均＜0.05),与病情危重程度相关(r=0.398).结论 TNF、IL-6、IL-8对重症肺炎病情判断及评估预后有一定参考意义.
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4种刺激剂及抗炎药对HL-60细胞生成IL-8的影响
目的:探讨4种刺激剂脂多糖(LPS)、佛波脂(PMA)、甲酰三肽(fMLP)和钙离子载体A23187及抗炎药物对HL-60细胞生成白细胞介素8(IL-8)的作用.方法:用ELISA方法测定IL-8的含量.结果:LPS对3种浓度HL-60细胞IL-8生成均有刺激作用,PMA,fMLP 0.01,0.1,1,10 nmol·L-1和A23187 0.01,0.1 nmol@·L-1亦有明显促进作用.Asp,Sali,Hcort在1×10-5 mol·L-1和Iso 1×10-6～1×10-4 mol·L-1可明显抑制IL-8生成.结论:本研究建立了可靠的筛选IL-8生成抑制剂的模型,表明异丹叶大黄素具有明显的IL-8生成抑制作用.
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芪黄益肺合剂对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎症因子的影响
目的 观察芪黄益肺合剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症因子及肺组织形态学的影响.方法 单纯熏烟造模,造模后的60只SD雄性大鼠,随机分为正常组、COPD模型组、百灵胶囊对照组及芪黄益肺合剂低、中、高剂量组(均10只),观察各组治疗后大鼠气道病理组织形态学变化及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子a(TNF-a)水平.结果 组织形态学变化:芪黄益肺合剂组较模型组减轻,BALF中IL-8、TNF-a含量较模型组明显降低(P＜0.05).结论 芪黄益肺合剂对COPD大鼠气道炎症有一定抑制作用.
