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检测百日咳毒素的双抗体夹心ELISA法的建立

潘殊男;肖詹蓉;张霖阳;史雨舟;简志华;王宇星;李世慧;张萍

摘要: 目的 建立白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)含量的测定方法.方法 免疫家兔制备高效价抗PT血清,纯化抗PT多克隆抗体并进行酶标记,建立双抗体夹心ELISA法并对其进行验证.结果 建立的方法在0~ 20 ng/ml PT测量区间呈现佳线性,相关系数>0.99,且重复性好.检测百日咳丝状血凝素和黏着素,结果均为阴性,说明该法特异性良好.试验内10次、不同试验间3次测定16.0、8.0、4.0、3.0 ng/ml PT,变异系数为2.8%~9.7%,回收率为95.7%~106.0%,精密度和准确度验证均符合常规质量控制要求,定量限度为3.0 ng/ml.结论 该方法能有效检测百日咳杆菌大罐发酵过程中分泌的PT,为PT质量控制奠定了重要基础.

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