首页 > 文献资料
-
自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的培养及鉴定
目的：培养、鉴定自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞，了解生长特性，为血管增生性疾病的治疗研究提供试验材料。方法：采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞，用倒置相差显微镜观察其生长情况，用免疫组化染色做鉴定，台盼蓝染色进行活力检测，绘制生长曲线、MTT法测定VSMC细胞的成活率、生长、增殖特征。结果：细胞生长曲线近似“S”形，VSMC传代周期为7～10d ，呈典型“峰-谷”状生长，MTT法显示细胞生长第7～9天光密度值变化较明显，免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达，第2代阳性结果强于4代。结论：正确的利用组织块可以简单、经济、高效地培养出VSCM ，为VSCM的治疗提供了理想的细胞模型。随传代过程细胞生物学特性发生改变。
-
不同培养方法对人脐带间充质干细胞的影响
背景：脐带干细胞培养主要来源于足月儿，常用培养方法包括组织贴块法、胰酶消化法，但是对于不同培养方法对脐带间充质干细胞的分离结果尚存在较大的争议。目的：观察不同培养方法对脐带间充质干细胞的影响。方法：取30例足月妊娠剖宫产健康胎儿脐带，采用组织贴壁法和胶原酶-胰酶消化法进行培养，制备细胞悬液，获得人脐带间充质干细胞进行分离培养，在流式细胞仪上测定细胞生长情况。结果与结论：①细胞融合情况：脐带经过组织贴壁法原代培养5d后，细胞开始从脐带组织分离，呈现梭形，培养10 d后细胞融合达到80%，脐带经胶原酶-胰酶消化法培养5 d后，可见少量形态各异的贴壁细胞分布，纤维样细胞培养2周后培养融合才达到80%；②细胞生长情况：两种不同培养方法分离出的脐带间充质干细胞生长情况差异无显著性意义(P>0.05)；③细胞鉴定结果：两种培养方法培养的细胞CD13，CD29，CD44及CD105标志物表达均为阳性。④结果说明：人脐带间充质干细胞采用组织贴壁原代培养法培养成功率高，优于胶原酶-胰酶消化法培养。
-
组织贴块法建立人气道平滑肌细胞体外培养模型的研究
背景:人气道平滑肌已被证实参与气道重塑,气道平滑肌的重塑已成为慢性呼吸道疾病的主要病理改变之一.人气道平滑肌细胞的培养对慢性呼吸道疾病的研究有重要意义.组织贴块法培养人气道平滑肌细胞是原代培养人气遭平滑肌细胞的基本方法之一.目的:采用组织贴块法建立人气道平滑肌体外培养模型.方法:采集人气道组织,用组织贴块法进行人气道平滑肌细胞的原代培养,获得的细胞经形态学和免疫细胞化学染色鉴定.结果:培养的细胞呈典型的"谷峰"状生长,胞浆内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性.结论:组织贴块法易操作,结果可信,并可培养出高纯度活性好的人气道平滑肌细胞,成功建立了体外人气道平滑肌细胞增殖模型,提供了研究慢性呼吸道疾病的细胞培养模型.
-
大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的原代培养和鉴定
目的 探讨大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的原代培养方法,了解生长特性,为血管增生性疾病的治疗研究提供试验材料.方法 采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化染色做鉴定,台盼蓝染色进行活力检测,结果 85%的组织块接种存活,原代培养后2周左右即可传代,至少可以传8代以上,并且细胞形态、生长特点不发生明显的改变,6代的血管平滑肌细胞纯度达97%以上.台盼蓝染色约有94%以上的细胞为活细胞.镜下培养的血管平滑肌细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论正确地利用组织贴块法可以简单、经济、高效地培养出血管甲滑肌细胞,为血管增生性疾病的治疗研究提供了理想的细胞模型.
-
关于动脉平滑肌细胞培养的几个问题
平滑肌细胞异常增殖及其从动脉中层向内膜迁移过程是动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等心血管疾病的重要发病因素.血管平滑肌细胞(VSMC)常用于多种与平滑肌细胞生长增殖有关疾病的发病机理及药物作用机制的研究,提高培养成功率,增强细胞功能稳定性,提高细胞质量是进行VSMC的分子生物学研究的重要条件.作者采用组织贴块法取材于大鼠主动脉中膜进行培养.通过实践和摸索,提出几点看法,现讨论如下.
-
大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞的分离和体外培养
目的 建立大鼠乳鼠背部皮肤组织和尾尖部皮肤组织成纤维细胞的体外培养方法,并比较二者的区别.方法 分别取大鼠乳鼠的背部和尾尖部皮肤组织,利用组织贴块法分离和培养皮肤成纤维细胞,用酶消化法进行细胞传代培养,采用梯度温度冻存细胞.倒置显微镜下观察成纤维细胞的形态,用细胞骨架波形蛋白抗体进行鉴定.结果 光学显微镜下3～5d可见细胞从组织块游出,7d细胞数量增多,10 d可贴满培养瓶壁;且大鼠乳鼠背部和尾尖部来源的皮肤成纤维细胞波形蛋白表达均为阳性.结论 大鼠乳鼠背部和尾尖部来源的皮肤成纤维细胞的生物特点无差别,均可作为皮肤成纤维细胞的取材部位.
-
两种体外培养兔膀胱变移上皮细胞方法的比较
目的 比较组织贴块法和酶消化法体外培养兔膀胱变移上皮细胞的优缺点,探索简单、高效培养膀胱变移上皮细胞的方法,为膀胱组织工程种子细胞的培养提供实验基础.方法 采用组织贴块法和酶消化进行兔膀胱变移上皮细胞体外培养,相差显微镜下观察其生长特点,应用细胞免疫荧光染色对细胞进行鉴定,测定细胞生长曲线了解细胞生长的基本规律.结果 培养的细胞具有上皮细胞的典型形态,生长曲线呈“S”形,角蛋白(CKAEI/AE3)单克隆抗体免疫荧光染色阳性,波形蛋白染色阴性.结论 组织贴块法和酶消化法均能成功培养出兔膀胱变移上皮细胞.组织贴块法原代培养时间长,但是成功率高.酶消化法可以在较短时间内获取大量细胞,但是操作步骤多,细胞容易污染或损伤.
-
大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞的培养方法初探
目的:建立大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞组织贴块法培养模型.方法:分离大鼠胸主动脉外膜,切成1mm×1mm×1mm大小组织块,均匀贴于细胞培养瓶壁上,加入含20％血清的细胞培养液DMEM,置入细胞培养箱于37℃,5％CO2条件下传代培养.结果:第3～4d,少量细胞从组织块周边游出,第6～8d后,细胞围绕组织块生长至亚融合状态,0.25％胰酶消化后传代,可得到较纯成纤维细胞.结论:利用组织贴块法培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞存活率高,操作简单,结果稳定,在血管重塑、血管纤维化、细胞凋亡、细胞表型转变等研究领域具有应用价值.
-
人支气管上皮细胞原代培养方法的对比研究
目的:探索简单有效的人支气管上皮细胞原代培养方法.方法:通过组织贴块法、蛋白酶消化 + 机械刮刷法、纤支镜刷检法分离获得人的支气管上皮细胞,用无血清培养基进行细胞培养.结果:组织贴块法可获得纯度高、存活率高、数量多的支气管上皮细胞,蛋白酶消化+机械刮刷法获得支气管上皮细胞中混杂较多的成纤维细胞,纤支镜刷检法获得的支气管上皮数量少且易老化,其中混杂大量的红细胞,影响上皮细胞的贴壁和生长.结论:组织贴块法是一种简便、有效的培养人的支气管上皮细胞的方法,无血清培养基可提供满意的生长条件,提高上皮细胞的纯度,为进一步研究不同的呼吸系统疾病提供了良好的基础.
