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牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导T淋巴细胞活化、凋亡的体外研究
目的 检测牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对人外周血中T淋巴细胞活化及凋亡的作用.方法 选取10名全身及牙周组织健康受试者,分离外周血中T淋巴细胞,在有/无LPS情况下培养0～96h,用荧光探针(Annexin VFITC、PI、CD69)进行标记,并进行流式细胞仪检测.结果 T淋巴细胞+LPS组Annexin V+/PI-细胞百分数在48h、72h、96h分别为16.36±2.22,27.16±2.81,47.17±4.70.T淋巴细胞组AnnexinV+/PI-细胞百分数在48h、72h、96h分别为7.55±2.76,6.32±1.48,12.03±3.24,两组间存在明显差异(P＜0.01).CD69 +T淋巴细胞+LPS组和CD69+T淋巴细胞组AnnexinV+/PI-细胞百分数除24 h外的4个时间点上都无明显差异(P＞0.05).CD69+淋巴细胞+LPS组Annexin V+/PI-细胞百分数在各个时间点上都明显高于T淋巴细胞+LPS组(P＜0.01).结论 LPS能够诱导人外周血中T淋巴细胞活化,并且能够通过活化促进其凋亡.
关键词： 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 T淋巴细胞 细胞凋亡 -
DHA对P.gingivalis LPS诱导人牙周膜成纤维细胞炎症反应的影响
目的 观察二十二碳六烯酸(DHA)对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(hPDLCs)表达炎症因子的影响.方法 体外培养鉴定hPDLCs,采用MTT法观察不同浓度DHA对hPDLCs细胞活性的影响.根据MTT法的结果,选择对细胞活性没有影响的刺激浓度,分别采用real-time PCR和ELISA技术从基因和蛋白水平检测DHA对P.gingivalis LPS诱导hPDLCs表达炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和IL-1 β的影响.结果 在25～ 100 μmol/L浓度范围内,DHA对hPDLCs细胞活性没有影响,且可呈浓度依赖性下调P.gingivalis LPS诱导hPDLCs表达的炎症因子.结论 在不影响细胞活性的情况下,DHA可在一定浓度范围内,呈浓度依赖性下调P.gingivalis LPS诱导hPDLCs表达的炎症因子,表明DHA具有用于牙周炎抗炎治疗的可能性.
关键词： 二十二碳六烯酸 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 人牙周膜成纤维细胞 炎症反应 -
牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐静脉内皮细胞MMP-9表达影响的研究
目的 采用牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphysomanas gingivalis lipopolysaccharide,P.gingivalis-LPS)感染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察感染的内皮细胞中金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的变化,探讨P.gingivalis与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的关系.方法 体外培养HUVECs,将不同浓度的P.gingivalis-LPS分别加入到单层融合后的HUVECs中,共同培养6、18、24 h,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HUVECs表达MMP-9的量.MTT法检测P.gingivalis-LPS对HUVECs增殖的影响.结果 本研究条件下,应用不同浓度的P.gingivalis-LPS刺激HUVECs 6、18、24 h后,细胞表达MMP-9的量升高(P<0.05).经P.gingivalis-LPS处理后,HUVECs增殖活力较对照组明显下降(P<0.01).结论 P.gingivalis-LPS能够上调HUVECs表达MMP-9的水平,进而加速AS的发生与发展.
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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对树突状细胞成熟及功能影响的体外研究
目的 研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.gingivalis-LPS)的刺激对大鼠树突状细胞(DCs)成熟及功能的影响,为探索DCs在牙周炎的发生发展中的作用机制提供实验依据.方法 采用流式细胞学方法检测P.gingivalis-LPS和大肠杆菌脂多糖(E.coli-LPS)刺激下,CD11c+MHCⅡ+、CD11c+CD80+、CD11c+CD86+和CD11c+CD40+DCs的比率;采用ELISA法检测DCs分泌白介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)和白介素-13(IL-13)的量.采用CCK8法检测与上述DCs共培养的CD4+T细胞的增殖;采用ELISA法检测T细胞分泌IL-2、IFN-γ、IL-10和IL-13的量.在上述的培养系统中加入Toll样受体4(TLR4)抑制剂(polymyxin B,PmB)或TLR2/TLR4抑制剂(oxidation of 1-palmitoyl-2-arachidonyl-sn-glycero-3-phosphoryl-choline,OxPAPC),观察TLR抑制剂对上述DCs成熟及功能的影响.结果 P.gingivalis-LPS与E.coli-LPS均能刺激DCs成熟.TLR4抑制剂明显抑制E.coli-LPS组DCs成熟和抗原提呈功能,对P.gingivalis-LPS组DCs成熟和抗原提呈功能没有显著抑制.TLR2/TLR4抑制剂对P.gingivalis-LPS组DCs成熟和抗原提呈功能显著抑制.P.gingivalis-LPS组DCs分泌IL-12和IFN-γ 的量低于E.coli-LPS组(P<0.05);P.gingivalis-LPS组DCs分泌IL-10和IL-13的量高于E.coli-LPS组(P<0.05).与P.gingivalis-LPS和E.coli-LPS共培养的DCs均能促进CD4+T细胞增殖.与P.gingivalis-LPS组DCs共培养的T细胞分泌IL-2和IFN-γ 的量低于E.coli-LPS组(P<0.05);其分泌IL-10的量高于E.coli-LPS组(P<0.05).结论 P.gingivalis-LPS能促进DCs的成熟和抗原提呈功能.P.gingivalis-LPS刺激下的DCs促进Th2型免疫应答;E.coli-LPS刺激下的DCs促进Th1型免疫应答.P.gingivalis-LPS通过TLR2通路刺激DCs成熟;E.coli-LPS通过TLR4通路刺激DCs成熟.
关键词： 树突状细胞 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 大肠杆菌脂多糖 细胞表型 抗原提呈 -
P.g-LPS诱导人脐静脉内皮细胞损伤及对NF-κB/iNOS/NO信号通路的影响
目的:研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增值和凋亡影响,并探讨其中的细胞信号机制.方法:实验分为对照组、5μg/mL组和10μg/ml组P.g-LPS,分别与HUVECs共培养.应用CCK-8法流式细胞术、Western Blot、硝酸酶还原法等测定HUVECs的增殖、凋亡、NO生成量和NF-κB p65、iNOS蛋白的表达.结果:与P.g-LPS共培养24 h后HUVECs增殖活力较对照组下降(P<0.05);HUVECs早期凋亡较对照组上升(P<0.05),并随着P.g-LPS浓度增加,HUVEC早期凋亡比例升高(P<0.05).同时NO、NF-κB蛋白、iNOS蛋白的表达上调(P<0.05).结论:P.g-LPS可诱导HUVECs增殖凋亡失衡,其作用机制可能是通过NF-κB/iNOS/NO通路介导的.
关键词： 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 人脐静脉内皮细胞 凋亡 牙周炎 动脉粥样硬化 -
Pg－lps对大鼠血管平滑肌细胞增殖和ALP活性的影响
目的：观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg－lps）对体外培养大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用组织块贴壁法培养大鼠VSMCs，传代培养并鉴定。Pg－lps （1～10000 ng／mL）干预VSMCs 0．5～4 d，采用CCK－8法和碱性磷酸酶试剂盒测定其增殖和ALP活性。结果：1 d后（1－10000 ng／mL）Pg－lps均显著促进VSMCs增殖，并随时间的延长，促进作用越明显；而（1 ng／mL、1μg／mL）Pg－lps在0．5～4 d均显著促进VSMCs的ALP活性，随着时间的延长促进作用更明显，且4 d时1μg／mL较1 ng／mL对ALP活性促进作用更明显。结论：Pg－lps能促进VSMCs的异常增殖；还可能通过促进VSMCs的ALP活性而影响其钙化过程，进而提示Pg－lps对心血管疾病的发生发展可能有重要作用。
关键词： 血管平滑肌细胞 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 细胞增殖 ALP活性 -
牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐静脉内皮细胞表达趋化因子IL-8和MCP-1的影响
目的 观察牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)产生趋化因子的影响,探讨P.gingivalis在动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)病变过程中的可能作用.方法 复苏P.gingivalis菌株(ATCC 33277)并于厌氧条件下培养,采用热酚水法提取P.gingivalis-LPS,并加以纯化.应用红外线光谱、鲎实验对提取的脂多糖予以鉴定.体外培养HUVECs并加入不同终浓度的P.gingivalis-LPS,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测共同培养2、6、24 h后,HUVECs分泌IL-8和MCP-1的量.结果 本研究条件下,应用不同浓度P.gingivalis-LPS刺激HUVECs 2、6、24 h后,细胞表达IL-8和MCP-1蛋白水平升高.结论 P.gingivalis-LPS能上调HUVECs的IL-8和MCP-1表达.
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云南白药在P.g-LPS诱导的炎症环境下对人牙髓细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-1β的影响
目的 研究云南白药在P.g-LPS诱导的炎症环境下对人牙髓细胞分泌IL-6、IL-lβ、TNF-α的影响,探索云南白药对牙髓炎抑制的影响.方法 采用改良组织块法体外培养人牙髓细胞,免疫组化鉴定细胞来源,10μg/mL的P.g-LPS刺激人牙髓细胞24 h后,分3组,空白对照组1%FBS培养液,阳性对照组10μg/mL P.g-LPS,白药组10μg/mL云南白药.于刺激结束,换液后1 d、3 d时ELISA检测培养上清中IL-6、IL-lβ、TNF-α水平,同时换液3 d时定量real-time PCR检测TNF-α、IL-6、IL-lβmRNA的表达.结果 成功培养HDPCs,波形丝蛋白表达阳性,角蛋白为阴性.P.g-LPS刺激人牙髓细胞1 d时,3组之间TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达无差别,换液后1 d和3 d,空白对照组和白药组低于阳性对照组(P<0.05),白药组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).然而换液后3 d白药组TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达低于空白对照组(P<0.05).结论 在P.g-LPS诱导的炎症环境下,云南白药作用3 d时,对HDPCs的TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白分泌没有明显抑制作用,但抑制TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达.
关键词： 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 人牙髓细胞 TNF-α IL-6 IL-1β
