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CCK-B受体拮抗剂对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断时海马神经元[Ca~(2+)]i、CaM活性和CaMKⅡα表达的影响
目的 探讨胆囊收缩素-B(CCK-B)受体拮抗剂--CR-2945对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断时海马神经元内游离Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]i)、钙凋蛋白(CaM)活性和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠45只,体重180～240 g,随机分为9组(n=5):吗啡依赖组(MD组)采用剂量递增法建立吗啡依赖大鼠模型;生理盐水组(Ns组)以等容量生理盐水替代吗啡;纳洛酮催促戒断组(NPW组)于末次皮下注射吗啡后1 h,腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;伏核给药组(NA组)、杏仁核给药组(A组)和侧脑室给药组(LCV组)于末次皮下注射吗啡后1 h,相应靶核团注射10μg CR-2945,30 min后腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;急性腹腔给药组(ACA组)于末次皮下注射吗啡后1 h,腹腔注射1 mg/kg CR-2945,30 min后腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;慢性腹腔给药组(ACC组)给予吗啡的同时,腹腔注射1 mg/kg CR-2945,连续6 d,末次给药后30 min腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;安慰剂组(P组)以生理盐水替代CR-2945,其余处理同LCV组.处理完毕后冰浴下分离海马,采用流式细胞技术检测海马神经元内[Ca~(2+)]i和CaM活性,采用Western blot法测定CaMKⅡα表达.结果 与NS组比较,MD组[Ca~(2+)]i和CaM活性升高,CaMKⅡα表达上调(P<0.01);与MD组比较,NPW组[Ca~(2+)]i和CaM活性降低,CaMKⅡα表达下调(P<0.01);与NPW组比较,ACA组、ACC组和LCV组[Ca~(2+)]i和CaM活性升高,CaMKⅡα表达上调(P<0.01),NA组、A组和P组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 CCK-B受体拮抗剂通过升高海马神经元内[Ca~(2+)]i、CaM活性,上调CaMKⅡα表达,从而抑制吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断反应.
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黏着斑激酶siRNA抑制结肠癌细胞株侵袭的机制研究
目的 研究胃泌素-胆囊收缩素2受体(CCK2R)-黏着斑激酶(FAK)信号通路在人结肠癌细胞侵袭过程中的作用,探讨通过FAK siRNA降低FAK表达抑制癌细胞侵袭的可行性. 方法 使用CCK2R的真核表达载体pCR3.1/CCK2R,转染人结肠癌细胞株Colo320, 使用RT-PCR检测细胞CCK2R表达情况.设计并合成针对FAK的siRNA,转染细胞,抑制FAK表达;使用胃泌素刺激结肠癌细胞,免疫沉淀和蛋白质印迹法检测不同情况下FAK第397位酪氨酸(tyr-397)磷酸化表达情况;Boyden小室法检测相应细胞侵袭力变化. 结果 真核表达载体pCR3.1/CCK2R可以有效增加CCK2R表达,增加CCK2R可以增强胃泌素促FAK tyr-397 磷酸化和细胞侵袭力作用.使用RNA干扰技术可以明显降低细胞内FAK tyr-397 磷酸化,并抑制胃泌素促结肠癌细胞侵袭作用. 结论 胃泌素-CCK2R-FAK信号通路在结肠癌细胞侵袭和转移过程中发挥关键作用,阻断FAK表达可以有效抑制胃泌素促结肠癌细胞侵袭作用.
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胆囊收缩素受体B在人体多种肿瘤组织和细胞中的表达
目的：探讨胆囊收缩素受体B（CCK-BR）在人体多种肿瘤组织和细胞中的表达情况。方法使用逆转录-PCR（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）方法检测人胃癌细胞 AGS 和 SGC-7901、人肝癌细胞 HepG-2、人神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y、人肺癌细胞A549和NCI-H446、人前列腺癌细胞DU145、人膀胱癌细胞T24共计8种肿瘤细胞株中CCK-BR mRNA及蛋白的表达。免疫组织化学或免疫细胞化学法检测临床标本胃癌组织、乳腺癌组织、宫颈癌组织、膀胱癌组织、肺癌组织、肝癌组织及 AGS、SGC-7901细胞中 CCK-BR 的表达。结果人体8种肿瘤细胞株均表达 CCK-BR mRNA和蛋白，并定位在细胞质和细胞膜，6种肿瘤组织中 CCK-BR表达阳性。结论 CCK-BR在人体多种肿瘤组织和肿瘤细胞中表达。
