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美凯纯简便快速的微生物检测
微生物实时荧光光电检测技术是近年来新兴的细菌、霉菌、酵母菌快速检测技术.它将改进后的传统培养分离技术、染色技术、传感和荧光检测技术以及计算机控制的模块化技术合为一体,大大简化了传统微生物的检测方法,将检测时间从数天缩短为数小时.其代表产品BioLumix全自动实时微生物荧光光电检测系统正是基于上述技术推出的一种全自动检测系统.
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传统结核杆菌细菌培养法的现状分析
传统结核杆菌细菌培养法,培养生长繁殖速度过于缓慢,初次培养需4～8周,次代培养仍需2～4周,培养时间长,难以得到理想的检出速度,这是传统结核杆菌细菌培养在技术上一直不能攻克的主要的难题,引致结核病的病原诊断慢、治疗周期长;结核病误诊、漏诊、耐药菌增多;结核病无病原依据、诊治不规范、流行呈上升趋势等三大问题非常严峻.揭示只有探索到结核杆菌快速细菌培养法,推动结核杆菌快速细菌培养普及到基层医院,这样困扰三大问题就会迎刃而解.
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2种气管黏膜上皮细胞体外培养技术的研究
目的 为以猪气管黏膜上皮为细胞模型的研究奠定物质基础,进一步探讨猪气管黏膜上皮细胞的体外传统培养和气液界面培养技术,从而使2种培养技术优势互补.方法 对猪气管上皮分离、纯化、培养和传代,并探索上皮细胞佳冻存复苏条件;复苏后的气管上皮细胞进行气液界面培养,绘制细胞生长曲线和观察细胞纤毛生发情况.利用免疫组化法鉴定上皮细胞.结果 4步纯化法可以得到高纯度的气管上皮细胞.使用胎牛血清、DMEM/F12培养液和DMSO的体积分数为50%、40%和10%的冻存体系保存的气管上皮,复苏后细胞存活率平均可达89%.优化后的传统方式培养的上皮细胞可连续传代到第8代,但从第2代开始便观察不到纤毛,转换成气液界面连续培养2代后重新生发纤毛,细胞存活期延长.免疫组化结果显示分离培养细胞为上皮细胞.结论 成功建立了2种猪气管上皮细胞培养技术,并找到适宜的气管上皮细胞冻存条件,节省了不断原代取材的成本和时间,并成功实现传统培养细胞冻存复苏后很快适应气液界面的培养并恢复细胞的天然结构,为猪气管黏膜上皮相关研究提供丰富的细胞来源.
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多重实时PCR检测腹膜透析相关性腹膜炎致病菌的应用分析
目的：探讨多重实时PCR( RT-PCR)检测腹膜透析相关性腹膜炎( PDAP)致病菌的应用价值。方法收集70例患者的腹透液标本,分别行传统细菌培养与荧光染料法细菌通用引物RT-PCR检测。根据70例样本培养结果及相关参考文献,选取常见的6种PDAP致病菌作为检测菌,设计各检测菌特异引物,分别采用单一及多重荧光探针法 RT-PCR,针对通用RT-PCR法检出的阳性样本进行检测。结果70例标本中传统培养46例阳性,阳性率为65．71%；通用RT-PCR法57例阳性,阳性率为81．43%,两种检测方法阳性率差异有统计学意义( P<0．05)。在6种常见致病菌检测中,对通用RT-PCR法检出的57例阳性样本行单一及多重RT-PCR检测,两者均检出38例样本在6种检测菌范围内,两种方法检测结果一致,1例RT-PCR结果与培养结果不符,剩余19例菌种在6种检测菌范围以外。通用 RT-PCR可在4~6h内明确是否存在细菌感染；针对6种致病菌的检测,单一RT-PCR可在6~9 h内完成,多重RT-PCR仅需3 h即可明确菌种。结论与传统培养法比较, RT-PCR方法有较高灵敏性和特异性,多重RT-PCR因可同时检测多种致病菌,较单一RT-PCR更加迅速、简便、经济。
关键词： 腹膜透析相关性腹膜炎 致病菌 实时荧光PCR 传统培养 -
细胞三维培养与传统细胞培养的应用现状
细胞技术作为医学生物技术中核心、基础的技术[1-2] ,已成为当今医学科研工作的必备技能,广泛应用于生命科学的众多领域,与其他学科领域的交叉研究也日趋增多[3-4]. 传统细胞培养通常为细胞生长在单层二维的玻璃或塑料平面上,属于二维培养,具有较好的伸展性,但不能充分真实模拟体内生长模式,终影响细胞增殖、分化、凋亡、基因和蛋白表达等细胞过程. 与二维培养系统相比,三维细胞培养系统能更准确地反映细胞在组织中的实际微环境,但三维细胞因为细胞呈现出层叠状而不能有效地使光穿过,导致细胞观察与二维细胞培养中的可视化存在明显差异,故三维细胞模型的检测在成像、分析、定量和自动化方面远不如传统细胞模型方便,有待于技术的进一步发展提高. 两种培养系统存在各自的优点和不足,现将细胞三维培养与传统细胞培养技术研究应用现状作如下综述,以期为细胞培养的选择提供依据.
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两种方法定量分析肝硬化患者肠道菌群改变的比较
目的 观察肝硬化患者肠道菌群改变,探讨传统培养法与实时定量PCR检测结果的一致性.方法 纳入73名肝硬化患者及55名健康人,对其粪便细菌进行传统培养及定量PCR,比较两种方法检测结果的一致性.结果 细菌培养结果显示,与正常对照组比较,肝硬化患者肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母菌数量显著增加(P分别为0.004、0.002、0.044、0.026),拟杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、梭菌数量显著降低(P分别为0.029、0.046、0.045、0.045).定量PCR结果显示,肝硬化组肠杆菌、肠球菌数量显著增高(P分别＜ 0.01、0.012),乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌及梭菌数量显著降低(P均为＜0.01).结论 肝硬化患者存在不同程度肠道菌群失衡,可能影响病情发展.传统细菌培养与荧光定量PCR的结果具有良好的一致性,但定量FCR更精确、灵敏、省时、省力.
