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GDNF、GFRα1和RET在先天性直肠肛门畸形中的表达及意义
目的：探讨神经胶质细胞源性的神经营养因子（GDNF）、其受体GFRα1和原癌基因RET在先天性直肠肛门畸形肠壁组织中的表达及意义。方法收集经手术治疗的直肠肛门畸形患者12例，男8例，女4例，年龄3 d~2岁，高位无肛2例，中位无肛4例，低位无肛6例。采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测12例患儿肠壁盲端组织和距离盲端3 cm处的组织标本中RET、GDNF和GFRα1的表达。结果高、中、低位无肛患儿盲端标本中均缺乏神经节细胞，且RET、GDNF和GFRα1在盲端中均未见表达；距离盲端3 cm处，高、中、低位无肛组织中有神经节细胞，存在RET、GDNF和GFRα1的表达，中、低位无肛组织中呈棕褐色为强阳性，而高位无肛呈淡黄色和棕黄色为弱阳性或者阳性；术后功能随访，高位无肛中1例出现污粪，1例出现稀便不能控制，无肛门失禁情况。中、低位无肛中有1例出现直肠黏膜脱出，经坐浴肛门护理好转，1例出现排气时偶有污便，其余8例术后排便功能未见异常。结论先天性直肠肛门畸形患儿的直肠末端中神经营养因子GDNF、GFRα1和RET的低表达可能与直肠肛门畸形术后排便功能不良关系密切。
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GFRα3在神经病理性痛大鼠冷痛觉过敏时背根神经节TRP M8表达及膜转运中的作用
目的 评价神经胶质细胞源性神经营养因子家族受体α3(GFRα3)在神经病理性痛大鼠冷痛觉过敏时背根神经节瞬时感受器电位M8(TRPM8)表达及膜转运中的作用.方法 鞘内置管成功的健康成年雄性SD大鼠32只,10~12周龄,体重250~280 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术+GFRα3 dsRNA组(Sham+dsRNA组)、假手术+GFRα3 siRNA组(Sham+siRNA组)、神经病理性痛+GFRα3 dsRNA组(NP+dsRNA组)和神经病理性痛+GFRα3 siRNA组(NP+siRNA组).采用坐骨神经慢性束缚性损伤法建立神经病理性痛模型.于术后10~13 d时,Sham+dsRNA组和NP+dsRNA组鞘内注射对照的GFRα3 dsRNA,Sham+siRNA组和NP+siRNA组鞘内注射正义链进行2′甲基化修饰和5′胆固醇修饰的GFRα3 siRNA,10 μg∕20 μl,每天1次,连续4 d.于术前1 d、术后10、11、12、13 d(鞘内注射前)及术后14 d时测定冷板抬足次数、机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).后一次痛行为学测试后处死大鼠,取术侧L4-6背根神经节,采用Western blot法测定GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8的表达水平,并计算膜蛋白与总蛋白TRPM8表达水平的比值(m∕t比值).结果 与Sham+dsRNA组比较,NP+dsRNA组和NP+siRNA组术后冷板抬足次数增多,MWT降低,TWL缩短,NP+dsRNA组背根神经节GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8表达上调,m∕t比值升高,NP+siRNA 组背根神经节GFRα3表达下调(P<0.01),总蛋白和膜蛋白TRPM8表达水平及m∕t比值差异无统计学意义(P>0.05);与NP+dsRNA组比较,NP+siRNA组术后冷板抬足次数减少,背根神经节GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8表达下调,m∕t比值降低(P<0.01),MWT和TWL差异无统计学意义(P>0.05).结论 背根神经节GFRα3可上调TRPM8表达及增强其膜转运,该作用可能参与了神经病理性痛大鼠冷痛觉过敏的维持机制.
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慢传输型便秘大鼠结肠组织GFRα1、RET、NCAM的表达以及外源性GDNF的影响
背景:研究证实胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)既可抗神经元凋亡,又可阻止神经细胞胞体萎缩,从而改善肠道动力,但其具体机制目前仍未完全明了.目的:研究慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织中GFRα1、RET、NCAM的表达以及外源性GDNF对其的影响,从而探讨GDNF保护STC大鼠结肠神经元的途径及其信号转导机制.方法:44只大鼠随机分为对照组和模型组,以大黄灌胃建立STC模型.造模成功后,对照组进一步分为正常对照组和GDNF组,模型组分为STC组和STC+GDNF组.GDNF组和STC+GDNF组大鼠尾静脉注射rhGDNF,其余两组注射0.9％NaCl溶液.1周后处死大鼠,采用免疫组化法检测结肠组织中GFRα1、RET、NCAM表达.结果:STC组GFRα1 、NCAM表达较正常对照组显著减弱(P＜0.05);STC组大鼠以GDNF 干预后,GFRα1、NCAM表达较STC组显著增强(P＜0.05)；GDNF组GFRα1、NCAM表达亦较STC组、正常对照组显著增强(P＜0.05).RET仅在正常对照组结肠组织少量表达,其余各组均无表达.结论:长期使用大黄可减弱结肠组织中GFRα1、NCAM的表达,外源性GDNF可能通过GDNF-GFRα1NCAM途径而非GDNF-GFRα1-RET途径进行信号转导,从而保护结肠神经元.
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胶质细胞源性神经营养因子受体基因GFRα1在小鼠精子再生过程中的表达和意义
目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)受体基因GFRa1在小鼠精子再生过程中的表达和意义.方法:间隔24 d 2次腹腔注射白消安建立小鼠精子再生动物模型.根据第二次给药后的不同时间随机分为1、2、3、4、6、8、10周共7组(8只/组),8只正常小鼠作对照组,分别于相应时点取材,进行光镜和电镜的研究.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时间GFRa1 mRNA的表达变化;并采用原位杂交技术检测GFRa1 mR-NA表达定位.结果:2次给药后第1～2周,GFRa1 mRNA的表达明显增强,在第2周达到高峰;在给药后第3～4周明显下降,比正常表达水平明显减弱,并在第4周达到低谷;随后几周内表达又逐渐增强,于第10周恢复到正常水平.原位杂交显示,GFRa1主要表达于未分化的精原细胞.结论:在小鼠精子再生过程中,GFRa1的表达参与调节精原干细胞的去向调节,高表达时促进其进行自我更新,低表达时降低对GDNF的反应性,促进其分化,并产生成熟的精子.
关键词： 胶质细胞源性神经营养因子受体 精原干细胞 基因表达
