首页 > 文献资料
-
应用FITC系统建立非均衡竞争游离甲状腺素化学发光法
[目的]制备抗人甲状腺素多克隆抗体并应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)系统建立非均衡竞争FT4化学发光法.[方法]以T4-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰兔,制备抗人T4多克隆抗体,亲和层析法吸附掉与3-碘-L-甲状腺原氨酸(3-iodo-L-tyrosine)、3,5-二碘-L-甲状腺原氨酸(3,5-diiodo-L-tyrosine)、D-三碘甲状腺原氨酸(D-T3)、L-三碘甲状腺原氨酸(L-T3)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)有交叉反应多抗,纯化特异性的抗人T4多克隆抗体并用FITC标记T4类似物,用抗FITC抗体包被微孔板.反应时,将FT4校准品或样品、FITC-T4类似物、T4抗体-HRP依次加入包被有抗FTTC抗体的化学发光板中,FITC -T4类似物与FT4校准品或样品,非均衡竞争结合T4抗体-HRP,从而在微孔板上形成免疫反应复合物T4类似物-T4抗体-HRP,通过酶促化学发光反应,就可以显示出与样品FT4浓度负相关的相对光单位(relative light unit,RLU),建立FT4化学发光检测方法.[结果]抗体经酶联免疫吸附实验证明对T4具有高度特异性,与3-iodo-L-tyrosine、3,5-diiodo-L-tyrosine、L-T3、D-T3、rT3无交叉反应.该方法建立的试剂盒标准曲线的线性相关系数不小于0.9900;分析灵敏度为0.9 pmol/L;线性检测范围0.9～130 pmol/L;精密度测试批内变异系数CV＜ 10％;与进口发光免疫分析系统做线性相关比较,线性回归系数为1.0852,相关系数为0.9673,临床符合率良好；本方法建立的试剂盒经加速稳定性试验37℃放置7d与2～8℃放置7d无异.[结论]综上所述,应用FITC系统建立的非均衡竞争FT4化学发光免疫分析灵敏度高、特异性好适于临床诊断应用.
-
应用FITC系统建立非均衡竞争总甲状腺素(TT4)化学发光法
目的 建立可广泛应用于总甲状腺素(TT4)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人甲状腺素(T4)多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记T4类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-T4类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,血清标本经处理后使T4均呈游离状态,固相抗原与血清T4竞争结合抗T4抗体-HRP,建立化学发光法(CLIA)血清TT4检测系统(FITC系统),进行方法 学评价,并与T4-牛血清γ球蛋白直接包被系统(非FITC系统)和罗氏公司Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1~320 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%,优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果 具有良好的相关性(r=0.916 9).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争TT4 CLIA分析系统灵敏度高、特异性,可用于临床标本的检测.
-
应用FITC系统建立非均衡竞争雌二醇(E2)化学发光法
目的 建立能广泛应用于雌二醇(E2)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人E2多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记E2类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-E2类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,固相抗原与血清中E2竞争结合抗E2抗体-HRP,建立化学发光法(CLIA)血清E2检测系统(FITC系统),进行方法 学评价,并与E2-牛血清清蛋白直接包被系统(非FITC系统)和罗氏公司Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为10~3 000 pg/mL,灵敏度为10 pg/mL;批内、批间变异系数均小于5%,优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果 的相关系数为0.978 0,测定结果 差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功建立基于FITC系统的非均衡竞争E2检测CLIA系统,精密度、灵敏度等指标均符合临床要求,可用于临床标本检测.
-
应用FITC系统建立非均衡竞争睾酮(T)化学发光法
目的 建立可广泛应用于睾酮(T)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人T多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记T-类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-T类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,固相抗原与血清中T竞争结合抗T抗体-HRP,建立化学发光法(CLIA)血清T检测系统(FITC系统),进行方法 学评价,并与直接用T-牛血清清蛋白包被系统(非FITC系统)和罗氏公司Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.05~20 ng/mL,灵敏度为0.05 ng/mL;批内、批间变异系数均小于5%,优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果 的相关系数为0.973 2,测定结果 差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功建立基于FITC系统的非均衡竞争T检测CLIA系统,精密度、灵敏度等指标均符合临床要求,可用于临床标本检测.
-
应用FITC系统建立非均衡竞争游离雌三醇(E3)化学发光法
目的 建立可以广泛应用于游离雌三醇(E3)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记雌三醇类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-E3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,并与血清中的free E3竞争结合抗E3抗体-HRP,建立化学发光血清free E3检测系统(FITC系统),进行方法学评价,并与E3-牛血清白蛋白直接包被系统(非FITC系统)和西门子ADVIA CentaurXP系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1～40 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%优于非FITC系统;与西门子ADVIA CentaurXP系统检测结果有良好的相关性(r=0.965 7).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争free E3化学发光免疫分析系统灵敏度高、特异性强,可用于临床标本的检测.
-
应用FITC系统建立非均衡竞争孕酮(P)化学发光法
目的 建立可以广泛应用于孕酮(P)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记孕酮类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-P类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,并与血清中的P竞争结合抗P抗体-HRP,建立化学发光血清P检测系统(FITC系统),进行方法学评价,并与P-牛血清白蛋白直接包被系统(非FITC系统)和罗氏Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1～60 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果有良好的相关性(r= 0.961 9).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争P 化学发光免疫分析系统灵敏度高、特异性强,可用于临床标本的检测.
-
建立非均衡竞争叶酸定量测定的化学发光免疫分析法
目的 制备抗人叶酸(FA)抗血清并应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立可常规应用的定量检测血清 FA的化学发光免疫分析法.方法 FITC-FA类似物、FA抗体-HRP依次加入包被有抗 FITC抗体的化学发光板,形成FITC抗体-FITC-FA类似物-FA抗体-HRP的免疫反应复合物;并进行方法学评价,同时与非 FITC检测系统及罗氏化学发光免疫分析系统检测结果进行比较.结果 成功制备FA抗血清并建立基于FITC系统的非均衡竞争化学发光免疫法;经方法学评价,自研法的线性相关系数绝对值>0.9900,灵敏度1.21 nmol/L,线性范围1.21~38.80 nmol/L,批内变异系数<5%,自研法定量检测性能优于非FITC系统;与罗氏检测系统结果有较好相关性(R=0.9081).结论 建立的非均衡竞争定量检测血清FA化学发光免疫分析法,具有良好的检测灵敏度与特异性,可应用于常规检测.
-
应用FITC系统建立非均衡竞争游离三碘甲腺原氨酸(FT3)化学发光法
目的 制备抗人T3多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat,FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)的方法.方法 以T3-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化并联接辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP).用FITC标记T3-类似物.采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,通过非均衡竞争法原理,固相抗原与血清中FT3竞争结合抗T3抗体-HRP,通过标准曲线计算FT3浓度,建立方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(Bovine serum gamma globulin,BGG)包被(非FITC系统)的检测系统相比较.将本方法应用于临床120份血清标本的检测,定量结果与德国罗氏2010电化学发光全自动免疫分析系统( Elecsys 2010)定量结果进行比较.结果 抗体经酶联免疫吸附实验证明对T3、具有高度特异性.应用FITC系统建立的非均衡竞争化学发光免疫分析标准曲线的线性R＞0.99,线性范围0.25～50 pg/ml,分析灵敏度为0.25 pg/ml,精密度测试批内、批间变异系数CV＜5％,检测结果优于非FITC系统的检测.对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys 2010定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数r =0.962 2,两者的测定值无显著性差异.结论 制备的抗人T3多克隆抗体特异性强,以FITC系统为平台建立的非均衡竞争FT3检测化学发光法具有精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,达到临床测定的需求,可代替进口化学发光产品用于临床样本的检测.
-
建立非均衡竞争叶酸定量测定的化学发光免疫分析法
目的 制备抗人叶酸(FA)抗血清并应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立可常规应用的定量检测血清FA的化学发光免疫分析(CLIA)法.方法 FITC-FA类似物、FA抗体-HRP依次加入包被有抗FITC抗体的化学发光板,形成FITC抗体-FITC-FA类似物-FA抗体-HRP的免疫反应复合物;并进行方法学评价,同时与非FITC检测系统及罗氏化学发光免疫分析系统检测结果进行比较.结果 成功制备FA抗血清并建立基于FITC系统的非均衡竞争CLIA;经方法学评价,自研法的线性相关系数绝对值大于0.990 0,灵敏度1.21 nmol/L,线性范围1.21～38.80 nmol/L,批内变异系数小于5％,自研法定量检测性能优于非FITC系统;与罗氏检测系统结果有较好相关性(R=0.908 1).结论 建立的非均衡竞争定量检测血清FA的CLIA法,具有良好的检测灵敏度与特异性,可应用于常规检测.
