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L-型钙电流在血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大中的作用
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠肥大心肌细胞中L-型钙电流的功能在分子水平改变.方法:在血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠肥大心肌细胞中,应用全细胞膜片钳技术检测L-型钙电流的密度及门控动力学变化；应用半定量RT-PCR技术检测L-型Ca2+通道α1C亚单位mRNA的表达量.结果:AngⅡ在引起新生大鼠心肌肥大的同时,也增加了心肌细胞Ica,L电流密度,但并不影响Ica,L电流的激活、失活和复活特征.另外,AngⅡ还增加了L-型Ca2+通道α1C亚单位mRNA表达量.AngⅡ的这些作用都可被其1型受体阻断剂losartan所抑制.结论:在AngⅡ诱导的新生大鼠肥大心肌中,L-型Ca2+通道的功能在分子水平发生了显著变化,这些变化是通过激活心肌细胞上AngⅡ1型受体所介导的.
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葛根素对脑缺血再灌注损伤神经元L-型钙通道的影响
目的 研究脑缺血再灌注损伤后,不同时点大鼠海马Cal区锥体细胞L-型Ca2+通道的活动变化及葛根素对它的影响.方法 采用改良Pulsinelli四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型,实验随机分为3组:①正常组;②模型组:又分为6个时间点,各时间点均为1组;③葛根素组:6个时间点分组同模型组.在各时间点急性分离出成年大鼠海马Cal区锥体细胞后,采用膜片钳细胞贴附模式记录同一钳制电压下离子通道活动情况.结果 在观测的时间点内,再灌注24 h时的开放概率升高(P＜0.05);再灌注0 h(缺血组)、6 h、12 h、24 h时通道平均开放时间显著高于正常组(P＜0.05);再灌注0.5 h通道电流幅度明显高于正常组(P＜0.05).用药组开放概率无一高于正常组水平.通道开放概率在再灌注1 h、12 h下降(P＜0.05);各个时点通道电流幅度,在用药前后均没有明显的变化(P＞0.05);再灌注0.5 h组、6 h组、12 h组、24 h组用药后,通道平均开放时间明显下降(P＜0.05).结论 在不同时点,脑缺血再灌注损伤对L-型Ca2+通道影响的主要机制不同.葛根素可以抑制脑缺血再灌注损伤后大鼠海马Cal区锥体细胞L-型钙通道.提示临床上葛根素治疗缺血性中风可能与其抑制神经细胞L-型钙离子通道的开放防止钙超载有关.
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抗钠钙交换体特异位点抗体对大鼠单个心室肌细胞钙瞬变的影响
目的:观察抗钠钙交换体(Sodium calcium exchanger,NCX)特异位点124 HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145抗体对正常成年大鼠心室肌细胞钙瞬变的影响.方法:利用Langendorff灌流方法,分离得到单个大鼠心室肌细胞;负载荧光染料Fura-2/AM和2%牛血清白蛋白后,利用离子影像分析系统记录激发光为340 nm和380 nm时心室肌细胞成对系列图像,计算钙瞬变峰值(F340/F380)、细胞钙恢复90%时程(TR90)以及钙敏感性(F340/F380与细胞缩短数值的比值).结果:抗NCX特异位点抗体可以增加正常成年大鼠单个心室肌细胞F340/F380,缩短TR90,对钙敏感性无显著影响;尼卡地平和KB-R7943分别预处理心室肌细胞可以抵消大部分抗体对F340/F380和TR90的增加或缩短效应,联合使用二者预处理心室肌细胞后,该抗体对钙瞬变不再有显著影响.结论:抗NCX特异位点124 HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145抗体可以增加心室肌细胞钙瞬变峰值,同时缩短细胞钙恢复时程,这种效应主要与其激动L-型Ca2+通道和NCX的作用有关.
关键词： Na+-Ca2+交换体 抗体 钙瞬变 心室肌细胞 L-型Ca2+通道 -
Bay K8644及 nifedipine对大鼠下丘脑神经元L-型Ca2+通道特性的影响
采用神经元急性分离和膜片箝技术以及细胞贴附式方式记录通道活动, 探讨DHP类Ca2+通道激动剂Bay K8644及拮抗剂nifedipine对下丘脑神经元L-型Ca2+通道的影响. 结果显示, 在Bay K8644作用下, 通道开放形式发生变化, 明显可见多级开放; 通道平均开放时间、平均开放概率显著增加, 但单通道电导无明显变化.nifedipine的作用与Bay K8644相反. 结果提示, Bay K8644对下丘脑神经元L-型Ca2+通道有明显激动作用, nifedipine有显著抑制作用.
关键词： 下丘脑 L-型Ca2+通道 Bay K8644 Nifedipine 膜片箝技术 -
长时间保存的急性分离心肌细胞代谢产物影响L-型Ca2+通道电流
采取较小容量保存缓冲液保存急性分离的心肌细胞,进行L-型Ca2+通道特性观测时,在细胞分离6h后,L-型Ca2+通道电流峰值变异性明显增大,其原因尚不清楚.为获取更多的实验数据,且确保数据的准确与稳定性,本研究旨在观测小容量保存缓冲液保存体系pH的变化及其对心肌细胞形态、线粒体功能与L-型Ca2+通道特性的影响.将急性分离的心肌细胞分别保存于100 mL大容量保存液和20mL小容量保存液中.结果显示,在10h保存过程中,100mL大容量保存液组pH保持不变；而20 mL小容量保存液组,其溶液pH从7.20降至6.95,导致轻度酸中毒.20 mL小容量保存液组酸中毒不仅使异常形态的长杆状心肌细胞比例增加(保存时间≥6 h),而且使心肌细胞线粒体膜电位逐步降低(保存时间≥8 h),线粒体NADPH自发荧光由蓝色转向绿色(保存时间≥8 h),提示能量代谢受阻.由于这些变化,保存10h时,心肌细胞L-型Ca2+通道电流峰值呈显著性降低,峰值电流钳制电位从+10 mV向0 mV偏移.上述结果提示长时间保存急性分离心肌细胞,宜采用较大容量的缓冲液体系,或者采取心肌细胞形态与NADPH蓝色荧光两种方法相结合,选择线粒体功能良好的细胞,进行L-型Ca2+通道特性观测.
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左卡尼汀对大鼠缺血心肌细胞的作用
目的:研究左卡尼汀预处理对大鼠缺血心肌细胞超微结构的影响及L-型Ca2+通道的作用. 方法:将大鼠随机分为对照组、左卡尼汀组、曲美他嗪组,每组10只,建立缺血模型.光镜及透射电镜观察心肌细胞结构改变;应用膜片钳技术观察L-型钙通道Ca2+内流的变化. 结果:左卡尼汀对大鼠心肌细胞超微结构有保护作用;对缺血心室肌细胞L-型钙通道较对照组及曲美他嗪组有明显的阻滞作用. 结论:左卡尼汀可减轻缺血心肌损伤的程度及范围,保护线粒体,稳定其氧化供能;抑制心室肌细胞L-型钙通道,减少Ca2+的内流,降低钙超载的损伤,从而发挥对缺血心肌的保护作用.
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神经源性尿路功能障碍大鼠输尿管平滑肌细胞Ca2+变化的意义
目的 探讨神经源性尿路功能障碍(NUTD)早期输尿管平滑肌细胞(USMC)内Ca2+的变化及意义.方法 选取45只SD大鼠按随机数字表法均分为NUTD组、实验对照组(EC组)和空白对照组(BC组).其中NUTD组离断第1腰椎并破坏骶段脊髓;EC组仅咬除棘突,未破坏脊髓;BC组未争手术处理.术后1周行影像尿动力学检查,观察3组大鼠逼尿肌功能及膀胱输尿管返流发生情况.模型建立后6周,3组大鼠均行影像尿动力学检查,采用急性酶法获得USMC.应用激光共聚焦显微镜观察并比较3组细胞内Ca2+浓度差异,并分别用10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-L、10-6 mol/L的Bay K8644处理NUTD组细胞,比较其对细胞内Ca2+浓度的影响.结果 模型建立6周后,NUTD组大鼠均表现为膀胱逼尿肌无收缩,无逼尿肌过度活动和膀胱输尿管返流.所得细胞免疫荧光证实为USMC.NUTD组USMC内Ca2+荧光强度(FI)(9.80±1.11)显著低于EC组(32.06±3.67)和BC组(31.44 ±2.82),组间比较差异有统计学意义(P＜ 0.05);10-8mol/L、10-7 mol/L、10-6mol/L的Bay K8644处理NUTD组细胞的FI相对增加值分别是3.80±1.30、10.04 ±2.15、19.89±2.06,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 USMC内Ca2+浓度降低可能是神经源性输尿管原发性功能障碍的重要因素之一,钙通道激动剂可对功能受损的USMC内异常Ca2浓度发挥有效调节作用.
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L-型钙电流在血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠肥大心肌细胞中的功能和分子水平改变
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠肥大心肌细胞中L-型钙电流的功能和分子水平改变.方法 在血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠肥大心肌细胞中,应用全细胞膜片钳技术检测L-型钙电流的密度及门控动力学变化；应用半定量RT-PCR技术检测L-型Ca2+通道α1C亚单位mRNA的表达量.结果 AngⅡ在引起新生大鼠心肌肥大的同时,也增加了心肌细胞ICa,L电流密度,但并不影响ICa,L电流的激活、失活和复活特征.另外,AngⅡ还增加了L-型Ca2+通道α1C亚单位mRNA表达量.AngⅡ的这些作用都可被其1型受体阻断剂losartan所抑制.结论 在AngⅡ诱导的新生大鼠肥大心肌中,L-型Ca2+通道的分子和功能水平发生了显著变化,这些变化是通过激活心肌细胞上AngⅡ1型受体所介导的.
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脑心清及其黄酮成分对海马神经元L型钙通道电流的影响
目的 研究脑心清及其黄酮成分对海马神经元细胞L-型Ca2+通道活性的影响.方法 采用全细胞记录式(whole-cell model)的膜片钳技术记录海马神经细胞L-型Ca2+通道电流变化.结果 槲皮素、柿叶黄酮、脑心清在5.0～25.0 μg/mL浓度下,均能增加海马锥体神经元全细胞L-型钙通道电流(ICa,L)峰值(P<0.01),增加大值分别为61.6%,55.3%,52.0%,可使ICa,L 的I-V相关曲线下移,但没有电压依赖性特征,也不改变钙通道的电学特征.结论 脑心清及其黄酮成分对海马神经细胞L-型Ca2+通道活性有激活增强作用,有利于神经元细胞内钙稳定,发挥抗缺血再灌注损伤的作用.
