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甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响
目的 研究甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响,探讨甘草解毒的作用机制.方法 采用流式细胞仪检测经甘草黄酮类成分处理后Caco-2细胞对罗丹明123摄取量的影响,以评价P-gp的外排功能;采用Westernblotting法检测甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-gp表达的影响.结果 与对照组相比,甘草总黄酮5、10、50、100 μg/mL作用Caco-2细胞1h后,使细胞内罗丹明123的荧光强度分别减少61.1％、56.3％、49.2％、45.4％；甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、芹糖基甘草苷、芹糖基异甘草苷在相同质量浓度,使细胞内罗丹明123的荧光强度减少了19.3％～37.9％.与对照组相比,甘草总黄酮10～400 μg/mL给药后72 h,使Caco-2细胞膜上P-gp的表达显著增加(P＜0.01)；甘草苷、异甘草苷、甘草素、芹糖基甘草苷5～400 μmol/L,异甘草素、芹糖基异甘草苷10～400 μmol/L对此也有显著作用(P＜0.01).结论 甘草黄酮类成分增强Caco-2细胞P-gp的功能,上调P-gp的表达,促进细胞内有毒物质的外排,减少有毒物质在肠道的吸收,这可能是甘草配伍其他中药的解毒机制之一.
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HPLC法同时测定白芍、甘草药对提取物中9种有效成分
目的 建立反向高效液相色谱法,同时测定白芍甘草药对提取物中芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、异甘草素9种成分.方法 采用Dikma Technologies-C18(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸(B),梯度洗脱,体积流量1.0mL/min,检测波长为267 nm (0～13 min)、258 nm (13～17 min)、230 nm (17～27 min)、276 nm (27～42 min)、360 nm (42～46 min)、276 nm (46 ～50 min)、230 nm (50 ～53 min)、275 nm (53 ～55 min)、250 nm (55～90 min),柱温30℃.结果 在色谱条件下,芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、异甘草素的进样量分别在0.004476～ 0.04476μg,0.014 67 ～0.146 7μg,0.004975 ～0.049 75μg,0.001 031～0.01031 μg,0.005 813～0.058 13 μg,0.001 744～0.01744μg,0.000982～0.009 82 μg,0.018 20 ～0.182 0μg,0.000098 ～0.00098 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系；加样回收率(n=5)均在96.3％ ～103.4％,RSD均小于2.5％.结论 本法快速、准确,重复性好,可更好地控制白芍炙甘草药对提取物的质量.
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波长切换HPLC法同时测定甘草及其炮制品中7个物质的含量
目的:建立高效液相色谱法测定甘草及炮制品中芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素的含量.方法:采用Dikma Technologies - C18(200 mm ×4.6 mm,5μn)色谱柱,流动相为乙腈-0.05％磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.8mL·min-1,检测波长为276 nm(O ～ 16 min)、360 nm(16～24 min)、276 nm( 24～ 28 min)、248 nm(28～38min)、370 nm(38 ～42 min),柱温30℃.结果:在本文色谱条件下,芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素的进样量分别在0.056 ～ 0.56,0.095 ～0.95,0.026～0.26,0.015 ～0.15,0.013 ～0.13,0.348～3.48,0.003 ～0.03 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;加样回收率(n=6)均在96.1％～98.1％,RSD均小于2.6％.16个来源甘草药材及其4种不同炮制品中7个物质的含量有一定差异.结论:本法快速、准确,重复性好,可更好地控制甘草药材及其炮制品的质量.
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RP-HPLC法同时测定不同产地甘草中9个主要成分的含量
目的:建立同时测定甘草药材中芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、刺甘草查尔酮、异甘草素和甘草酸含量的高效液相色谱方法.方法:采用DiamonsilTM C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,检测波长为276 nm(0 ～20 min)、360 nm(20 ～30 min)、276nm(30～35 min)、370 nm(35 ～48 min)、248 nm(48 ～55 min),柱温为40℃.结果:芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、刺甘草查尔酮、异甘草素和甘草酸的浓度分别在13.1-262 μg·mL-1(r =0.9994)、8.3-100 μg·mL-1(r =0.9997)、5.2～104μg·mL-1(r =0.9997)、0.96 ～11.5 μg ·mL-1(r =0.9995)、0.31～10.00μg ·mL-1(r =0.9999)、1.11 ～22.2 μg·mL-1(r =0.9991)、0.23 ～7.25 μg·mL-1(r =0.9998)、0.52 ～10.40μg· mL-1(r =0.9996)、25.25 ～808.Oμg ·mL-1(r=0.9995)与各自峰面积值呈良好的线性关系；平均回收率(n=6)分别为103.6％、104.5％、104.9％、100.4％、102.2％、101.5％、100.4％、98.5％、101.7％.结论:本方法简便,重复性好,可以更好地用于甘草药材的质量控制.
