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补骨脂单体成分对体外培养成骨细胞和破骨细胞分化的影响
[目的]研究补骨脂单体成分异补骨脂素、异补骨脂查尔酮对体外培养破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)及成熟破骨细胞形成数目、体外培养成骨细胞增殖与分化的影响.[方法]体外采用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞前体细胞,考察异补骨脂素、异补骨脂素查尔酮对破骨细胞前体细胞在分化过程中其标志性酶TRACP的活性和成熟破骨细胞产生数目的影响.对硝基苯磷酸盐法(PNPP法)测定破骨细胞TRACP活性,TRACP细胞染色法鉴定并检测成数破骨细胞数目.酶消化法体外培养新生小鼠成骨细胞,(CCK-8)(cell counting kit-8)法检测两成分对成骨细胞增殖的影响,磷酸苯二钠法测定两成分对成骨细胞标志性酶碱性磷酸酶(ALP)的影响.[结果]体外成功培养小鼠破骨细胞和成骨细胞,两细胞强表达各自的标志性酶TRACP和ALP.异补骨脂查尔酮在0.05 μmol/L浓度下对成熟破骨细胞的形成有显著抑制作用.异补骨脂素在0.1 μmol/L浓度下对成骨细胞增殖有显著促进作用.[结论]补骨脂单体成分异补骨脂素对成骨细胞有促进作用、异补骨脂查尔酮对破骨细胞有抑制作用,提示补骨脂可能作为抗骨质疏松或骨吸收的药物.
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异补骨脂查尔酮抑制IL-4产生及其机制研究
目的 从补骨脂单体化学成分中筛选抗哮喘的小分子化合物,并阐释其抗哮喘作用机制.方法 基于IL-4在哮喘病理中的作用,采用IL-4-GFP转基因报告小鼠(4get鼠)和流式细胞术,设计一种抑制白细胞介素-4(IL-4)产生的抗哮喘药物筛选新方法.结果 与DMSO组相比,异补骨脂查尔酮能显著抑制Th2细胞中IL-4的产生(P＜0.001),减少转录因子GATA-3的表达(P＜0.01),降低信号转导与转录激活因子STAT6磷酸化水平(P＜0.01).结论 异补骨脂查尔酮通过抑制STAT6磷酸化而减少GATA-3的表达,从而抑制IL-4的产生,其具有开发成为治疗哮喘药物的潜力.
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明日叶中5种成分同时测定和挥发性成分分析
目的 通过HPLC法测定明日叶Angelica keiskei Koidzumi中异补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查尔酮、异虎耳草素、北美芹素和花椒毒素的含有量,固相微萃取(SPME)-GC-MS法分析其中挥发性成分.方法 该植物甲醇提取液的HPLC分析采用GL Sciences色谱柱(5μm,4.6 mm ×250 mm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;检测波长314 nm;体积流量1.0 mL/min;柱温28℃.GC-MS分析采用Agilent 19091S-433:93.92873 HP-5MS 5％ Phenyl Methyl silox-60℃-325℃(325℃)色谱柱(30 m×250 μm ×0.25 μm);柱温50℃;进样口温度250℃;载气体积流量1.0 mL/min;扫描范围15 ～500 amu.结果 5种成分在各自线性范围内线性关系良好(r≥0.997 2),平均加样回收率为97.78％～102.25％ (RSD＜2.25％).明日叶中有11种挥发性成分,9种是萜烯类,总相对含有量达96.45％.结论 该方法准确可靠,可为明日叶的质量控制提供参考.
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异补骨脂查尔酮抗哮喘作用的实验研究
目的:探讨异补骨脂查尔酮在实验动物体内抗哮喘的作用.方法:将27只野生型雌性BALB/c小鼠随机分为正常组(7只)、哮喘对照组(10只)、给药组(10只),采用卵清白蛋白(OVA)致敏诱导哮喘模型,给药组灌胃具有抑制IL-4分泌的化合物异补骨脂查尔酮,连续1周.检测给药后模型动物体内脾脏CD+细胞及血清中IL-4、IFN-g水平的变化.结果:与哮喘对照组相比,给药组体内脾脏CD4+细胞中IL-4的产生减少(P＜0.05),IFN-g表达无明显差异,血清中IL-4的表达降低(P＜0.05),血清中IFN-g的表达增高(P＜0.01).结论:异补骨脂查尔酮能够抑制哮喘小鼠体内IL-4的表达,初步证实有一定的抗哮喘活性,其具有开发成为治疗哮喘药物的潜力.
