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姬松茸多糖对染铅大鼠脾脏组织形态及细胞因子mRNA表达的影
目的 研究姬松茸多糖对染铅大鼠脾脏组织形态和相关细胞因子表达的影响,进而探索姬松茸多糖对染铅大鼠的免疫功调节机制.方法 选用45日龄SD大鼠,随机分为6组,每组8只,雌雄各半.分别为正常对照组,多糖对照组,染铅模型组、低、中、高剂量姬松茸多糖组(50、100、200 mg/kg·d).染铅模型组、姬松茸多糖试验组分别给予含0.2％醋酸铅饮水,自由饮用.饲养60 d后,采集脾脏,制备常规HE染色切片,观察姬松茸多糖对染铅大鼠脾脏组织形态的影响,并提取RNA用荧光定量RT-PCR法测定细胞因子核转录因子Kappa B(NF-xB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、组织相容性抗原I(MHC-I) mRNA的相对表达量.结果 (1)染铅可引起脾脏组织细胞的病理变化,而姬松茸多糖可缓解染铅造成的脾脏损伤.(2)与正常对照组相比,染铅模型组NF-(x) B、ICAM-1、MHC-ImRNA的表达量分别升高39.6％、67.9％、20.7％,差异显著(P＜ 0.05或P＜0.01).与染铅模型组相比,随着试验组多糖浓度的增加,NF-(x) B、ICAM-1、MHC-I mRNA的表达量逐渐降低,差异均达到极显著水平(P＜0.01).结论 姬松茸多糖能够缓解染铅造成的脾脏损伤,且对染铅大鼠脾脏细胞因子NF-(x) B、ICAM-1、MHC-I mRNA的高表达有明显的抑制作用,说明姬松茸多糖对染铅大鼠免疫损伤具有保护作用.[营养学报,2013,35 (2):176-180]
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肝脏移植耐受细胞分子机制研究进展
肝脏具有独特的免疫耐受特性.如肝脏移植物能克服主要组织相容性复合物(MHC)的不同而长期存活,能在宿主没有接受免疫抑制治疗的情况下被宿主自然接受,也能诱导宿主产生供体特异性耐受等.肝脏自然耐受的形成与众多机制相互联系、相互作用,但其机制目前仍不清楚.
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新城疫病毒HN基因对肝癌细胞SMMC7721的细胞毒性研究
目的:探讨新城疫病毒HN基因对肝癌细胞SMNC7721的杀伤作用及其机制.方法:以脂质体介导方法在体外转染含新城疫病毒HN基因的质粒pVHN于细胞SMMC7721 24 h后,采用MTT法检测细胞活性;3,5-二羟基甲苯测定其唾液酸含量的变化;丫啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色,荧光显微镜观察细胞形态学改变;以及FCM检测病毒HN基因和HLA-A,B,C的表达.结果:体外转染pVHN能显著地降低细胞表面唾液酸含量(P＜0.05),有效地杀伤肿瘤细胞SMMC7721;荧光显微镜观察可见典型的细胞死亡形态学改变;实验组细胞与对照组比较HN表达差异显著,HLA-A,B,C表达上调.结论:HN基因在体外能够显著降低肿瘤细胞表面唾液酸含量,同时,使其高表达HN抗原,上调HLA-A,B,C表达,从而,可能增强了肿瘤细胞的抗原性和免疫识别,诱导了细胞SMMC7721死亡.
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膜型MHC-Ⅰ类分子高表达的GBM U251细胞疫苗的研制及其体外抗瘤作用
目的：探索膜型MHC-Ⅰ类分子高表达人多形性胶质母细胞瘤（ GBM） U251细胞疫苗的制备方法及其体外诱导的抗瘤作用机制。方法U251胶质瘤细胞加入0~2000U· mL -1不同浓度梯度的重组人IFN-γ干预48h；流式细胞仪（FCM）检测不同浓度梯度的重组人IFN-γ诱导后的U251细胞胞膜MHC-Ⅰ类分子表达变化情况；取诱导MHC-Ⅰ类分子高表达高的IFN-γ干预方案作为疫苗的制备方法；体外刺激健康捐献者PBMCs作为效应细胞，MTT比色法检测其对野生型及IFN-γ诱导48h后靶细胞的特异性杀伤活性，同时以抗人HLA-A，B，C行特异性杀伤试验的阻断试验；ELISA法检测效应细胞攻击靶细胞后的IFN-γ、IL-2的分泌情况；FCM检测疫苗刺激前后 PBMCs CD4+、CD8+T淋巴细胞比例变化。结果500U· mL -1 IFN-γ诱导48h U251细胞胞膜的MHC-Ⅰ类分子表达率高，达89.9%；高表达膜型MHC-Ⅰ类分子U251细胞疫苗9在体外具有明显特异性的杀瘤活性的诱导能力（P<0.05）；体外可分泌大量的 IFN-γ和 L-2（P<0.05）；CD4+、CD8+明显增高（P<0.05）。结论500U· mL -1 IFN-γ诱导48h是U251细胞胞膜MHC-Ⅰ类分子体外诱导表达的佳方案；膜型MHC-Ⅰ类分子高表达的U251细胞疫苗休外具有特异性的抗瘤作用，其杀瘤活性与膜型MHC-Ⅰ类分子表达上调有关。
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肝癌细胞CD80表达与MHC-I分子的关系
目的:研究共刺激分子CD80在肝癌细胞中的表达与MHC-I(Majorhistocompatibilitycomplex)分子相互关系,以探讨在肿瘤细胞所诱发的免疫排斥反应中共刺激分子对抗原提呈机制的影响.方法:通过逆转录病毒载体介导,将CD80基因转入肝癌细胞系HHCC,以流式细胞仪检测其表面MHC-I分子的表达情况.同时检测LAK细胞对转染前后的细胞的杀伤效果.结果:表达CD80的肝癌细胞其表面MHC-I分子表达明显增高(P<0.01),而γ-INF刺激对细胞表面MHC-I分子的表达情况并无影响(P>0.05).LAK细胞对转染后细胞的杀伤作用远远大于未转染组(P<0.01),而γ-INF刺激前后的细胞毒活性几乎无改变(P>0.05).结论:转染CD80后肝癌细胞高表达MHC-I分子,增强抗原提呈作用的同时又表达第二信号-共刺激分子CD80,从而可诱发更强的免疫排斥反应.
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MHC-I荧光四聚体载体的构建及其真核表达
目的 构建MHC-I荧光四聚体真核表达质粒,并表达、纯化该蛋白,以更简便地检测特异性T细胞.方法 运用分子克隆技术,构建sKb-ZsGreen-6 × His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化.结果 经酶切及测序鉴定证实成功构建了MHC-I荧光四聚体真核表达质粒并完成表达、纯化,并经SDS-PAGE电泳证实.结论 得到了纯化的MHC-I荧光四聚体,并经流式细胞术证实其与β2-微球蛋白、OVA肽结合后能被B3Z细胞识别,为特异性T细胞检测提供了一种更方便的方法.
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SEB诱导的CD4+ T细胞无能、凋亡及MHC-I类分子表达下调
目的: 探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)体外诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制.方法: 采用SEB体外刺激C57BL/6J(B6)小鼠的脾细胞后, 以MTT比色法检测脾细胞的增殖, 并用PI染色后以流式细胞术(FCM)分析不同时间段处于S期、G0～G1期的细胞及无能T细胞的凋亡, 测定T细胞亚群及MHC-I(H-2Kb)表达的变化.用琼脂糖凝胶电泳, 观察不同时间段凋亡T细胞的DNA特征.结果: 部分去除CD8+ T细胞后, SEB可刺激B6小鼠脾细胞中CD4+ T细胞大量增殖.在SEB刺激后第3天, CD4+ T细胞中处于S期的比率大, 此后开始下降; 而处于G0～G1期的CD4+ T细胞变化则相反.在初次刺激后第3天, 增殖的CD4+ T细胞出现无能.FCM检测及用琼脂糖凝胶电泳检查DNA ladder证实, 在第7天, 无能CD4+ T细胞出现凋亡, 且凋亡细胞的比率逐渐增多, 不因加入抗CD3抗体或ConA而逆转.在SEB刺激后, CD4+ T细胞表面MHC-I类分子(H-2Kb)的表达, 随细胞无能的出现而明显下调.结论: SEB诱导的T细胞免疫耐受, 可能与CD4+ T细胞的无能、凋亡及细胞表面分子MHC-I的表达下调有关.
