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钙依赖性酪氨酸激酶2和微囊蛋白1传导路在酒精性心肌病中的作用与药物干预研究
目的 探讨钙依赖性酪氨酸激酶2(PYK2)和微囊蛋白1传导路在酒精性心肌病(ACM)中的作用及与氧化应激和心肌纤维化的关系.方法 健康成年杂种犬28只,分为乙醇组、缬沙坦+乙醇组、肉毒碱+乙醇组和正常对照组,每组7只.检测各组实验动物心功能.比色法测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量.ELISA法测定心肌组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原水平.免疫组化法观察PYK2和微囊蛋白表达.结果 SOD、GSH-Px与对照组[(56.6±17.0) U/mg蛋白、(488±33) U/g蛋白]比较,乙醇组、缬沙坦+乙醇组和肉毒碱+乙醇组明显下降[SOD (U/mg蛋白)分别为28±5、33±13、33±10;GSH-Px(U/g蛋白)分别为188±37、362±29、282±29];MDA比对照组[(6.4±0.7) nmol/mg蛋白]乙醇组和肉毒碱+乙醇组升高[分别为(19.4±3.0) nmol/mg蛋白、(10.8±2.1) nmol/mg蛋白].与对照组比较,Ⅰ型胶原含量在乙醇组、缬沙坦+乙醇组和肉毒碱+乙醇组心肌组织中增加;Ⅲ型胶原含量在乙醇组和肉毒碱+乙醇组心肌组织中增加(均P<0.01).乙醇组、缬沙坦+乙醇组和肉毒碱+乙醇组心肌组织PYK2蛋白表达增加、微囊蛋白表达减少,与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01).结论 PYK2和微囊蛋白1传导路可能通过调节氧化应激和胶原合成而发挥心肌纤维化调控作用.
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微囊蛋白1和葡萄糖转运蛋白4在3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞模型中的表达及作用
目的 诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成熟并建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型,探讨微囊蛋白1(caveolin-1)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)在脂肪细胞胰岛素抵抗时的表达及作用.方法 3T3-L1前脂肪细胞经诱导分化成熟、建立胰岛素抵抗模型成功后进入实验,流式细胞术检测胰岛素抵抗状态下脂肪细胞葡萄糖摄取,Western blot检测细胞GLUT4、caveolin-1、磷酸化微囊蛋白1 (p-caveolin-1)蛋白的表达,qRT-PCR检测GLUT4、caveolin-1 mRNA的表达.结果 地塞米松成功诱导建立了脂肪细胞胰岛素抵抗模型,葡萄糖氧化酶法检测模型组细胞对胰岛素刺激下葡萄糖摄取率降低,流式细胞术检测诱导胰岛素抵抗后,脂肪细胞摄取荧光葡萄糖量明显减少.诱导3T3-L1胰岛素抵抗后,GLUT4 mRNA、caveolin-1 mRNA表达明显降低(P＜ 0.01);GLUT4、caveolin-1及p-caveolin-1蛋白表达均明显降低(均P＜ 0.01).结论 地塞米松可成功诱导建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型,诱导3T3-L1细胞胰岛素抵抗后,细胞的葡萄糖转运能力降低,caveolin-1表达与功能降低.
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微囊蛋白1抗体对汽油机尾气致大鼠肺损伤的作用
[目的]观察微囊蛋白1(caveolin-1)抗体对汽油机尾气所致肺损伤的保护作用. [方法]雄性健康SD大鼠42只,随机分为正常对照组6只、染毒对照组6只、干预组30只(分1、2、4、8、12周亚组,每亚组6只).正常对照组不作任何处理,正常喂饲；染毒对照组以汽油机尾气持续染毒12周,每天染毒2h；干预组各亚组在开始染毒后的前2周让实验动物吸入超声雾化的caveolin-1多克隆抗体,并分别用汽油机尾气染毒1、2、4、8、12周.各组大鼠在后一次染毒24h后处死,对肺组织进行常规病理形态学观察,用免疫组织化学技术检测肺部caveolin-1和转化生长因子β1(TGF-β1)表达变化. [结果]染毒对照组大鼠体重明显较正常对照组轻,干预组体重介于正常对照组与染毒对照组之间.干预组炎症反应较染毒对照组明显减轻,纤维组织增生减少.正常对照组可以检测到较弱的caveolin-1表达；染毒对照组则几乎检测不到；干预组表达先增强后减低,但实验后期仍较染毒对照组略高.TGF-β1表达在正常对照组低；染毒对照组高；干预组逐渐升高,但较染毒对照组明显减弱. [结论]早期使用caveolin-1多克隆抗体可部分减轻汽油机尾气造成的肺部损伤.
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微囊蛋白-1的功能及其在结肠癌中的作用
微囊是细胞膜上脂筏表面的一种特殊的细胞内凹陷.微囊蛋白1(caveolin-1)是胞膜上的一种整合膜蛋白,它是形成微囊的主要成分.它在许多细胞内高表达.微囊及caveolin-1对物质的转运,内皮的渗透和肿瘤的发生起重要的调节作用.Caveolin-1可能是一种抑癌基因,在人类肿瘤中已检测到它的突变.Caveolin-1也参与了结肠癌的发生.
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CAV-1在结直肠癌患者肠黏膜中的表达及其意义探讨
[目的]研究质膜微囊蛋白1(caveolin-1,CAV-1)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者大肠黏膜中的表达,并初步探讨其临床意义.[方法]在肠镜室募集无器质性肠道疾病患者12例、结直肠癌患者16例,通过结肠镜分别在无器质性肠道疾病患者的乙状结肠处和结直肠癌患者的病变明显处取材,每例取3块.获取的标本经免疫组织化学染色,检测CAV-1在结肠黏膜中的表达.[结果]免疫组织化学法检测CAV-1在无器质性肠道疾病患者和结直肠癌结肠黏膜中的表达发现,CAV-1蛋白阳性染色主要位于胞浆,胞核少见或未见染色;在无器质性肠道疾病患者的结肠黏膜组织胞浆中仅有少量阳性染色点,而CAV-1在结直肠癌组织中的表达明显,染色呈现颗粒状.无器质性肠道疾病患者组CAV-1表达的阳性指数为(12.87±2.76),结直肠癌组的表达明显增强,其阳性指数为(34.42±5.44),较无器质性肠道疾病患者表达明显增强(P＜0.01).[结论]CAV-1在直结肠癌黏膜中高表达,CAV-1是结直肠癌发病的促使因子.
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转移消失蛋白B与微囊蛋白-1在肝细胞癌中的相互作用
目的 探讨转移消失蛋白B(MIM-B)与微囊蛋白-1(caveolin-1)在肝细胞癌细胞中的相互作用.方法 构建携带MIM-B与FLAG融合基因的pcDNA3.1载体,脂质体法转染Hep3B、SMMC7721细胞.通过细胞免疫荧光以及共聚焦显微镜检测MIM-B蛋白与caveolin-1蛋白共定位;应用内、外源免疫共沉淀确认相互作用;以Hep3B、SMMC7721 以及MHCC97H细胞为研究模型,分成空载体组、MIM-B与FLAG融合基因组,进行免疫共沉淀实验.结果 成功构建携带MIM-B与FLAG融合基因的pcDNA3.1载体,pcDNA3.1-MIM-B-FLAG转染效率为90.0%以上,显著表达MIM-B.共聚焦显微镜结果显示MIM-B能沉淀caveolin-1;MIM-B与caveolin-1共定位;内、外源免疫共沉淀结果显示MIM-B与caveolin-1相互作用.结论 MIM-B与caveolin-1在肝癌细胞中共定位并相互作用.
