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DBA/1J小鼠胶原诱导关节炎模型的建立与鉴定
目的 建立DBA/1J小鼠胶原诱导性关节炎(collagen?induced arthritis,CIA)模型,从形态学、病理学及免疫学等多方面对该模型进行鉴定.方法 将牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen,CⅡ)与佐剂混合并充分乳化,于DBA/1J小鼠尾根部皮下注射进行初次免疫,21 d后同样的方法进行再次免疫.观察小鼠体重变化、关节肿胀程度等形态学指标,进行踝关节病理检查,并用CBA法检测血清中细胞因子的水平.结果 造模组小鼠体重于首免后35 d开始下降并持续低于对照组.于28 d,造模组小鼠出现足爪红肿,35 d足爪肿胀厚度显著高于对照组(P<0.05),至62 d发病率高达90％.病理学检测显示,造模组小鼠关节腔变窄,滑膜组织增生,炎症细胞浸润,软骨结构不同程度破坏.相比于对照组,造模组小鼠血清中炎性因子IL?6、IFN?γ、MCP?1显著升高(P<0.05),而抗炎因子IL?10轻微下降(P>0.05).结论 DBA/1J小鼠尾根部皮下注射牛Ⅱ型胶原可成功诱导CIA模型.
关键词： DBA/1J小鼠 牛Ⅱ型胶原 胶原诱导性关节炎模型 炎症因子 -
祖师麻片对牛Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎的药效学研究
目的 探究祖师麻片对牛Ⅱ型胶原诱发大鼠关节炎的药效学作用.方法 采用牛Ⅱ 型胶原诱导的关节炎(collagen-induced anhritis,CIA)动物模型,来观察祖师麻片对CIA模型大鼠的关节炎指数(arthritis index,AI),血清中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、风湿因子(rheumatoid factor,RF)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、前列腺素-2(prostaglandinE-2,PGE-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α)的含量,膝关节番红O-固绿染色,镜下观察关节软骨的一般形态,并对膝关节软骨进行Mankin's评分.结果 与模型组比较,祖师麻片剂量组大鼠AI评分显著降低(P<0.01);血清中CTGF、IgG、RF、COX-2、IL-6、PGE-2、TNF-α 含量显著降低(P<0.05或P<0.01);软骨细胞数量稍有减少,染色丢失较少,潮线基本完整,Mankin's评分评分显著降低(P<0.01).结论 祖师麻片对Ⅱ 型胶原诱导的类风湿关节炎有显著改善作用,其机制可能与抗炎、免疫调节作用有关.
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DBA／1小鼠胶原诱发关节炎模型的特征
目的：建立 DBA /1小鼠胶原性关节炎模型（CIA ），分析其发病的特点、临床表现及病理学变化。方法用完全弗氏佐剂乳化牛Ⅱ型胶原，在 DBA/l 小鼠尾根部皮内注射100μL ，3周后重复注射等量抗原，动态观察小鼠的临床变化，如足爪肿胀程度、关节炎指数评分和体重变化等，对发病关节及小鼠脾脏进行病理学检测。结果从首次免疫后28 d 开始，胶原免疫组小鼠踝关节开始出现明显红肿，7周左右肿胀达到高峰，小鼠 CIA 发生率为100％；病理学结果显示，患病关节出现炎性细胞浸润、软骨和骨骼破坏、滑膜增生等较为典型的变化；脾脏生发中心增多，红髓充血；正常对照组小鼠则无上述表现。结论用牛Ⅱ型胶原，可成功诱导 DBA /l 小鼠 CIA 模型，发生率为100％。该模型较充分模拟了人类 RA 的病变特征，关节炎指数、踝关节和脾脏病理等是评价 CIA 模型的主要指标。
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奇壬醇对牛Ⅱ型胶原特异性淋巴细胞的体内和体外作用
目的 观察奇壬醇对牛Ⅱ型胶原特异性淋巴细胞体内和体外的免疫调节作用,探讨奇壬醇对抗原特异性淋巴细胞的免疫抑制作用机制.方法 将Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、奇壬醇组和泼尼松龙组.除对照组外,均复制胶原诱导关节炎大鼠模型,造模当天开始给药.造模30 d后取脾脏和引流淋巴结,制备单细胞悬液,经体外培养48 h后,ELISA法检测培养上清中干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、IL-4、肿瘤坏死因子-α(TNF-t)含量；在Ⅱ型胶原诱导下,取正常大鼠淋巴结细胞、脾细胞与不同浓度的奇壬醇共同培养,检测胶原诱导的淋巴细胞增殖及凋亡.结果与模型组相比,奇壬醇组脾细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α含量降低(P＜0.05,P＜0.01),IL-10和IL-4水平升高(P＜0.05,P＜0.01)；淋巴结细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α含量降低(P＜0.05,P＜0.001),IL-10和IL-4水平升高(P＜0.05,P＜0.001);体外实验中,奇壬醇抑制Ⅱ型胶原特异性淋巴结细胞增殖,促进Ⅱ型胶原特异性淋巴结细胞和脾细胞凋亡,均呈剂量依赖关系.结论 奇壬醇可通过抑制Ⅱ型胶原特异性淋巴细胞分泌促炎因子,促进胶原特异性淋巴细胞分泌抗炎因子,抑制胶原特异性淋巴细胞增殖和促进其凋亡,以多条途径发挥免疫抑制作用.
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Wistar大鼠胶原诱导型关节炎模型构建、评价及用药时间的选择
目的:通过足跖部注射牛Ⅱ型胶原和不完全佛氏佐剂的乳化剂,建立胶原诱导型关节炎模型(collagen induced arthritis,CIA),并对其进行评价,成模后即用激素干预,以明确用药的时间.方法:取Wistar大鼠,随机分为2组:正常组、模型组,模型组采用等量的牛Ⅱ型胶原和不完全佛氏佐剂乳化后在雄性Wistar大鼠足跖部皮下注射0.4ml(含胶原400 μg),14天后用同样方法于足跖部皮下注射0.1ml(含胶原100μg)做加强注射,于致炎20天后肿胀达高峰期时,用足爪X-ray证明成模,再将模型组分为模型组与激素组,此时激素组开始用药物干预,连用20天药物,并用足爪X-ray说明成模大鼠用药物干预后关节和骨质改变的情况.结果:在致炎20天时,模型组的左足跖厚度显著地高于正常组.同时结合相机拍摄的大鼠足爪图片,以及足爪的X-ray进行评价,说明了模型成功.在致炎20d开始用药,间隔1天用药,连用20d后,结合各组大鼠足爪图片、足爪的X-ray、酶联免疫吸附实验检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α的含量,免疫组织化学检测膝关节滑膜中的TNF-α表达情况,以观察在这样的用药情况下对CIA大鼠模型的影响情况.结论:在致炎20d时模型成功建立,并且在此时用激素干预20d,是有效的.
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阿达木单抗治疗恒河猴胶原性关节炎的药效学研究
目的 研究恒河猴胶原性关节炎(CIA)模型用于治疗类风湿性关节炎的药物评价.方法 恒河猴被胶原免疫后,给予阿达木单抗1.0 mg·kg-1和阿达木单抗(0.5 mg·kg-1)联合甲氨蝶呤(1.0 mg·kg-1)进行治疗,观察给药前、后猴的临床表现并进行临床评分,检测各项炎症指标,并进行四肢关节的X光影像学分析.结果 免疫后,猴有不同程度的类风湿性关节炎症状出现;给药后,猴的受累关节病情好转或未持续恶化.结论 建立的CIA恒河猴模型的病程稳定,可用于类风湿性药物的药效评价.
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牛Ⅱ型胶原诱导恒河猴关节炎的实验研究
目的 观察牛Ⅱ型胶原诱导川西恒河猴关节炎后,相关炎症指标与关节X光影像学的变化.方法 将6只恒河猴分别sc 1.5 mg牛Ⅱ型胶原诱导关节炎,检测恒河猴的体重、体温、血液学及血生化指标,观察恒河猴的症状并每天进行临床相关性评分.免疫后第4周与第8周分别进行四肢关节的X光影像学分析.结果 6只恒河猴中有1只属于急性活动期反应(免疫后第1周CRP＞ 50 mg· L-),3只属于慢性活动期反应(免疫后第4周开始CRP＞ 50 mg· L-);注射胶原后猴的体重增长率＜14％或呈负增长,全身临床评分持续增长;与免疫前比较,中性粒细胞(NEUT)、单核细胞(MONO)计数升高,白蛋白(ALB)与血红蛋白(HGB)降低(P＜0.05);X光平片显示第8周与第4周相比有进展,与关节病理学检查结果相符.结论 早期急性活动期反应者与慢性活动期反应者的共同特点是NEUT、MONO计数升高,体重、ALB与HGB降低或增长缓慢;CRP可以作为早期关节炎发病的指标,X线影像学显示关节病变程度加重,与临床类风湿关节炎的症状类似并有其特殊表现.
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NF-κB寡核苷酸诱骗剂构建大鼠特异性耐受性树突状细胞
目的:运用NF-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)构建大鼠耐受性树突状细胞(dendritic cell,DC),并将其负载牛Ⅱ型胶原(BⅡC),对其成熟状态进行评价.方法:取SD大鼠脾脏单核细胞,用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4诱导其转化为DC后分成5组:单纯DC组、脂多糖(LPS) DC组、Decoy-DC组、LPS刺激Decoy-DC组、负载BⅡC-Decoy-DC组,对终细胞进行形态观察、评价活力、表型鉴定.结果:大多数大鼠脾脏来源DC呈CD80+和CD86-的表型特征,各组大鼠DC特异性标志OX-62表达率＞70％,差异无统计学意义(P＜0.05);与单纯DC组比较,Decoy-DC组细胞表面共刺激分子CD80和CD86阳性表达率和表达强度均呈明显降低(P＜0.05),经LPS刺激后DC细胞CD80及CD86阳性表达率和表达强度上调均不明显(P＞0.05);BⅡC-Decoy-DC组DC细胞形态学与Decoy-DC组无明显差别,也同样呈CD80和CD86低表达.结论:用NF-κB ODN Decoy成功构建耐受性DC,此耐受性DC负载了特异性抗原BⅡC后表型稳定.
