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转SLC基因转染胰腺癌疫苗对裸鼠成瘤性及淋巴转移的影响
目的 评价重组腺病毒介导的转次级淋巴组织趋花因子(secondarylymphoid tissue chemokine,SLC)基因自体肿瘤疫苗对活体胰腺癌的抑制作用,并探讨SLC的作用机制.方法 将人胰腺癌细胞株ASPC1,转染SLC基因.用MTT法评估ASPC1细胞的增生情况,用绒毛膜尿囊膜法评估其在活体和试管中的血管发生,并将转SLC基因的胰腺癌细胞灭活后种植于裸鼠胰腺癌模型观察其肿瘤生长抑制情况,用CD34免疫组化染色法测量微血管密度,用CD4、CD8免疫组化染色测量肿瘤浸润淋巴细胞.结果 转染SLC基因的ASPC1细胞的生长和管道生成与未转染SLC和生理盐水处理相比被明显抑制,绒毛膜尿囊膜法结果显示转SLC基因组的新血管生成少于未转染SLC组和生理盐水组.转染SLC基因组的肿瘤体积少于未转染SLC组和生理盐水组,转染SLC基因组的微血管密度亦少于未转染组和生理盐水组,而肿瘤内浸润淋巴细胞转SLC基因组显著增多.结论 腺病毒介导的转SLC基因自体肿瘤疫苗对治疗胰腺肿瘤有效.其作用机制可能与SLC抑制血管内皮细胞的生长和血管发生以及吸引免疫效应细胞有关.
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次级淋巴组织趋化因子研究进展
次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid chemokine,SLC)是近年新发现的一种趋化因子,是一种小分子蛋白质,对淋巴细胞、树突状细胞(dendritic cell,DC)有很强的趋化作用,与淋巴细胞归巢和DC向淋巴组织的迁移有密切关系,同时还有抗肿瘤免疫效应.本文对SLC的一般生物学特征、基因表达及其免疫学功能作一综述.
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次级淋巴组织趋化性细胞因子研究进展
次级淋巴组织趋化因子(sLC)是体内重要的CC亚族趋化因子成员,能趋化体内多种淋巴细胞到外周组织或器官,与淋巴细胞归巢和DC向淋巴组织的迁移有密切关系.SLC还有抗肿瘤作用,其作用机制包括:募集淋巴细胞和成熟DC;调节细胞因子的分泌;抑制肿瘤血管生成.SLC在肿瘤免疫治疗中具有广泛的应用前景.
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人趋化因子SLC原核表达载体的构建与表达
目的构建趋化因子SLC(secondary lymphoid-tissue chemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白.方法从人扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增SLC成熟蛋白基因,并在5'和3'分别添加Nco Ⅰ和EcoRⅠ酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,经突变删除因Nco Ⅰ位点引入而在肠激酶位点和目的基因间多余的3个氨基酸,DNA再测序检测突变结果,SDS-PAGE分析其表达,并通过金属离子亲和层析、除盐、弱阳离子交换层析,得到纯化的融合蛋白,Western blot验证纯化的融合蛋白.结果成功构建了SLC天然蛋白的硫氧还蛋白融合表达载体,表达并纯化出融合蛋白,Western blot证明该融合蛋白能与羊抗人SLC一抗结合.结论构建的天然SLC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式稳定表达SLC硫氧还蛋白,并对融合蛋白进行了初步纯化.
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CCR7-SLC/ELC生物学轴对乳腺癌细胞趋化及侵袭活性的影响
目的 探讨CCR7-SLC/ELC生物学轴对乳腺癌细胞株MCF-7的趋化及侵袭活性的影响.方法 用Boyden趋化小室测定外源性趋化因子SLC、ELC对MCF-7趋化及侵袭活性的影响.用Westen-Blot法检测所取新鲜乳腺癌转移淋巴结标本中SLC、ELC的表达情况.取转移淋巴结组织匀浆上清液代替外源趋化因子,测定其对MCF-7趋化及侵袭活性.同时测定使用SLC、ELC单克隆抗体后趋化及侵袭活性的改变.结果 不论是外源性SLC、ELC还是转移淋巴结的蛋白上清液均能增加MCF-7趋化及侵袭活性.SLC、ELC单克隆抗体的封闭能明显抑制其活性.结论 CCR7-SLC/ELC 生物学轴增加乳腺癌细胞的趋化和侵袭活性,可能参与乳腺癌的亲嗜性淋巴结转移.
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重组共表达载体pSLC-IRES-IL-2的构建及在COS-7细胞中的表达
目的: 构建共表达质粒pSLC-IRES-IL-2,并在COS-7细胞中表达.方法: 根据人SLC和IL-2 cDNA的序列分别设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的SLC和IL-2基因的真核表达质粒pSLC-IRES-IL-2,用电穿孔法以共表达质粒转染COS-7细胞.用Western blot检测SLC和IL-2的表达.结果: Western blot检测表明,以重组共表达质粒pSLC-IRES-IL-2转染的COS-7细胞能表达SLC和IL-2,表达产物的Mr同预期的结果相一致.结论:成功地构建SLC和IL-2基因的共表达质粒,以其转染COS-7细胞后,能分泌性表达SLC和IL-2,为肿瘤基因治疗的研究提供一定途径.
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趋化因子及其受体与乳腺癌的关系研究进展
对几种趋化因子及其受体,即SLC/CCR7,SDF-1/CCR4,MCP-1及MIP-1在乳腺癌发病过程中的研究进展进行综述.乳腺癌患者的SLC/CCR7,SDF-1/CCR4,MCP-1及MIP-1水平较正常人高.对这些趋化因子及其受体的深入研究有望成为治疗乳腺癌的新靶点.
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寻常型银屑病T细胞趋化性的初步分析
目的:初步探讨寻常型银屑病患者外周血T细胞的趋化性及其影响因素.方法:分离患者及健康对照外周血T细胞,应用MicroBoyden微孔膜小室趋化板检测不同浓度、不同时间趋化因子SLC、IL-18、PHA及CCR7单克隆抗体对T细胞趋化性的影响.结果:在较高浓度及较长作用时间下,SLC对于银屑病患者T细胞趋化作用明显高于健康对照(P＜0.05),而在较低浓度时两者没有差别(P＞0.05);T细胞在SLC作用6 h后趋化作用大;在相同浓度和作用时间下,PHA(3.67±0.29)和IL-18(5.24±0.41)与空白对照(2.43±0.24)相比可以明显增加T细胞的趋化性(P＜0.01),而抗CCR7单克隆抗体(0.98±0.15)可以明显降低T细胞的趋化性(P＜0.01).结论:银屑病患者T细胞趋化性明显高于健康对照.
