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自分泌移动因子Autotaxin在胃癌组织中的差异表达及意义
目的 探讨自分泌运动因子(autotaxin,ATX)在人胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系.方法 应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、real-time PCR法及免疫组织化学方法检测25例正常胃组织、76例胃癌组织的ATX基因表达值.结果 25例正常胃组织及76例胃癌组织中均有ATX基因表达,比较其表达率差异有显著性.但在伴有淋巴结转移及远处转移的癌组织ATX基因表达值显著高于不伴转移之癌组织及正常胃组织,分别为N1～N3 84.21％±8.15％,N041.18％±8.71％,M1 82.91％±11.05％,M0 33.19％±11.23％,其结果具统计学意义.高表达ATX基因与胃癌细胞转移、病理分化程度呈正相关,而与年龄、肿瘤大小、病理类型等无关.结论 ATX在胃癌组织的高表达可能与胃癌细胞的转移潜力有关,阻断ATX与其受体结合,降低ATX发挥生物效应,可能达到抑制胃癌细胞转移的目的,对胃癌预后判断及靶向治疗有一定指导意义.
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shRNA靶向autotaxin对人胃癌细胞AGS裸鼠移植瘤的生长的抑制效应
目的 探讨靶向autotaxin的短发夹RNA(shRNA)对人胃癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法 将已构建成功的靶向autotaxin及非特异性短发夹RNA的质粒载体pSUPER-ATX、pSUPER-mock(阴性对照)和空白质粒pSUPER-control转染胃癌AGS细胞株,并将获得的相应各组细胞与野型细胞(WT)分组种植到裸鼠皮下,以建立人胃癌裸鼠移植瘤对比模型,随后观察监测各组裸鼠的肿瘤生长情况,HE染色检测移植瘤及各器官形态学改变.第8周裸鼠处死并剥离出肿瘤组织,HE染色观察肿瘤细胞的形态,免疫组化及Western blot方法检测autotaxin蛋白及相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达.结果 各组裸鼠的内脏未受到明显的毒害和损伤.第7周pSUPER-ATX组裸鼠移植瘤的体积和质量与其余组相比均有显著性缩小(P＜0.05),抑制率大约在50％左右.与野型组、阴性对照组及空白质粒组相比,pSUPER-ATX组移植瘤的autotaxin、MMP-2、MMP-9表达均有显著性下调(P＜0.05).并且autotaxin和MMP-2的表达有明显相关性(r=0.869,P＜0.01).而阴性对照组pSUPER-mock的上述指标与野型组及空白对照组相比,其差异无统计学意义.结论 所构建的靶向autotaxin的shRNA能够抑制人胃癌AGS细胞裸鼠移植瘤的生长.
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Autotaxin在人脑胶质瘤中的表达
目的 探讨Autotaxin (ATX) mRNA在人脑胶质瘤中的表达及与人脑胶质瘤临床病理特征之间的关系.方法 收集临床切除的正常脑组织及经病理证实的各级胶质瘤组织23例,以WHO分级对其进行分组,Ⅰ～Ⅱ为良性组、Ⅲ～Ⅳ级为恶性组,其中良性胶质瘤8例,恶性胶质瘤15例.另收集正常脑组织5例,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色方法研究各组中ATXmRNA及蛋白的表达.结果 ATXmRNA在恶性脑胶质瘤表达为1.237±0.141,良性胶质瘤为1.396±0.142,均明显高于正常脑组织(1.019±0.241),有显著性差异(P＜0.05),但良、恶性胶质瘤中ATXmRNA表达无明显差异.ATX蛋白在恶性脑胶质瘤表达为0.702±0.189,良性胶质瘤为0.538±0.148,均明显高于正常脑组织(0.116±0.0625),有显著性差异(P＜0.05),但良、恶性胶质瘤中ATX蛋白表达无明显差异.结论 人脑胶质瘤中ATX在核酸与蛋白水平均有表达,ATX基因过表达可能与人脑胶质瘤的发生发展密切相关.
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Autotaxin在人卵巢癌基因及蛋白水平表达的研究及意义
目的:探讨自分泌运动因子(Autotaxin,ATX)mRNA在人卵巢癌中的表达及其与卵巢癌临床病理特征之间的关系.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot研究8例正常卵巢组织、18例良性卵巢上皮性肿瘤(以下简称良性卵巢肿瘤)、50例卵巢上皮性癌(以下简称卵巢癌)组织、23例大网膜转移灶中ATX mRNA及蛋白的表达.结果:8例正常卵巢组织、18例良性卵巢肿瘤、50例卵巢癌组织、23例大网膜转移灶中均有ATX mRNA表达;但ATX基因表达值在癌组织和大网膜转移灶中显著高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织(P＜0.001),分别为(89.31±10.15)%、(88.91±11.05)%、(40.18±16.71)%、(35.29±13.82)%.Western blot显示ATX蛋白在卵巢癌细胞中表达,在相对分子质量55×103、60×103大小的位置可见清楚的显色条带.ATX mRNA在卵巢癌细胞亦可见明显扩增条带.高表达ATX基因与卵巢癌手术分期和病理分化程度有关,而与年龄、病理类型等无关.结论:卵巢癌细胞中ATX分子在核酸与蛋白水平均有表达,两者结果一致;ATX基因过表达可能与卵巢癌的进展、转移有关.
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Autotaxin基因在人原发性开角型青光眼房水中的表达及意义
目的:探讨自分泌运动因子(Autotaxin,ATX)mRNA在人原发性开角型青光眼(Primary open angle glaucoma,POAG)房水中的表达及其与原发性开角型青光眼眼压升高之间的关系.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),研究13例原发性开角型青光眼、10例白内障、9例正常眼房水中ATX mRNA的表达.结果:13例原发性开角型青光眼、10例白内障、9例正常眼房水中均有ATX mRNA表达;但ATX基因表达值在原发性开角型青光眼房水中显著高于白内障和正常眼房水(P<0.001),分别为(65.93±15.52)%、(37.12±17.25)%、(36.78±19.82)%.结论:正常眼、原发性开角型青光眼房水中均有ATX mRNA表达,原发性开角型青光眼房水中ATX基因过表达可能与眼压升高有关.
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乙型肝炎病毒X蛋白对autotaxin表达的影响及其意义
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBx)对autotaxin(ATX)表达的影响及其意义.方法 构建重组HBx真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx和重组ATX启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-ATX,共转染HepG2细胞检测HBx对ATX基因启动子的作用.构建稳定表达HBx的HepG2.HBx细胞,Western blot检测HBx对ATX蛋白表达的影响.结果 共转染检测显示,pcDNA3.1(+)-HBx和pGL3-ATX共转染组的荧光素酶活性是空载体pcDNA3.1(+)和pGL3-ATX共转染组的1.47倍(P<0.000).Western blot检测显示,HepG2.HBx细胞ATX蛋白表达显著升高,为HepG2细胞的1.75倍(P<0.05).结论 HBx可激活ATX基因启动子,上调ATX的表达,提示HBV感染可增强ATX/溶血磷脂酸的信号转导.
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Autotaxin多克隆抗体的制备
目的:表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的Autotaxin(58-157位氨基酸)融合蛋白,制备抗Autotaxin的多克隆抗体.方法:构建pET-21c-Autotaxin(58-157)重组表达质粒,转入BL21大肠杆菌,IPTG诱导蛋白表达,经镍离子金属螯合树脂纯化后,用纯化的蛋白免疫家兔,制备抗Autotaxin的多克隆抗体.ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性,并用于免疫组化实验.结果:在大肠杆菌中高表达Autotaxin(58-157)-His6融合蛋白,经亲和纯化后免疫家兔,获得了特异性的抗Autotaxin抗血清.结论:成功构建pET-21c-Autotaxin(58-157)表达质粒,原核表达获得高纯度的目的蛋白,制备出高效价的特异性抗Autotaxin多克隆抗体.
