首页 > 文献资料
-
3’-端肽缀合修饰提高寡核苷酸的血清稳定性
RNA干扰被广泛用于传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域,但体内稳定性较差限制了其在临床上的应用.本文报道了在siRNA正义链的3端缀合不同长度的肽片段均能够明显提高血清稳定性,而在siRNA反义链的3'-端缀合相同的肽片段则对血清稳定性没有影响.血清中的RNase A能够选择性水解siRNA正义链3'-末端缀合的肽片段,从而得到原siRNA片段,但反义链3'-末端缀合肽缀合物则不能在血清中得到原siRNA片段.该结果进一步证明RNase A对siRNA双链的进攻具有方向性.
-
载siRNA阳离子脂质体的制备
目的 制备载siRNA阳离子脂质体并对其进行制剂学评价.方法 利用siRNA与溴化乙锭结合能产生荧光的原理,采用预染溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)琼脂糖凝胶,氨基丁三醇-硼酸-乙二胺四乙酸(Tris-Boric acid-EDTA,TBE)电泳缓冲液将游离siRNA分离并通过凝胶成像分析系统转换数据进行定性和定量,计算载siRNA阳离子脂质体包封率,并考察其阴离子的抵御能力和血清稳定性;利用Malver粒径和zeta电位测定仪对不同载siRNA阳离子脂质体进行评价.结果 琼脂糖凝胶电泳法的线性为0.665～ 13.30 mg·L-1(R2 =0.988 3),回收率为97％ ～ 103％,精密度RSD＜2％,阳离子脂质体对siRNA包封率较高,且具有良好的抵御阴离子能力和较强的血清稳定性;载siRNA阳离子脂质体的粒径和zeta电位变化与文献报道一致.结论 所制备的载siRNA阳离子脂质体体外性质均良好.
-
HER-2靶向光敏免疫脂质体增强乳腺癌化疗效果的实验研究
目的:构建对紫外线反应的靶向人类表皮生长因子2(human epidermal growth factorreceptor 2,HER-2)的免疫脂质体,提高化疗药物对乳腺癌细胞的杀伤效果.方法:薄膜分散法制备脂质体,表面修饰上抗HER-2抗体(曲妥珠单抗)的Fab片段,并将脂质体用紫外线进行交联,制备光敏免疫脂质体.透射电镜观察脂质体的形态,动态光散射测定脂质体的粒径和血液学稳定性,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测乳腺癌细胞MCF-7对脂质体药物的摄取能力,CCK-8试剂盒测定并比较脂质体与游离药物对乳腺癌细胞的体外杀伤效应,皮下肿瘤抑制实验比较脂质体药物与游离药物对乳腺癌细胞的体内杀伤效应.结果:本研究制备出的对紫外线敏感的HER-2靶向脂质体具有规整的球状结构、合适的粒径大小和较强的稳定性.乳腺癌细胞MCF-7对免疫脂质体的摄取能力较非靶向脂质体和游离DOX显著增强(P均＜0.05).进一步研究显示,光敏免疫脂质体药物对MCF-7细胞的体外杀伤能力明显优于非靶向脂质体药物和游离药物(P均＜0.05).体内研究结果显示,与非靶向脂质体药物和游离药物相比,免疫脂质体药物能够显著降低荷瘤小鼠的皮下肿瘤负荷(P均＜0.05).结论:本研究制备的靶向HER-2的光敏免疫脂质体拥有较好的稳定性和极强的肿瘤杀伤效果,具有广阔的临床应用前景.
关键词： 乳腺癌 Trastuzumab 化疗 光敏免疫脂质体 血清稳定性 -
靶向VEGFR2基因的siRNA分子血清稳定性及其基因沉默效应
目的 设计并合成抗小鼠VEGFR2基因的siRNA分子(siVEGFR2),研究其血清稳定性和基因沉默效应,以便进一步研究经组织靶向性结构修饰后该siRNA分子的特性.方法 设计并合成抗小鼠VEGFR2基因的siRNA分子,在37℃条件下与新鲜血清共孵育24h,不同时间点后取样电泳观察其完整性;用脂质体介导转染体外培养的MS1细胞,通过半定量RT-PCR分析基因沉默效果.结果 随着孵育时间延长,未经修饰的siVEGFR2分子在血清中逐渐降解;经sivEGFR2转染的MS1细胞中,VEGFR2mRNA的表达水平明显下降,与空白转染组和对照siRNA转染组相比有显著差异(P<0.001),而空白转染组和对照siRNA转染组间比较无显著性差异(p=0.157).结论 裸siVEGFR2分子在血清中容易降解,siVEGFR2能特异性沉默靶基因的表达,为下一步体内应用siVEGFR2分子时稳定性修饰的必要性提供了理论依据.
关键词： siRNA 血管内皮生长因子受体2 血清稳定性 基因沉默 -
HER-2寡脱氧核苷酸-叶酸药物的生物学特性
目的研究HER-2寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)与叶酸连接药物的生物学特性.方法HER-2反义、正义和无义寡脱氧核苷酸与叶酸联接,形成ODN-FA,标记放射性核素锝(99m Tc),与新鲜人血浆孵育1.5h、4h和6h,测定血浆蛋白结合率.在新鲜人血清37℃孵育0.5h、2h、4h和6h,用纸层析法测定血清稳定性.结果99m Tc-ODN-FA的血浆蛋白结合率为反义、正义和无意义寡核苷酸分别为10.58%、12.24%和11.01%;6h血浆蛋白结合率明显升高,分别为24.45%、23.58%和24.33%,差异具有显著意义(P＜0.01).99mTc-ASODN-FA、99mTc-SODN-FA和99mTc-NODN-FA 6h放化纯分别为92.20%、92.12%和91.31%,与0.5 h相比略有降低,差异无显著意义.结论HER-2寡脱氧核苷酸叶酸药物的血浆蛋白结合率6h时为24%,在血清中6 h内稳定,能够满足体内外分析的要求.
