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米非司酮在抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药产生的作用
目的：探讨米非司酮在抑制卵巢癌细胞株skov3、A2780对紫杉醇耐药产生的作用。方法在紫杉醇诱导卵巢癌细胞株skov3、A2780的过程中,使用不同浓度米非司酮,应用免疫组化方法比较受不同浓度米非司酮作用的各组细胞株的P糖蛋白(p-glyco-protein, P-gp)的表达,同时检测各细胞的生长曲线。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的半数致死浓度(IC50)；采用罗丹明123(Rh123)为荧光探针,使用流式细胞仪比较各株细胞的胞内Rh123含量。结果紫杉醇诱导卵巢癌耐药的过程中使用米非司酮,诱导后卵巢癌细胞株skov3、A2780中P-gp含量有所下降。结论米非司酮可抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药的产生。
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卵巢癌对顺铂类药物耐药性的相关分析
目的：筛选影响卵巢癌顺铂耐药性的靶点基因。方法从GEO数据库中下载对顺铂敏感和产生抗药性的人类卵巢癌细胞基因表达谱和甲基化谱数据（GSE15709），利用R的相关工具包筛选A2780和A2780/DDP（顺铂耐药卵巢癌细胞系）两类卵巢癌细胞之间的差异表达和差异甲基化的基因；使用DAVID数据库对差异表达基因进行功能富集分析；对同时发生了差异甲基化、差异表达且甲基化水平、表达水平的变化趋势相反的基因，进一步利用qRT-PCR技术检测这些基因在两种卵巢癌细胞中的表达值。结果研究发现在两种卵巢癌细胞之间发生了416个差异表达和281个差异甲基化的基因，这些差异表达基因主要富集于细胞周期、核分裂和蛋白修饰负调控等生物过程。此外，细胞周期、DNA复制和p53等通路在这些基因中同样富集。共发现4个发生了差异甲基化、差异表达且甲基化变化水平、表达水平变化趋势相反的基因，qRT-PCR实验验证了这些基因在两种卵巢癌细胞中的表达水平。结论利用生物信息学和分子生物学相结合的方法，可以筛选出部分影响卵巢癌对顺铂抗药性的基因，为进一步揭示其中的分子机制提供实验参考。
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2-羟基-3-甲基蒽醌联合紫杉醇对卵巢癌细胞Caspase-8、Caspase-9及Caspase-3表达影响
目的 研究中药白花蛇舌草的有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌联合紫杉醇对人卵巢癌细胞A2780生长的抑制作用和细胞凋亡的影响,以探讨两药联合对A2780细胞的作用机制.方法 将对数生长期的A2780细胞随机分为空白对照组(A组)、B组(紫杉醇3 μg/ml)、C组(2-羟基-3-甲基蒽醌50μM)和D组(2-羟基-3-甲基蒽醌50 μM+紫杉醇3μg/ml).采用MTT法检测各组细胞的活性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;采用荧光比色法测定Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3蛋白酶的活性.结果 与A组比较,B、C、D组对A2780细胞均有明显的抑制生长及诱导凋亡作用;D组对A2780细胞的抑制及诱导凋亡作用显著高于C组或B组(P＜0.05);各组抑制率及凋亡率均呈时间依赖性(P＜0.05).Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3蛋白酶的表达从A～D组呈逐渐升高的趋势.结论 2-羟基-3-甲基蒽醌可协同紫杉醇促进A2780细胞凋亡,其机制可能是通过增加Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的表达.
关键词： 白花蛇舌草 2-羟基-3.-甲基蒽醌 紫杉醇 A2780 凋亡 -
siRNA特异沉默卵巢癌细胞CD59基因的裸鼠移植瘤研究
目的:通过体内动物实验研究CD59-siRNA对卵巢癌细胞CD59的沉默效应及抑瘤作用,探讨CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用.方法:将转染CD59干扰质粒的A2780细胞(T组)、转染空质粒的A2780细胞(V组)及未转染的A2780细胞(C组)分别接种于裸鼠皮下,通过绘制肿瘤生长曲线,裸鼠移植瘤组织切片CD59 mRNA原位杂交及CD59蛋白的免疫组化研究其抑瘤效应及对CD59的沉默效应.结果:肿瘤生长曲线显示,与对照组相比,CD59干扰质粒转染组肿瘤生长明显受抑制(P<0.05).原位杂交及免疫组化结果表明,干扰组的CD59 mRNA及CD59蛋白与对照组相比显著降低(P<0.05).结论:裸鼠体内实验表明,特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达,增加了卵巢癌细胞对补体攻击的敏感性,从而抑制卵巢癌在体内的生长,进一步说明了CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用.
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微小RNA-134-5p靶向作用于EGFR对卵巢癌SKOV3和A2780细胞生长的影响
目的 探讨微小RNA-134-5p(miR-134-5p)靶向作用于表皮生长因子受体(EGFR)基因对卵巢癌细胞生长的影响.方法 以卵巢癌细胞系SKOV3和A2780为研究对象,根据处理方法分为对照组(转染miR-NC)和实验组(转染miR-134-5p).采用qRT-PCR和Western blot检测EGFR基因及下游靶蛋白的表达量;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测卵巢癌细胞增殖能力.结果 实验组EGFR基因及下游靶蛋白表达显著下调,其中SKOV3细胞中EGFR mRNA下调至48％(P＜0.05),A2780细胞中EGFR mRNA下调至47％(P＜0.05).实验组细胞的细胞周期明显受到抑制(P＜0.05),miR-134-5p通过EGFR靶蛋白诱导细胞凋亡(P＜0.05).实验组细胞的增殖活性和集落形成能力明显受到抑制(P＜0.05).结论 miR-134-5p可通过靶向抑制EGFR基因,促进细胞周期停滞和细胞凋亡,降低卵巢癌细胞的增殖能力.
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白英对A2780人卵巢癌细胞增殖的抑制作用
目的:探讨白英的抗肿瘤作用.方法:以MTT法、生长曲线法、集落形成法观察白英对人卵巢癌A2780细胞的体外抑制作用.结果:白英能明显抑制体外培养的A2780细胞的生长,MTT法IC50为20.39 mg/ml;细胞生长曲线法提示其对A2780细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成法,当药物浓度为14.81 mg/ml、9.88 mg/ml时,抑制率均为100%;当药物浓度为6.58 mg/ml时,抑制率为41.86%.结论:白英对体外培养的A2780细胞有明显的抑制作用.
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siRNA介导的RNAi降低了CD59对补体溶破的抵抗作用
目的:构建针对人CD59基因的siRNA表达载体并筛选稳定细胞系,观察CD59基因改变后对补体溶破的抵抗作用的变化,探讨CD59在肿瘤细胞免疫逃逸及相关信号转导通路中的作用.方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性CD59基因的重组载体,脂质体法转染A2780细胞,G418筛选建立稳定抑制的细胞克隆,RT-PCR和Western blot检测转染细胞中CD59基因的表达抑制效果,染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用的影响.结果:重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确;重组载体转染A2780细胞,可表达绿色荧光蛋白,经G418筛选,得到抗性细胞克隆,RT-PCR和Western blot表明,稳定转染后CD59基因的mRNA和蛋白水平降低,染料释放试验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低.结论:特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体以及稳定抑制的细胞系构建和筛选成功,CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用降低,为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础.
