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胞壁酰二肽对人牙髓细胞分化影响的研究
目的 探讨天然免疫受体核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(nucleotide-binding oligomerization domain-2,NOD-2)在深龋牙髓组织中的表达及NOD-2特异性配体胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)对人牙髓细胞分化的影响.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测深龋及健康人牙髓组织中NOD-2表达差异;1 mg/L MDP刺激体外培养的人牙髓细胞0、2、6、12、24 h,实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹法及免疫荧光检测NOD-2基因及蛋白表达;不同质量浓度MDP刺激人牙髓细胞24 h,蛋白质免疫印迹法检测24 h后牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)的表达;0.1 mg/L MDP 作用于人牙髓细胞0、2、6、12、24 h,检测不同时间点牙本质涎磷蛋白(sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙蛋白mRNA及骨桥蛋白的表达.结果深龋牙髓组织中NOD-2 mRNA相对表达量为(0.2610±0.0824),较健康牙髓组织(0.0024±0.0002)显著增高(P<0.05).实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法结果显示NOD-2表达随时间上调,免疫荧光检测证实NOD-2蛋白表达于胞质.MDP质量浓度为0.1 mg/L时DSP蛋白表达量大(0.3782±0.0564),并随MDP质量浓度增加而下降;DSPP、骨钙蛋白mRNA表达呈时间依赖性,12 h达大值,24 h后有所下降;骨桥蛋白表达量随时间上调.结论深龋牙髓组织中NOD-2表达升高,MDP与人牙髓细胞的分化相关.
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烫伤后脓毒症大鼠肺组织炎症反应和自噬与NOD2信号通路的关系
目的 评价烫伤后脓毒症大鼠肺组织炎症反应和自噬与Nod样受体2(NOD2)信号通路的关系.方法 SPF级健康雄性SD大鼠20只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法分为2组(n=10):对照组(C组)和烫伤后脓毒症组(SS组).于20％总体表面积Ⅲ度烫伤(背部皮肤浸入99～100℃热水中,持续12 s)后24 h静脉注射胞壁酰二肽5 mg/kg的方法制备烫伤后脓毒症模型.C组于20℃水中假烫伤后24 h静脉注射生理盐水1 ml.SS组于静脉注射胞壁酰二肽后6h、C组于注射生理盐水后6h时,取动脉血标本,采用ELISA法检测血清TNF-α和IL-6浓度,随后取肺组织,测定髓过氧化物酶(MPO)活性,采用RT-PCR法检测肺组织NOD 2 mRNA的表达,采用Western blot法检测受体相互作用蛋白-2(RICK)、NF-κBp65和微管相关蛋白1轻链3Ⅰ和Ⅱ(LC3 Ⅰ、LC3Ⅱ)的表达.计算LC3 Ⅰ与LC3Ⅱ的比值(LC3 Ⅰ/Ⅱ).结果 与C组比较,SS组肺组织NOD2 mRNA、RICK、NF-κBp65表达上调,LC3 Ⅰ/Ⅱ、血清TNF-α和IL-6浓度升高(P＜0.05).结论 大鼠烫伤后脓毒症时肺组织炎症反应和自噬水平增强的机制可能与NOD2信号通路激活有关.
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NOD1和NOD2基因多态性与胃癌遗传易感性的研究
目的 探索NOD1和NOD2功能性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点与胃癌易感性的关系.方法 采用病例对照研究设计,比较病例组与对照组先天免疫反应信号通路相关基因NOD1和NOD2功能SNPs的频率差异.结果 携带NOD1 rs2906766 C等位基因,可显著增加60岁及以上的个体(调整OR=1.30,95% CI=1.02～1.65)、吸烟者(调整OR=1.38,95% CI=1.05～1.82)和H.pylori阴性者(调整OR=1.36,95% CI=1.03～1.79)发生胃癌的风险,但没有发现NOD2 rs3135500位点A>G的改变与中国人群胃癌的发生有关联.结论 NOD1基因rs2906766位点C>T的改变与中国人群胃癌的遗传易感性有关联,但需要在更大样本中验证这一结果,并开展功能学研究以揭示其潜在的生物学机制.
关键词： Nod1信号接头蛋白质 Nod2信号接头蛋白质 胃肿瘤 多态现象 遗传 -
NOD2调控Snail表达在糖尿病肾病足细胞上皮-间质转分化中的作用
目的 观察高糖环境中足细胞核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)、上皮-间质转分化(EMT)相关蛋白的表达,探讨NOD2参与EMT的分子机制.方法 常规方法培养人肾小球足细胞,高糖刺激后细胞免疫荧光法检测EMT相关蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、nephrin的表达;实时荧光定量PCR和Western印迹法检测NOD2、锌指转录因子(Snail)和足细胞EMT相关蛋白α-SMA、结蛋白(Desmin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)及Nephrin的表达.shRNA干扰NOD2表达后再给予高糖刺激细胞,Western印迹法检测Snail及后续EMT相关蛋白的表达情况.用shRNA干扰Snail表达后,胞壁酰二肽(MDP)活化NOD2,Western印迹法检测E-cadherin、Nephrin、Desmin、α-SMA的表达.结果 高糖刺激24 h后,与正常对照组相比,高糖组NOD2、Snail mRNA和蛋白的表达明显增加;上皮表型蛋白E-cadherin、Nephrin mRNA和蛋白的表达下调,间质表型蛋白Desmin、α-SMA mRNA和蛋白的表达上调(均P＜0.05);高渗对照组无明显变化.干扰NOD2表达后,Snail及EMT相关蛋白表达异常均得到恢复,与高糖组相比差异有统计学意义(均P＜ 0.05).与MDP组相比,MDP+shRNA-Snail组细胞E-cadherin、Nephrin蛋白的表达明显增加;Desmin、α-SMA表达明显减少(均P＜0.05).结论 高糖可诱导足细胞NOD2表达,并通过上调Snail表达促进足细胞上皮-间质转分化.以NOD2/Snail/EMT通路为靶点的基因干预可减轻高糖引起的足细胞损伤,可能为糖尿病肾病的治疗提供新思路.
关键词： Nod2信号接头蛋白质 细胞转分化 足细胞 锌指转录因子
