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葡萄糖浓度影响寡发酵链球菌抑制变形链球菌作用的研究
目的 研究不同葡萄糖浓度对寡发酵链球菌(Streptococcus oligofermentans,So)与变形链球菌(Streptococcus mutans,Sm)之间相互作用的影响,及对So产过氧化氢能力的影响.方法通过平板培养法观察在不同葡萄糖浓度下So与Sm之间的相互作用；运用4-氨基安替吡啉-辣根过氧化物酶法测定不同葡萄糖浓度下So过氧化氢的初始产生速率和产量.结果环境葡萄糖浓度为0、10、50 mmol/L时均可见So对Sm有抑制作用；Sm受抑制区面积占菌膜面积比值:同时接种So和Sm时,无糖环境比值为0.202±0.005,10、50 mmol/L葡萄糖环境分别为0.467±0.025和0.468±0.028；先接种So再接种Sm时,无糖环境比值为0.394 ±0.004,10 mmol/L葡萄糖环境为0.811 ±0.075,50 mmol/L葡萄糖环境为0.816 ±0.007.葡萄糖浓度为10、50 mmol/L时So对Sm的抑制作用均较无糖环境下显著(P＜0.05),但两种浓度抑制作用差异无统计学意义(P＞0.05).葡萄糖浓度为10、50 mmol/L时So的过氧化氢初始产生速率[(23.573±0.263)、(23.337±0.473) μmol·L-1·min -1]均显著高于无糖环境[(10.513 ±0.516) μmol·L-1·min-1],P ＜0.05.无糖环境下So对数生长期各时段过氧化氢产量高于有糖环境(P＜0.05).1000 mmol/L葡萄糖环境下未见So抑制Sm,亦未能检测到So产生过氧化氢.结论So抑制Sm的能力受糖环境的影响,在10、50 mmol/L葡萄糖环境下,So具有更强的抑制Sm能力.
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寡发酵链球菌乳酸脱氢酶蛋白质结构的预测
目的 探讨寡发酵链球菌和口腔中不同产酸能力的细菌乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)基因序列和蛋白质各级结构的差异,为进一步研究寡发酵链球菌糖代谢的生化机制提供依据.方法 寡发酵链球菌LDH的基因序列由中科院微生物所测出.通过美国国家生物技术信息中心的Genbank数据库查找变形链球菌、血链球菌和干酪乳杆菌LDH的基因序列,用BLAST软件对各细菌LDH的基因序列和氨基酸序列进行比对.采用蛋白分析专家系统(Expert Protein Analysis System,ExPASy)对寡发酵链球菌、变形链球菌、血链球菌和干酪乳杆菌LDH蛋白质的理化性质、二级结构、结构域和空间结构进行预测并比较.结果 寡发酵链球菌LDH的基因序列共987个碱基对,与血链球菌相似性高(89％),与变形链球菌的相似性为81％,与干酪乳杆菌相似性低(70％)；寡发酵链球菌LDH氨基酸序列与血链球菌的相似性高达96％,与变形链球菌相似性较低(86％),与干酪乳杆菌的相似性仅为66％；寡发酵链球菌LDH蛋白质的理化性质、跨膜区数目、二级结构的比例、结构域位置与其他3种细菌均相近,LDH的空间结构与变形链球菌、干酪乳杆菌明显不同,与血链球菌也有差异.结论 寡发酵链球菌LDH在基因序列、氨基酸序列及空间结构上与变形链球菌和干酪乳杆菌的差异,可能是导致其LDH生物学功能改变,不能产生乳酸的一个内在原因.
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寡发酵链球菌分子标识鉴定方法的建立
目的 建立快速、有效鉴定寡发酵链球菌的方法,并验证其准确性.方法 以9种口腔链球菌11株标准菌株的DNA为模板,用寡发酵链球菌16S rDNA的特异引物和乳酸氧化酶基因的引物通过PCR分别扩增这两个基因的部分片段,建立用分子标识鉴定该菌的方法.并从9个无龋的志愿者口腔中取得集合牙菌斑,在加红霉素的轻唾琼脂平板中进行培养,分离到疑似寡发酵链球菌的菌落后,用已建立的方法进行鉴定.并对初步鉴定为寡发酵链球菌的分离株进行16S rDNA序列同源性分析,以确定鉴定的准确性.结果 用建立的分子标识鉴定方法,发现在11株标准菌株中只有3株寡发酵链球菌有扩增产物;用该方法鉴定为寡发酵链球菌的来自无龋志愿者牙菌斑的分离株,经16S rDNA序列同源性分析证实确实为寡发酵链球菌.结论 用寡发酵链球菌16S rDNA特异性引物和乳酸氧化酶基因引物进行两步PCR来鉴定寡发酵链球菌是准确、可靠的.
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菌斑细菌糖酵解前后胞内乳酸脱氢酶活性的研究
目的 研究细菌胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)在糖酵解过程中的表达特性,以了解菌斑细菌代谢的产酸机制.方法 取3种临床分离菌株(发酵乳杆菌、变形链球菌及寡发酵链球菌)和临床混合牙菌斑,在给糖前后经超声破壁后采用连续动力学法检测细菌胞内LDH活性.结果 单菌和集合菌斑细菌糖酵解前后LDH活性均无变化.但不同细菌LDH活性不同,发酵乳杆菌LDH活性[(52.91 ±8.97) U/mg]显著高于寡发酵链球菌[(0.61 ±0.05) U/mg]和变形链球菌[(0.32 ±0.07) U/mg],P＜0.01；集合菌斑LDH活性为(16.48±3.83) U/mg,加入1,6-二磷酸果糖(fructose 1,6-diphosphate,FDP)后活性显著增高[(26.37 ±8.26) U/mg] (P＜0.01).结论 不同菌种胞内LDH的活性不同,牙菌斑中存在FDP依赖型的细菌.
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环境氧条件影响寡发酵链球菌抑制变形链球菌作用的研究
目的 探讨外界环境氧气条件的改变对寡发酵链球菌(Streptococcus oligofermentans,So)与变形链球菌(Streptococcus mutans,Sm)之间抑制作用的影响,以及对So产过氧化氢能力的影响,以期探讨这两种细菌在不同口腔环境条件下的共存模式.方法 通过二氧化碳培养法建立细菌培养的有氧和厌氧环境;运用平板培养法观察So与Sm之间的抑制作用;运用4-氨基安替吡啉-辣根过氧化物酶法测定有氧和厌氧环境下So对数生长期各时间段过氧化氢的产量和So生长周期过氧化氢初始产生速率.结果 同时接种So和Sm,厌氧环境下未见So抑制Sm,有氧环境下So轻度抑制Sm,受抑制区面积约为菌膜面积的1/5;先接种So再接种Sm,两种环境下均可见So抑制Sm,厌氧环境下受抑制区面积约为菌膜面积的1/5,有氧环境下约为4/5;先接种Sm再接种So,两种环境下均未见So生长;有氧环境下So对数生长期各时间段过氧化氢产量明显高于厌氧环境(P<0.05);厌氧环境下So生长周期过氧化氢初始产生速率为每分钟(11.84±3.97) μmol/L,仅为有氧环境时[(24.13±4.46) μmol/L]的49%(P<0.05).结论 环境氧条件影响So对Sm的抑制作用,有氧环境下抑制作用更强;有氧环境下So产过氧化氢的能力强于厌氧环境.
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寡发酵链球菌在大鼠口腔内定植状态的观察
目的：对寡发酵链球菌在大鼠口腔内高糖环境下的定植能力进行初步探索。方法：21天龄SPF-SD大鼠48只，24～27天喂以氨苄青霉素水溶液（内源性细菌抑制），28天时将大鼠分为4组，每组12只，高糖持续饲喂，28～30天连续3天接种菌液，组1（SM组）接种变形链球菌菌液，组2（SO组）接种寡发酵链球菌菌液，组3（SO＋SM混合接种组）接种变形链球菌和寡发酵链球菌混合菌液，组4为阴性对照组，不接种任何菌液。细菌接种次日和第10天，用无菌棉签擦取大鼠双侧下颌磨牙（6颗）牙合面、颊、舌面的菌斑，PBS系列稀释，SM组接种于MSB平皿和BHIS血平皿，SO组接种于MSAE平皿，SO＋SM混合接种组接种于MSB平皿、MSAE平皿和BHIS血平皿，阴性对照组接种于MSB平皿和MSAE平皿。从MSB平皿筛选、计数变形链球菌，从MSAE平皿筛选寡发酵链球菌疑似菌落并16S rDNA测序鉴定寡发酵链球菌。结果：SO组接种寡发酵链球菌次日，寡发酵链球菌检出率为33．3％（4／12）；SO＋SM混合接种组接种次日寡发酵链球菌检出率为0，而变形链球菌检出率为100．00％，变形链球菌占总菌的比例为14．70％±4．53％；SM组在接种次日的变形链球菌检出率也为100．00％，其占总菌的比例为12．42％±4．27％，与SO＋SM混合接种组相比差异无统计学意义。SO组接种寡发酵链球菌第10天，寡发酵链球菌检出率为0；SO＋SM混合接种组接种第10天，寡发酵链球菌检出率亦为0，而变形链球菌检出率为100．00％，变形链球菌占总菌的比例为15．78％±5．10％；SM组在接种第10天的变形链球菌检出率也为100％，其占总菌的比例为17．08％±5．75％，与SO＋SM混合接种组相比差异无统计学意义。结论：本实验条件下，在大鼠口腔内高糖环境下，寡发酵链球菌在大鼠口腔内呈一过性显现，不能定植。
关键词： 寡发酵链球菌 链球菌 变异 大鼠 Sprague-Dawley -
变异链球菌与部分口腔其他细菌生态关系的研究进展
在牙菌斑生物膜中,有超过700种的微生物已经被鉴别出来,细胞密度可以达到1011 CFU/ml.牙菌斑生物膜中微生物的高密度和多样性,加上有限的能量供应,导致了种间的激烈竞争和相互协同.
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蔗糖环境影响寡发酵链球菌抑制变形链球菌
目的：探讨环境蔗糖对寡发酵链球菌（So）抑制变形链球菌（Sm）作用及对 So 产过氧化氢能力的影响。方法：用平板培养法观察不同蔗糖环境下 So 与 Sm 之间的相互作用；用4-氨基安替吡啉-辣根过氧化物酶法测定 So 过氧化氢的初始产生速率和产量。结果：500 mmol/L 蔗糖环境下未见 So 对 Sm 的抑制作用，其它浓度蔗糖环境下 So 对 Sm 的抑制作用为：50 mmol/L ＞0 mmol/L 和1 mmol/L（P ＜0．05）；不同蔗糖环境下 So 过氧化氢初始产生速率为：50 mmol/L ＞0 mmol/L 和1 mmol/L＞500 mmol/L（P ＜0．05）；过氧化氢总产量为：0 mmol/L 和1 mmol/L ＞50 mmol/L ＞500 mmol/L（P ＜0．05）。当 So 先接种时对Sm 的抑制能力优于同时接种。结论：蔗糖浓度影响 So 对 Sm 的抑制能力及 So 产过氧化氢的能力。
