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突变型Rad50蛋白增强放射线对鼻咽癌细胞株CNE1的杀伤作用
目的 探讨突变型Rad50蛋白联合放射线照射对人鼻咽癌细胞株CNE1杀伤作用.方法 实验设空白对照组、Ad-Rad50-GFP作用组、Ad-EGFP作用组、单纯照射组、Ad-Rad50-GFP+照射组、Ad-EGFP+照射组,携带突变型Rad50蛋白基因的重组腺病毒载体Ad-Rad50-GFP转染CNE1细胞,免疫印迹实验检测MRN复合体相关组分Mre11、Rad50、Nbs1的表达情况,中性彗星电泳检测突变型Rad50蛋白对细胞损伤修复的影响,细胞生长曲线研究突变型Rad50蛋白联合放射线照射对细胞生长的影响.结果 照射完成时和照射后24h,Ad-Rad50-GFP作用组中Mre11、Rad50、Nbs1的表达量均显著低于空白对照组(照射完成时:0.48比0.62,0.42比0.50,0.53比0.69,照射后24 h:0.41比0.69,0.46比0.58,0.34比0.78,P值均＜0.05);在照射后不同时间点,Ad-Rad50-GFP+照射组的平均尾矩(MTM)均高于单纯照射组(照射完成时:16.06比14.8,照射后24 h:58.23比15.89,照射后48 h:45.12比11.42,P值均＜0.05);照射后第7天,Ad-Rad50-GFP+照射组细胞数量显著均低于空白对照组和单纯照射组(P值均＜0.05).结论 突变型Rad50蛋白细胞内表达可显著增强放射线对鼻咽癌细胞株CNE1的杀伤作用.
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MRN复合物(MRE11/RAD50/NBS1)生物学作用的研究进展
双链DNA损伤(double strand breaks,DSBs)是导致基因组不稳定和细胞死亡的主要原因.MRE 11/RAD50/NBS1是检测和修复DSBs的重要复合物[1].细胞代谢过程中的复制、有丝分裂及遗传毒性化学物质和放射治疗均能引起DSBs[2-3].MRN复合物在DSBs修复过程中发挥重要作用,参与起始修复、引发信号转导和协助修复等DNA损伤修复应答的每个环节[4].近些年,在放射治疗敏感性的探索中发现,抑制MRN复合物活性,阻碍肿瘤细胞的DNA损伤修复,可达到放疗增敏的目的[5].
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骨肉瘤顺铂化疗耐药与FoxM1、Rad50的关系及临床意义
目的 探讨FoxM1和DNA修复基因Rad50在骨肉瘤细胞、临床组织样本中的表达及与临床病理特征的关系.方法 收集84例骨肉瘤均有完整的临床、影像和随访资料;采用qRT-PCR、Western blot法检测2株亲本骨肉瘤细胞与顺铂耐药细胞中FoxM1和Rad50 mRNA及蛋白水平的表达;应用免疫组化法检测84例临床骨肉瘤组织中FoxM1和Rad50蛋白表达,并分析其表达与临床病理特征及预后的关系.结果 qRT-PCR和Western blot结果显示:FoxM1和Rad50 mRNA及蛋白水平在耐药细胞中表达较亲本细胞明显增高;免疫组化结果显示:FoxM1及Rad50在骨肉瘤组织中的高阳性率分别为33.33％和38.10％,与低表达患者相比,高表达患者总生存率较低、Enneking分期较高,差异有统计学意义(P＜0.05);与患者年龄、性别、部位、组织学类型等其它临床病理因素差异均无显著性(P＞0.05);相关性分析显示FoxM1和Rad50表达呈正相关(rs=0.390,P＜0.01).结论 FoxM1和RadS0可作为预测骨肉瘤生物学不良行为的指标,有望成为逆转骨肉瘤化疗耐药的潜在靶点.
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RAD50、CDHR3、CYP27 B1基因多态性与儿童哮喘易感性的关系
目的：探讨RAD50、CDHR3、CYP27B1基因多态性与儿童哮喘发病风险的关系。方法采用病例－对照的研究方法，对入组的80例哮喘儿童（哮喘组）和80例健康儿童（对照组）应用质谱SNP技术，研究RAD50基因位点rs6871536、CDHR3基因位点rs 6967330、CYP27B1基因位点rs10877012的单核苷酸多态性，计算其基因型频率和等位基因频率，并分析基因位点的多态性与儿童哮喘发病风险间的关系。结果哮喘组与对照组rs6871536位点基因型及等位基因频率差异均有统计学意义（ P均＜0．05）；哮喘组与对照组rs6967330、rs10877012基因型比较差异无统计学意义（P均＞0．05）。突变等位基因C、T与哮喘有相关性，TT、CC型的OR（95％CI）分别为0．407（0．231～0．718）、0．677（0．546～0．839）。结论 RAD50基因rs6871536位点多态性可能与儿童哮喘相关；CDHR3基因rs 6967330位点多态性和CYP27B1基因位点rs10877012位点多态性可能与儿童哮喘无相关性。
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靶向抑制 Rad50提高头颈部鳞癌细胞放疗敏感性的初步研究
目的：探讨靶向抑制 Rad50对头颈部鳞癌细胞系放疗敏感性的影响。方法：用 siRNA 技术建立并筛选 Rad50靶向抑制的 Tca8113和 OSCC-15稳转细胞系，联合应用单次小剂量放疗（2 Gy）处理细胞，Western blot 检测 Rad50的表达变化；通过Comet assay 检测细胞核 DNA 的双链断裂情况，细胞克隆形成实验检测细胞存活分数的变化；Telomere FISH 检测细胞端粒长度的变化。结果：与单次小剂量放疗（2 Gy）处理组相比较，Rad50靶向抑制联合放疗处理的 Tca8113和 OSCC-15稳转细胞系， Rad50蛋白表达显著降低，细胞核 DNA 的双链断裂损伤明显加重，细胞增殖速率明显减慢，细胞核内染色体端粒的长度均明显变短。结论：靶向抑制 Rad50可以显著增强 Tca8113和 OSCC-15细胞的放疗敏感性。
