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促进体外培养人鼻中隔软骨细胞增殖方法的研究
目的:研究促进人鼻中隔软骨细胞在体外增殖的方法,为人鼻中隔软骨细胞在软骨组织工程的应用提供方法和理论依据.方法:研究三种培养基(DMEM、F-12、1640)、胰岛素、琼脂和肌苷对正常成人鼻中隔软骨细胞体外培养的影响.结果:1640培养基和新生牛血清适合进行人鼻中隔软骨细胞培养,胰岛素可保持软骨细胞生长,琼脂可促进软骨细胞表型稳定;在1640培养基条件下,肌苷对软骨细胞的生长无明显的促进作用.
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水溶性紫杉醇衍生物PLT抗肿瘤活性的实验研究
目的:观察水溶性紫杉醇衍生物(Peg-Leu-Taxol,PLT)的抗肿瘤活性及机制.方法:以MTT还原法检测PLT对肿瘤细胞生长的抑制作用,以相差显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变,免疫组化方法检测细胞生长相关基因p21wafl表达.结果:PLT能明显抑制乳腺癌(MCF-7)、非小细胞肺癌(PG-49)和红白血病(K562)细胞的生长.细胞形态呈凋亡特征性改变,细胞皱缩,核染色质凝缩、碎裂、亮珠状浓染.细胞p21wafl蛋白表达显著增高.结论:PLT具有明显的抗肿瘤活性,其诱导肿瘤细胞凋亡与p21wafl基因表达上调有关.
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银耳多糖抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖机制的实验研究
[目的] 探讨银耳多糖抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖的作用机理.[方法] 体外培养肝癌HepG-2细胞,分别用不同浓度的银耳多糖(0、5、10、20和40 μmol/L)处理培养2d,采用MTT法测定各浓度银耳多糖对细胞增殖的抑制率;收集20 μmol/L银耳多糖作用24h和48h后的HepG-2细胞和对照细胞.抽提DNA电泳检测;收集201 μmol/L银耳多糖作用48h后的HepG-2细胞和对照细胞,抽提总RNA,半定量RT-PCR检测抗凋亡基因survivin的mRNA表达水平.[结果] 银耳多糖对体外培养的肝癌HepG-2细胞的IC50值为10 μg/ml,且随银耳多糖浓度不同其对细胞增殖的抑制率明显不同(P<0.05),高抑制率可达77.5%.经银耳多糖作用后的细胞出现明显的DNA ladder现象.而银耳多糖干预组细胞的survivin转录水平显著低于对照组(P<0.05).[结论] 银耳多糖对肝癌HepG-2细胞体外增殖具有抑制作用,并可通过下调survivin基因的转录而诱导HepG-2细胞凋亡.
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体外大鼠肝细胞坏死性损伤模型的建立
目的建立体外肝细胞坏死性损伤模型,为进一步研究药物对体外肝细胞损伤的保护作用奠定基础.方法采用Ⅳ型胶原酶灌流法分离大鼠肝实质细胞并进行体外培养,利用四氯化碳(CCl4)和过氧化氢(H2O2)体外诱导肝细胞坏死性损伤,检测ALT、AST、MDA、GSHpx等指标和采用MTT比色法.结果 CCl4体外诱导肝细胞损伤的适损伤浓度和损伤时间为:8 mmol.L-1,6 h;H2O2体外诱导肝细胞坏死性损伤的适损伤浓度和损伤时间为0.6 mmol.L-1,1 h.结论利用适损伤浓度的CCl4和H2O2分别与大鼠肝细胞共培养适损伤时间,可建立两种理想的体外肝细胞坏死性损伤模型.
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局部使用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)治疗重度粘膜炎
溃疡性口腔粘膜炎是恶性肿瘤化疗后一种常见的副反应,综合发生率约40%.口腔粘膜炎会使患者出现不适、疼痛感以及影响口腔营养摄入.
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VLDL对人尿酸盐转运蛋白hOAT1基因表达的影响
目的 观察不同浓度极低密度脂蛋白(VLDL)对肾小管上皮细胞(HK-2细胞)人尿酸盐转运蛋白(hOAT1)mR-NA表达的影响.方法 根据培养液中所含VLDL浓度的不同,将HK-2细胞分为:①单纯采用DMEM培养基组(对照组);②DMEM培养基+50μmol/L VLDL组(V1组);③DMEM培养基+400μmol/L VLDL肌组(V2组).每组培养6瓶细胞,在不同培养液中分别培养48h.采用实时荧光定量PCR检测HK-2细胞中hOAT1mRNA的相对表达量(2-△△Ct法).结果 所有标本均能检测到hOAT1的表述,且V1组hOAT1 mRNA表达量为对照组的41.6%,V2组为对照组的34.5%.两组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05).但两组间差异无统计学意义(P=0.927).结论 VLDL可下调hOAT1mRNA的表达,可能与脂代谢紊乱易合并高尿酸血症有关.
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白细胞介素-1α刺激培养的人眼小梁细胞表达P38的影响
目的 通过体外培养的猪眼小梁细胞,观察白细胞介素1-α(interleukin-1α,IL-1α)对体外培养的猪眼小梁细胞P38通路的影响,以期发现青光眼发病的病理生理机制.方法 取猪眼小梁组织进行小梁细胞体外培养,取传3～5代的猪眼小梁细胞,分对照组和IL-1α组,采用免疫组织化学染色检测培养的猪眼小梁细胞P38的表达情况;Western blotting技术检测小梁细胞P38通路磷酸化水平的变化.组间计数资料的比较,采用χ2检验或Fisher精确概率计算法;两组数据中的蛋白条带的光强度值,采用t检验统计学方法.结果 体外培养的猪眼小梁细胞大约2周左右开始从组织块表面爬出.未经IL-1α刺激的猪眼小梁细胞行免疫组织化学染色方法表达P38的量很少,而经IL-1刺激后的小梁细胞P38表达量明显增加(P<0.05).经Il-1刺激后的猪眼小梁细胞行Western blotting技术检测,目的 蛋白的光强度值明显高于对照组(P<0.05).各组数据之间的差异均有统计学意义.结论 外源性IL-1α对体外培养的猪眼小梁细胞P38通路产生影响,使p38的表达量增加.因此,外源性氧化应激可能影响小梁细胞P38通路,p38进一步调控小梁细胞内的微环境变化,影响眼压变化.
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宫颈癌细胞系HCE1的建立及其生物学特性
从5例手术切除宫颈癌标本中取材进行体外培养,并建成一个新的连续细胞系,命名为湖南宫颈癌上皮细胞系1号(HCE1).该细胞已在体外生存18个多月,传80多代.其生物学特性显示:①该细胞系接种至裸鼠后可致瘤,其移植瘤细胞形态与原实体瘤相似;②电镜下可观察到细胞表面有丰富的微绒毛及核糖体;③检测第25代细胞生长曲线,其倍增时间为45.8 h;④计数6个平皿软琼脂集落形成率平均值为14.8%;⑤染色体核型分析为非整倍体,众数为85条.
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