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Exendin-4抑制缺血再灌注损伤大鼠皮质神经元凋亡及可能机制
目的 探讨Exendin-4对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法 体外培养SD乳鼠皮质神经元并采用随机数字表法将其分为对照组(正常培养)、模型组(体外模拟缺血再灌注)、治疗组(建模前、建模中均给予Exendin-4).免疫荧光染色鉴定神经元纯度,RT-PCR检测胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)mRNA表达,ELISA法检测神经元细胞内cAMP水平,MTT法测定神经元存活率,荧光染料Hoechest 33258检测神经元凋亡率,实时定量PCR检测干预后4～12 h C/EBP同源蛋白(CHOP)、生长抑制和DNA损伤基因34(GADD34)基因表达.结果 大鼠皮质神经元可体外纯化培养.皮质神经元存在活性GLP-1R.皮质神经元体外模拟缺血6 h再灌注12 h后,治疗组神经元凋亡率明显下降(分别为77.0%±5.3%和27.0%±3.5%,t=19.462,P＜0.01).体外模拟缺血再灌注损伤可诱导神经元CHOP mRNA、GADD34 mRNA表达增加.Exendin-4干预后CHOP mRNA表达明显增加,峰值提前,后期降至模型组水平(t4h=3.023,P4h=0.039;t8h=6.988,P8 h=0.002);GADD34 mRNA表达显著增加,峰值提前,干预4、8、12 h表达均明显高于对照组(t=11.036、26.098、11.709,P＜0.01).结论 Exendin-4对大鼠皮质神经元体外模拟缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能为通过干预未折叠蛋白反应抑制损伤诱导的内质网相关性细胞凋亡.
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广西眼镜王蛇毒一种新的酸性磷脂酶A2的基因克隆和性质
通过Sephadex G-75, CM-Sepharose CL-6B和DEAE-Sephadex A-50连续的柱层析,从广西眼镜王蛇(Ophiophagus hannah)蛇毒中分离到一种新的酸性磷脂酶A2(pI 4.0),命名为APLA2-2. 它的分子量约为14 000,具有较高的磷脂酶活力(429 mol·g-1·min-1). 它对小鼠没有致死性(LD50>20 mg·kg-1),但具有抗血小板聚集功能及诱导水肿形成能力. 通过cDNA测序解决了它的完全的一级结构. 由cDNA推导的APLA2-2蛋白质全序列与福建眼镜王蛇和台湾眼镜王蛇蛇毒酸性磷脂酶A2的同源性分别为73.9%,64.7%,它不存在62～66位的"胰腺环", 因而它可能是一种新的眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2. APLA2-2基因克隆及其生化药理性质的研究,为探讨蛇毒活性蛋白结构与功能关系及蛇伤中毒机理创造了良好的条件.
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孝感市一起毒液泄漏事件的应急处理
2007年1月31日凌晨1时,孝感市中心医院急诊科接诊2名类似感冒症状的患者,此后不到4 h,陆续有20多位相同症状的患者就诊,均表现为:眼睛红肿、流泪,鼻塞、流鼻涕,咽喉肿痛,呼吸困难,胸闷等症状.值班医生根据患者口述,发现所有患者均是107国道孝南某路段的居民和经过该路段的行人,结合临床表现,认为患者均是因吸入某种化学毒气而中毒.
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Exendin-4改善氧化应激减轻t-BHP诱导的HUVECs凋亡
目的 探讨Exendin-4对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法 在原代培养的HUVECs中,采用t-BHP(100 μmol/L)干预4 h,加用或不加用Exendin-4(100 nmol/L)预处理细胞24 h,分为:对照组(A组)、t-BHP处理组(B组)、Exendin-4处理组(C组)及Exendin-4+t-BHP组(D组).应用MTT比色法检测细胞存活率,DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS的产生.结果 与A组比较,100 μmol/L t-BHP作用4 h,B组的HUVECs存活率下降40%(P<0.001);DAPI染色荧光显微镜观察证实,t-BHP可以诱导HUVECs凋亡;加用Exendin-4预处理细胞24 h,D组的HUVECs存活率较B组增高(P<0.01).DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率提示,与B组比较,Exendin-4预处理可使D组的细胞凋亡率减少44%(P<0.05),并减少ROS的产生(P<0.05).结论 t-BHP能够诱导HUVECs凋亡,Exendin-4可减少t-BHP诱导的HUVECs凋亡.
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Exendin-4减轻衣霉素诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡
目的 探讨Exendin-4对衣霉素诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法 原代培养HUVECs,不同浓度衣霉素(0～20 μg/mL)处理HUVECs 16～24 h,或用衣霉素(10 μg/mL)干预18 h后加用不同浓度Exendin-4(5～150 nmol/L)预处理24 h,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察细胞凋亡率.结果 随着衣霉素作用浓度的增加和时间的延长,HUVECs的存活率逐渐下降,呈现一定的量效和时效关系;Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察也证实衣霉素能够诱导HUVECs凋亡;加用不同浓度Exendin-4预处理,内皮细胞存活率较单独衣霉素处理组逐渐升高;Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察结果显示,100 nmol/L的Exendin-4预处理HUVECs后,细胞凋亡率较衣霉素单独处理组减少40%(P<0.01).结论 衣霉素能诱导HUVECs凋亡,而Exendin-4可减少衣霉素诱导的HUVECs凋亡.
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Exendin-4对IL-1β诱导小鼠胰岛β细胞凋亡的保护作用
目的 探讨 GLP-1受体激动剂Exendin-4对细胞因子IL-1β诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡的保护作用.方法 体外培养小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞,用不同浓度(5,10,20,40 ng/mL)IL-1β作用24 h,噻唑兰还原(MTT)法观察不同浓度IL-1β作用后细胞存活率;Hoechst-PI荧光染色法观测细胞凋亡形态;后以Exendin-4(100 nmol/L)预处理细胞24 h,观察Exendin-4对IL-1β诱导的MIN6细胞凋亡的保护作用.结果 MTT显示IL-1β(5～40 ng/mL)作用24 h后,MIN6细胞的增殖率明显下降,并呈现一定的量效关系;Hoechst-PI染色荧光显微镜检测证实随着IL-1β浓度的增高,MIN6细胞的凋亡率亦增加.Exendin-4预先处理24 h后可以抑制IL-1β诱导的β细胞凋亡.结论 GLP-1受体激动剂Exendin-4可以显著抑制IL-1β诱导MIN6细胞的凋亡,提示Exendin-4对IL-1β诱导的MIN6细胞的凋亡具有保护作用.
