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脑缺血再灌注后少突胶质细胞转录因子Olig1、轴突生长抑制因子Nogo-A基因表达与白质损伤
目的 检测少突胶质细胞转录因子Olig1、轴突生长抑制因子Nogo-A在大鼠脑缺血再灌注后不同时间点基因表达的变化规律,观察白质损伤的病理变化,探讨两者之间的关系.方法 利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,实时定量PCR方法(relative quantification PCR,RQ-PCR)检测各时间点Olig1、Nogo-A在大脑损伤白质区的基因表达,髓鞘快蓝-高碘酸雪夫(LFB-PAS)染色法标记大脑神经髓鞘,Bielschowsky银染法标记大脑神经轴突,并计算缺血侧与健侧髓鞘染色的积分吸光度(Ias)比值以代表白质受损程度.结果 (1)Olig1:Olig1在缺血再灌注不同时间点,在大脑白质区的基因表达量不同.缺血再灌注6 h Olig1表达量减低至假手术组的83%(与假手术组相比,q=2.074,P=0.042),7 d时表达量降至低,14 d时恢复至基础水平,21 d时表达升高至假手术组的1.52倍(与假手术组相比,q=6.362,P＜0.01,差异具有统计学意义).Nogo-A:Nogo-A在缺血再灌注不同时间点,在大脑白质区的基因表达量不同.Nogo-A 基因表达在缺血再灌注1 d时开始减低,表达量降至假手术组的84%(与假手术组相比,q=2.230,P=0.029),7 d时降至低,14～21 d表达量开始上调,21 d时表达量上调至假手术组的66%(与假手术组相比,q=4.681,P＜0.01).(2)缺血再灌注不同时问点髓鞘染色Ias比值不同,再灌注6 h时开始下降(0.91±0.05),与假手术组(1.03 ±0.09)相比,q=3.829,P＜0.01;12 h时有空洞形成,再灌注14 d髓鞘损伤达到高峰,Ias比值降到低(0.31±0.07),髓鞘脱失明显;21 d的髓鞘Ias比值(0.30±0.06)与14 d(0.31±0.07)相比较差异无统计学意义(q=0.257,P=0.798).轴突变化规律与髓鞘基本相同.结论 Olig1、Nogo-A在脑缺血再灌注损伤过程中呈现动态变化规律,并与白质损伤的变化规律基本相同,提示Olig1、Nogo-A可能参与了再灌注损伤的病理生理过程,并与缺血再灌注白质损伤及修复密切相关.
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卡那霉素联合速尿致聋豚鼠的Math1基因治疗
目的 观察卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠耳蜗鼓阶导入Math1基因后的形态学及功能改变,探讨Mathl基因治疗药物中毒性耳聋的可行性.方法 健康成年豚鼠经硫酸卡那霉素(500 mg/kg)和速尿(50 mg/kg)联合致聋,将听性脑干反应(ABR)反应阈＞95 dB SPL的豚鼠按随机数字表法分为空白对照组(不做任何处置,3只),手术对照组(右耳单纯鼓阶钻孔,3只),人工外淋巴液组(右耳鼓阶钻孔导入人工外淋巴液,3只),单纯病毒载体组[右耳鼓阶钻孔导入携带增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组腺病毒(Ad.EGFP),4只]、Math1基因治疗组[右耳鼓阶钻孔导入携带Math1及EGFP基因的重组腺病毒(Ad.Math1-EGFP),6只].各组动物分别于鼓阶注射前及注射后8周时行ABR测试,结束测试后处死动物,取出耳蜗组织行扫描电镜观察.结果 各组豚鼠不同频率(4、8、16、20 kHz)短纯音ABR阈值在不同检测时间段差异均无统计学意义,组间比较差异亦无统计学意义(P值均＞0.05).除Math1基因治疗组外,其余各组右耳耳蜗各回毛细胞形态和数目与左耳(自身对照)比较无明显差别.4只Math1基因治疗组豚鼠中,有2只右耳耳蜗第三回内、外毛细胞数量明显比左耳多,其中内毛细胞排列形态较外毛细胞整齐.结论 鼓阶显微注射导入Math1基因能使部分卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠的耳蜗毛细胞修复或再生,但其听觉功能没有改善.
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低氧环境下低氧诱导因子2α对大鼠肾小球内皮细胞细胞间紧密连接蛋白表达和细胞通透性的影响
目的：探讨低氧环境下大鼠肾小球内皮细胞（rGENC）中低氧诱导因子2α（HIF?2α）对细胞间紧密连接蛋白闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白1（ZO?1）的表达和细胞通透性的影响。方法10%FBS的DMEM培养基37℃5%CO2体外培养rGENC ，待细胞生长达到80%时进行不同分组：（1）给予不同时间（0、12、24、48 h）低氧处理，即置于5%O2，5%CO2和90%N2低氧培养箱培养；（2）分为正常对照组、低氧组、阴性对照组（转染空载体+低氧）、低氧转染组（转染HIF?2αsiRNA+低氧）培养24 h。慢病毒转染空载体或HIF?2αsiRNA；Western印迹检测各组细胞中occludin、ZO?1和HIF?2α蛋白表达。电阻仪检测跨上皮细胞电阻（TEER）。结果随着缺氧时间的延长，低氧组细胞中HIF?2α表达逐渐增加，而occludin和ZO?1蛋白表达逐渐降低（与对照组比较，均P＜0.01），均呈时间依赖性。并且低氧组TEER低于正常对照组（P＜0.01），其细胞通透性增加。慢病毒转染后筛选出稳定抑制HIF?2α表达细胞株。与低氧组比较，低氧转染组细胞中HIF?2α表达降低，occludin和ZO?1蛋白表达增加，TEER升高（均P＜0.01）；阴性对照组上述各项目与低氧组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论低氧环境下rGENC通过上调HIF?2α表达来降低细胞间紧密连接蛋白occludin和ZO?1的表达，进而增加细胞通透性。
