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遗传性痉挛性截瘫中Atlastin基因和Nipa1基因同时突变一家系分析
目的 通过分析遗传性痉挛性截瘫一家系中的基因突变,探讨此家系中两种基因突变同时发生的情况.方法 应用ABI3100遗传分析仪对该家系成员进行DNA测序,进行SPG3A/Atlastin和SPG6/Nipa1基因突变分析.结果 遗传分析显示家系中先证者(Ⅱ2)和其女儿(Ⅲ1)既是SPG3A/Atlastin(SPG3A P344L)基因突变杂合体又是SPG6/Nipa1(SPG6 T100A)基因突变的杂合体.先证者的双亲均无SPG3A/Atlastin基因突变,但其父是一个携有SPG6/Nipa1(SPG6 T100A)基因突变的杂合体.结论 该家系患者同时存在SPG3A/Atlastin和SPG6/Nipa1两种基因突变,其中SPG3A/Atlastin为新产生的非遗传突变.
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关于老化卵母细胞减数分裂不对称性丧失的研究进展
哺乳动物卵母细胞进行减数分裂时进行两次连续的不对称性分裂,终形成一个体积较大的卵子和两个体积较小的极体.这种不对称性分裂对卵母细胞以及胚胎发育有很重要的作用.各种与纺锤体移位及锚定和收缩环的形成、极体排出有关的因子,例如肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)复合物、JMY、小三磷酸鸟苷(GTP)酶即激活肌动蛋白成核因子等之间相互作用形成一个调节卵母细胞不对称性分裂的信号通路.然而老化的卵母细胞中皮质极化消失,成核促进因子及相关调控因子的水平和活性下降,终导致老化卵母细胞的受精率及受精后的卵裂率等明显下降.综述老化卵母细胞减数分裂时不对称性丧失的研究进展.
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修复基因hMTH1反义RNA真核表达载体的构建
目的构建人修复基因hMTH1反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-T.方法提取人胚肺成纤维细胞(HLF)总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hMTH1基因cDNA保守序列,经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1,构建hMTH1基因反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-T,并转染细胞.用Western-blot法检验载体抑制hMTH1蛋白表达的效率.结果经RT-PCR获得423bp产物,T载体克隆后,经DNA测序,确定该片段为hMTH1基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-T,测序后确证.该载体转染细胞后,可使hMTH1蛋白水平 下降约46%.结论成功构建hMTH1基因反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-T.
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小G蛋白Rho/Rock信号转导通路与疾病
Rho/Rock信号通路介导多种平滑肌与非平滑肌功能异常的疾病,是近年的研究热点之一.它通过调节细胞内微丝骨架的聚合状态,参与多种细胞的生物学行为.在支气管哮喘、血管痉挛、器官纤维化和肿瘤的浸润转移中均发现Rho/Rock信号转导通路的异常活化.该文对该信号通路的组成、活化、调节等生物学特征及其在多种疾病发生机制中作用的研究进展作一综述.
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过表达RhoD对人黑素瘤A375细胞骨架和迁移侵袭的影响
目的：探讨RhoD对人黑素瘤细胞株A375细胞骨架、迁移和侵袭能力等的影响及作用机制。方法实验分为A375?RhoD组和A375?增强型绿色荧光蛋白（EGFP）组，分别用携带RhoD的慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体转染。罗丹明标记鬼笔环肽染色观察细胞骨架，Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力，流式细胞仪检测细胞周期，Western印迹法检测丝切蛋白、磷酸化丝切蛋白、Diaph2和RhoD的表达。结果与A375?EGFP组细胞相比，A375?RhoD组细胞体积增大，应力纤维变细，软弱无力，黏着斑增多；丝状伪足形成增加；皱褶缘和板状伪足无明显变化。Transwell迁移实验显示，A375?EGFP组和A375?RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为152.67±11.23和72.67±5.03，两组间差异有统计学意义（t =11.25，P <0.05）。Transwell人工基底膜侵袭试验显示，A375?EGFP组和A375?RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为78.33±12.34和9.00±1，两组间差异有统计学意义（t=9.70，P<0.05）。A375?EGFP和A375?RhoD两组间G1期、S期和G2期细胞所占百分比差异均无统计学意义（P>0.05）。Western印迹结果显示，A375?RhoD组细胞可在RhoD的刺激下激活下游信号效应分子Diaph2，促进其表达，而A375?EGFP组未能激活，两组间丝切蛋白和磷酸化丝切蛋白表达差异不显著。结论 RhoD过表达可能通过下游效应分子Diaph2调节细胞骨架进而抑制A375细胞的迁移和侵袭能力。
