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乙醇性痴呆大鼠海马区脑源性神经营养因子的表达变化
目的 探讨乙醇性痴呆大鼠海马区脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达变化及其与学习记忆功能损害的关系.方法 SD大鼠随机分为2组,每组6只,其中一组按体质量8mL/(kg·d)给予20％(体积分数)乙醇灌胃持续28 d,建立乙醇性痴呆大鼠模型;另一组予等量生理盐水灌胃作为对照.观察两组大鼠Morris水迷宫行为(逃避潜伏期),采用HE染色方法观察海马组织形态改变,采用免疫组化检测大鼠海马区BDNF表达.结果 乙醇组大鼠灌胃后逃避潜伏期时间(EL)[(16.39±3.11)s]较灌胃前[(7.12±1.18)s]明显延长(P＜0.05);与生理盐水组灌胃后EL[(5.76±0.86)s]比较,乙醇组大鼠灌胃后EL明显延长(P＜0.01),且海马形态结构明显破坏.免疫组化结果显示,与生理盐水组相比,乙醇组大鼠海马齿状回(DG)区(积分光密度值为111.65±14.44 vs.61.55±17.44)和CA1区(积分光密度值为88.98±9.15 vs.55.21±8.93)BDNF相对表达明显降低(均P＜0.05).结论 乙醇可导致大鼠学习记忆功能及海马组织损伤,其机制可能与抑制海马BDNF表达有关.
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绿茶提取物EGCG对乙醇诱导原代海马神经元损伤的保护作用及其机制
目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对乙醇诱导原代海马神经元损伤的作用及机制.方法:以原代培养的海马神经元为实验对象,设对照组、乙醇组、EGCG+乙醇组和EGCG组,采用MTT比色法检测细胞存活率以及Annexin-V APC/7-AAD双染法观察细胞凋亡状况,采用荧光实时定量PCR检测凋亡因子BCL2,BAX表达并进行氧化应激检测.结果:EGCG(100 tμmol/L)可明显提高海马神经元存活率及抑制乙醇诱导的细胞凋亡(P＜0.001);另外,EGCG可促进海马神经元凋亡因子BCL2表达增高、BAX表达降低(P＜0.001),同时使抗氧化酶T-SOD和GSH-Px的酶活力明显增高(P＜0.001).结论:EGCG对乙醇诱导的原代海马神经元损伤具有一定的保护作用,其机制与抑制海马神经元凋亡及抗氧化应激损伤有关.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 乙醇性痴呆 海马神经元 凋亡 氧化应激 -
采用海马原代神经元和离体脑片建立乙醇性痴呆体外模型的比较
目的 建立和比较不同的乙醇性痴呆(AAD)体外研究模型,为进一步探讨其发病机制提供方法学参考. 方法 取胎鼠海马进行原代神经元培养及鉴定,给予不同浓度的乙醇作用24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率以及Hoechst33342染色观察细胞凋亡状况.另外,取新生大鼠海马切取脑片进行离体培养,采用HE染色观察不同时间点乙醇对海马脑片的损伤作用. 结果 原代培养的海马神经元高表达神经元特异性烯醇化酶(NSE),低表达神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP).乙醇(50～100mol/L)作用24h可明显抑制海马神经元存活并呈浓度依赖关系;乙醇(50 mol/L,24 h)可诱导海马神经元显著凋亡.海马脑片HE染色证实短时乙醇作用(50mol/L,30min)即可导致细胞明显损伤,而长时乙醇作用(50 mol/L,24h)可导致海马形态结构严重破坏. 结论 在AAD发病机制研究中,原代海马神经元适用于建立慢性乙醇诱导损伤模型,而离体海马脑片适用于急性乙醇毒性研究.
