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表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839与伊利替康联合效应的实验研究
目的 探讨ZD1839与伊利替康的活性代谢产物7-乙基-10羟基-喜树碱(SN38)联合的佳方案及其机制.方法 以药物联合效应测定方法,评价ZD1839和SN38不同给药顺序对人结肠癌细胞HT-29和LoVo的抑制作用;以Western blot和免疫共沉淀方法,分析ZD1839与化疗不同联合方案对各自靶蛋白及其下游分子表达的影响;以流式细胞仪测定不同联合方案对细胞周期的影响;以组蛋白相关的DNA碎片分析,比较不同方案对细胞凋亡指数的影响.结果 先SN38后ZD1839的序贯给药方案表现出明显的协同作用;反之,则表现为拮抗作用.SN38明显抑制细胞拓扑异构酶-Ⅰ(Topo-Ⅰ)活性;ZD1839不影响表皮生长因子受体(EGFR)的表达,但能抑制EGFR的磷酸化.与SN38单药相比,SN38联合ZD1839对Topo-Ⅰ的抑制无增强;与单药ZD1839相比,联合方案对EGFR、MAPK磷酸化的抑制作用无增强,但ZD1839、SN38同时给药,和先SN38后ZD1839序贯给药对AKT的抑制有所增强.同时,联合方案对细胞周期分布的改变影响明显.ZD1839可明显维持化疗诱导的DNA损伤和细胞凋亡.结论 先SN38后ZD1839序贯给药可能是治疗结肠癌的佳联合模式.
关键词： ZD1839 伊利替康 SN38 结肠癌细胞系HT-29 结肠癌细胞系LoVo -
大鼠血浆中7-乙基-10-羟基喜树碱-10-棕榈酸酯及7-乙基-10-羟基喜树碱HPLC分析方法的建立
目的 建立同时测定大鼠血浆中7-乙基-10-羟基喜树碱-10-棕榈酸酯(SN38-PA)及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)含量的高效液相色谱法. 方法 以10-羟基喜树碱(10-CPT)作为内标,甲酸酸化血浆,甲醇沉淀蛋白. 采用Agilent C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.2%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1 ml/min,紫外检测波长372 nm,柱温:30℃. 结果 大鼠血浆中SN38-PA和SN38线性范围分别为0.25~62.5(r=0.9998)和0.05~12.5μg/ml(r=0.9997),低定量限分别为0.18和0.04μg/ml; 两组分平均绝对回收率分别为95.89%和97.03%; 平均相对回收率分别为99.54%和99.84%.2组分日内、日间精密度的RSD%均<3%.结论 本分析方法快速、简便、准确度和灵敏度高,可用于SN38-PA及其活性代谢产物SN38的体内检测.
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抗癌药SN38通过脂筏促进Fas介导的细胞凋亡
目的:探讨抗癌药SN38对Fas介导凋亡的影响机制,并进一步探讨脂筏在该过程的作用.方法:单独或者联合应用SN38和CH11(Fas抗体)作用于脂筏阴性和脂筏阳性的细胞株WR/FAS-SM(-)细胞和WR/FAS-SMS1细胞,通过Western blot的方法检测细胞内部DNA损伤的信号分子以及caspase分子的活化情况,并分析它们的活化强度和作用特点.结果:在SN38和CH11的共同作用下,WR/FAS-SMS1细胞ATM-Chk1-p53途径及caspase-3.8活化,p21活化水平降低,而WR/FAS-SM(-)细胞的Chk1-p53途径以及caspase-3.8活化,而p21活化水平则未见降低.结论:SN38和CH11的共同应用与SN38单独应用相比,通过活化ATM-Chk1-p53途径,导致p21活化水平降低,进而活化caspase-3,8,从而促进WR/Fas-SMS1细胞的凋亡;该过程中脂筏可能通过调控p21的不同活化状态终导致了WR/FAS-SM(-)细胞和WR/FAS-SMS1细胞间凋亡率的差异.
