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新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对人结肠癌细胞HCT-116的体内外抑制作用
目的 探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对人结肠癌细胞HCT-116的体内外抑制作用.方法 采用不同浓度的FK228和氟尿嘧啶(5-Fu)处理HCT-116细胞24、48、72 h,采用CCK-8法观察比较FK228对结肠癌HCT-116细胞的生长抑制作用.体内实验构建BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,腹腔注射FK228(5 mg/kg)和5-Fu(50 mg/kg),比较FK228对HCT-116裸鼠移植瘤的生长抑制作用及血液、肝、肾毒性.结果 FK228对结肠癌细胞HCT-116具有明显的生长抑制作用,且具有时间和剂量依赖性,其48 h的IC50为12.05 ng/ml,而5-Fu的IC50仅为18.92 μg/ml.给药20 d后,FK228组裸鼠肿瘤体积为(139.71 ±44.54)mm3,显著低于5-Fu组[(282.28±58.81)mm3,P＜0.01]和模型组[(520.65±39.73) mm3,P＜0.01]；FK228组裸鼠肿瘤重量为(0.07±0.02)g,显著低于5-Fu组[(0.20±0.08)g,P＜0.01].5-Fu组和FK228组的肿瘤抑制率分别为45.8％和73.2％(P＜0.01).5-Fu组和FK228组的丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著高于模型组和空白组(均P＜0.01),而FK228组的血尿素氮(BUN)水平与空白组、模型组的差异无统计学意义(均P＞0.05),5-Fu组的BUN水平明显高于模型组和空白组(均P＜0.01).5-Fu组裸鼠的白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)和血小板(PLT)水平显著低于模型组(均P＜0.05),而FK228组裸鼠仅WBC水平与模型组差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色结果显示,FK228组肝细胞局部出现纤维变性,并伴有血细胞和炎性细胞浸润；肾脏出现了轻微肾小管水肿,其他形态正常.5-Fu组肝细胞出现了局部大量坏死、变形,一部分肝细胞水肿变形；肾脏出现了明显的肾小球和肾小管变形、坏死,管壁变薄.结论 与5-Fu比较,FK228可在体内外明显抑制HCT-116细胞的生长,对肾和血液系统的毒性不明显,具有较大的研究意义和临床价值.
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c-Fos对结直肠癌细胞HCT-116影响
目的 探讨AP-1转录因子组成成分之一c-Fos对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 将合成的siRNA转染入HCT-116细胞中,实时定量PCR法检测其中c-Fos的含量;利用四甲基偶氮唑盐(MTr)显色法检测c-Fos被敲低后对细胞生长增殖的影响;Etoposide诱导细胞凋亡,溴化丙啶(PI)染色、流式细胞仪检测细胞凋亡的改变.结果 siRNA转染结直肠癌细胞HCT-116 48 h后,与对照组相比,c-Fos的含量降低约50％;MTr实验中RNAi组细胞增殖速度时间增加,加入etoposide(100 μnol/L) 12 h后,对照组细胞凋亡率为(27.6±2.07)％,RNAi组细胞的凋亡率为(39.1±4.84)％,凋亡率降低.结论 c-Fos在HCT-116细胞中发挥着促进细胞生长和抑制凋亡的作用.
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2-脱氧葡萄糖联合雷帕霉素诱导结肠癌HCT-116细胞的凋亡作用研究
目的 研究2-脱氧葡萄糖联合雷帕霉素对人结肠癌的抗肿瘤作用.方法 运用MTT细胞增殖试验、克隆形成试验以及Transwell侵袭试验考察药物对HCT-116细胞株的增殖、克隆及侵袭的影响,通过蛋白印迹技术分析信号通路蛋白cleavedCaspase-3、Bax/Bcl-2、LC3-Ⅱ、Akt、S6K的变化情况,进行初步的机制研究.结果 MTT试验显示,2-脱氧葡萄糖可增强雷帕霉素对HCT-116细胞增殖、克隆和侵袭的抑制作用.蛋白印迹分析表明,高剂量2-脱氧葡萄糖可引起Bax/Bcl-2比值增加,活化Caspase-3,引起细胞凋亡;低剂量2-脱氧葡萄糖可拮抗雷帕霉素对肿瘤细胞生长和增殖的抑制作用.结论 2-脱氧葡萄糖通过抑制肿瘤细胞的糖酵解,增强雷帕霉素对结肠癌HCT-116细胞凋亡的诱导作用.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的研究
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对结肠癌细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的影响.方法 HCT-116细胞经10 μg/L和100μg/L重组人类TRAIL蛋白处理后,应用荧光实时定量PCR和试剂盒测定凋亡相关基因(Bel-2、Bad、caspase-3和-8)和炎性反应相关基因(TNF-α,IL-1β,COX-2)的表达水平.结果 经10 μg/L和100 μg/L重组人类TRAIL蛋白孵育处理24 h后,HCT-116细胞的凋亡率分别为27.4％和45.9％.同时抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bad以及凋亡指示基因caspase-3和caspase-8的表达均显著上调,且100 μg/L组的上调幅度均高于10μg/L组(P＜0.05).TRAIL蛋白处理后,炎性反应相关基因TNF-α,IL-1β,COX-2的表达亦显著上升,且100 μg/L处理组的上升幅度均高于10μg/L组(P＜0.05).结论 TRAIL重组蛋白能够诱导结肠癌细胞凋亡以及炎性反应的发生.
关键词： 结肠肿瘤 HCT-116 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 凋亡 炎性反应
