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肺癌放射抗性细胞系构建及生物行为研究
目的：构建肺癌放射抗性细胞系，观察细胞在形态、凋亡、侵袭迁移能力和上皮间质转化的改变。方法采用小剂量等分割照射法、亚致死剂量照射法及梯度递增照射法筛选肺癌A549和H1299放射抗性细胞系，显微镜下观察细胞形态学改变，克隆形成实验检测放射敏感性，CCK?8法检测细胞受照后存活率；流式细胞仪检测凋亡率；Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力的变化；蛋白印迹法检测上皮间质转化标志蛋白表达。结果梯度递增照射法构建肺癌放射抗性细胞系可行性好，得到放射抗性细胞A549R和H1299R，形态学观察示放射抗性细胞向间质细胞形态转变。分别以A549和H1299细胞为对照，A549R和H1299R细胞D0、Dq、SF2增加（P＝0．017和0．033、0．001和0．000、0．000和0．008），α和α／β值减少（ P＝0．018和0．001、0．007和0．009）。 A549R和H1299R细胞在不同照射剂量下存活率均大于对照组（P值均＜0．05），受照后凋亡率降低（P＝0．02和0．01），侵袭率及迁徙率增高（ P＝0．000和0．001及0．001和0．002），E?钙黏蛋白表达下调和波形蛋白表达增高（ P＝0．00和0．01及P＝0．02和0．01）。结论成功构建肺癌放射抗性细胞系，其侵袭迁移能力增强，并且可能与上皮间质转化有关系。
关键词： 肺癌细胞系 放射抗性 克隆形成分析 Transwell细胞分析 上皮间质转化 -
食管癌细胞系TE13R120放射抗性与HDAC3、NF-kB和NRAGE关系的研究
目的探讨HDAC3、NF-kB和NRAGE基因与食管癌细胞放射抗性的关系.方法以人食管癌细胞系TE13和由TE13经γ射线反复照射建立的放射抗性细胞系TE13R120为研究对象,用Western blotting技术检测这两种细胞于不同时间、剂量点照射后基因HDAC3、NF-kB和NRAGE的蛋白表达;用流式细胞术检测相同时间、剂量点两种细胞的凋亡和细胞周期分布情况.结果Western blotting显示,与TE13相比,TE13R120细胞照射前后HDAC3的核表达均增高,NF-kB的表达也明显增强,NRAGE在两种细胞胞浆中的表达无差异.与TE13相比,TE13R120中S期细胞明显增多,照射后G2期阻滞明显,凋亡水平较低.结论基因HDAC3和NF-kB可能在食管癌细胞放射抗性形成中发挥作用并可能有协同作用;NRAGE与食管癌辐射抗性的关系有待进一步研究.
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CD44+/CD24+宫颈癌细胞对X射线照射诱导凋亡的抗拒性
目的 探讨CD44 +/CD24+宫颈癌细胞的放射抗拒性机制.方法 体外培养人宫颈鳞癌(Siha)细胞,6MVX射线给予8、16、30 Gy照射,流式细胞仪分选出CD44 +/CD24+细胞.采用克隆形成实验拟合细胞存活曲线,比较细胞的放射敏感性;Hochest 33258荧光染色和透射电镜观察细胞形态变化;流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA条带;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因mRNA的表达.结果 随着剂量的增加,CD44 +/CD24+宫颈癌细胞比例逐渐增加;CD44 +/CD24+细胞放射敏感性下降(t=93.99 ～400.45,P＜0.05);CD44 +/CD24+细胞中bcl-2、survivin、Oct4基因表达水平较亲代Siha细胞升高(t=221.35、941.65、82.27,P＜0.01);Hochest 33258、透射电镜、DNA片段凝胶电泳及流式细胞定量研究显示,Siha细胞出现明显细胞凋亡改变,而Siha CD44 +/CD24+细胞则未出现.结论 CD44+/CD24+宫颈癌细胞抵抗放疗的机制是抗拒射线诱导的细胞凋亡.
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miR-221/222激活Akt通路增加恶性胶质瘤的放射抗性
目的 探讨miR-221/222增加恶性胶质瘤放射抗性的机制.方法 实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测U251、U87及LN229系胶质瘤细胞在接受照射后3和6 h miR-221/222的表达水平;通过平板克隆形成实验,观察敲低U251、U87及LN229系胶质瘤细胞miR-221/222后肿瘤细胞放射敏感性的变化;染色质免疫沉淀技术(ChIP)检测c-jun与miR-221/222的结合情况;虫荧光素酶活性报告试验验证PTEN是miR-221/222的靶基因;使用Western blot检测敲低胶质瘤细胞miR-221/222后的相关蛋白的表达;通过胶质瘤裸鼠模型,观察敲低miR-221/222后放射治疗的效果.结果 U251、U87及LN229系胶质瘤细胞在接受照射后miR-221/222的表达上调(t=5.48 ～ 29.21,P＜0.05);敲低胶质瘤细胞miR-221/222后,其放射敏感性提高(F=1 202.22,1 789.12,1 012.32,P＜0.05); c-jun转录调控miR-221/222的表达;PTEN是miR-221/222的靶基因(t=13.16,P＜0.05);Western blot检测显示,敲低胶质瘤细胞miR-221/222后,pAkt及DNA-PKcs的表达下调,PTEN和GSK-3β的表达上调,Akt表达保持稳定;体内实验结果显示,敲低miR-221/222的表达联合放射治疗可显著抑制胶质瘤的生长(F =56.36,P＜0.05).结论 放射可诱导胶质瘤细胞miR-221/222的表达上调,miR-221/222通过激活Akt通路增加恶性胶质瘤的放射抗性.
关键词： 恶性胶质瘤 放射抗性 MiR-221/222 DNA损伤 AKT -
经典Wnt通路与肿瘤放射抗性关系的研究进展
放疗是治疗恶性肿瘤的重要手段,放射抗性是影响放疗疗效的重要因素,也是放疗失败的主要原因之一.近年来经典Wnt信号通路与肿瘤放射抗性的关系,逐渐受到学者的关注.本文检索了近10年来有关经典Wnt信号通路与肿瘤放射抗性的相关研究,并进行综述,对经典Wnt信号通路参与放射抗性形成的分子机制及功能进行系统分析和梳理,力求寻找某些规律和不同作用途径的内在联系,为进一步深入研究寻找有价值的线索.
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癌干细胞与肿瘤的放射抗性
有关癌干细胞及其生物学特性研究信息的不断积累,推动了放射肿瘤生物学的发展.近年来的研究发现,癌于细胞和静止期癌细胞可能是导致肿瘤放射抗性增加和肿瘤放射治疗后复发的主要细胞学基础,有关这两种癌细胞亚群的放射敏感性及其机制的研究进展迅速,为提高肿瘤对放射治疗敏感性的措施研究提供了新的学术思路.该文将就癌细胞亚群的放射分子生物学特性,分析讨论肿瘤放射抗性的细胞学基础和相关分子机制.
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人胶质瘤细胞及组织中miRNA-221、miRNA-222表达变化及意义
[目的]观察人胶质瘤细胞及组织中miRNA-221、miRNA-222的表达变化,探讨其与肿瘤放射敏感性的相关性.[方法]根据Trizol试剂盒说明书,从体外培养的人胶质瘤细胞系U87、U251、A172、LN229和60例胶质瘤组织(手术切除获得)中提取其总RNA,采用RT-PCR法测定miRNA-221及miRNA-222,以正常脑组织为对照.60例胶质瘤患者术后均予以放疗,治疗后MRI检查随访,分析胶质瘤患者的放疗疗效.采用克隆形成实验测算X线照射后(照射剂量为2Gy)的胶质瘤细胞存活率(SF),以胃黏膜上皮细胞(ges)为对照.[结果]与对照组织及细胞相比,胶质瘤组织及细胞中miRNA-221、miRNA-222呈高表达(P＜0.05),其中高度恶性胶质瘤组织中miRNA-221、miRNA-222均明显高于低度恶性者(P＜0.05).X线照射后胶质瘤细胞SF明显高于ges(P均＜0.05),胶质瘤各细胞中miRNA-221、miRNA-222表达量与X线照射后胶质瘤SF呈正相关(r=0.673、0.696,P均＜0.01).胶质瘤组织中miRNA-221、miRNA-222高表达的患者较低表达者生存时间短(P均＜0.05).[结论]人胶质瘤细胞及组织中miRNA-221、miRNA-222均呈高表达.miRNA-221、miRNA-222表达量与胶质瘤细胞的放射抗性呈正相关关系,胶质瘤组织中miRNA-221、miRNA-222表达量与患者生存时间呈负相关关系.
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食管癌细胞TE13-R放射抗性与CDC25C关系的研究
目的 放疗抵抗是食道癌等多种肿瘤放射治疗中的难题,许多文献报道CDC25c与肿瘤的演进及放疗抵抗密切相关,本实验旨在探讨分裂周期蛋25同源蛋白C(cell division cyclin 25 homolog C,Cdc25C)与食道癌放射抵抗间的关系.方法 以人食管癌细胞系TE13和由TE13经射线反复照射诱导建立的放射抗性细胞系TE13R为研究对象,用Western印记技术检测两种细胞在不同剂量照射后不同时间点CDC25c蛋白的表达.并利用RNA干扰技术靶向抑制TE13-R细胞CDC25表达,观察放射抗性的变化.结果 通过多次低剂量诱导,成功建立具有放射抗性的食道癌TE13-R细胞,其较亲代细胞CDC25c蛋白表达明显上调,针对CDC25c干扰质粒转染TE13-R细胞后,CDC25c表达受到抑制,细胞放射抵抗消失.结论 CDC25c与食道癌放疗抗性相关,CDC25c可以作为食道癌放射治疗敏感性的重要参考指标,也有望成为判断食道癌预后的候选标志物,甚至有望成为食道癌防治的新靶标.
