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内镜下病变上下界钛夹定位在食管癌放疗靶区定位中的应用
食管癌放疗后失败的主要原因是局部未控和复发,除了肿瘤某些生物学特性(如乏氧、肿瘤加速再增值)是局部复发重要因素外,靶区定位不准确(脱靶)也是治疗失败中不可忽视的因素.近来,食管癌放疗越来越多采用精确放疗(三维适形或调强放疗).精确放疗实现有赖于靶区精确定位.
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CRISPR-Cas9系统编辑DNA诱导基因敲除的发展及优缺点
CRISPR是一种特别的免疫系统,它可以对入侵到细菌或古生菌体内的病毒和核酸进行特异性识别,利用Cas9蛋白酶进行切割,达到自身免疫的效果,它是绝大部分细菌和一些古生菌的天然免疫系统.本文通过对近期CRISPR的研究文献的阅读,总结了CRISPR-Cas9系统的工作原理,对不同目标的基因敲除的实验原理和实验过程进行了分析,比较了CRISPR基因编辑技术与传统的基因编辑技术的不同,初步讨论如何提高CRISPR的敲除效率;结合以上实验的研究,总结了CRISPR的优缺点,通过对近期发现的大规模脱靶效应现象进行讨论,进一步讨论了关于CRISPR技术未来的发展.
关键词： CRISPR-Cas9 靶向敲除 基因编辑 Guide-RNA 脱靶 -
CRFR1拮抗剂CP-154526的脱靶作用
目的:CP-154526是选择性促肾上腺皮质激素释放激素1型受体(CRFR1)拮抗剂,但其脱靶作用仍未阐述清晰.方法:本研究以CP-154526为研究对象,以化合物-蛋白相互组学为手段,构建其药物-药物网络并做数据挖掘.结果:DRAR-CPI实验结果显示CP-154526与23个药物相似,与抗肿瘤药物和抗感染药物相似较多,与治疗帕金森病Bromocripti为相似.数据挖掘进一步分析发现CP-154526可与单胺氧化酶B有作用.结论:CP-154526可能具有抗肿瘤、抗感染等多方面脱靶作用,还可能通过单胺氧化酶B治疗帕金森病症.本研究为快速评价药物的全面疗效提供一种思路.
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基于CRISPR-Cas9定向编辑TRAC基因的研究
目的 针对人源TCRα C基因(TRAC)进行CRISPR/Cas9-gRNA的设计,并验证设计的gRNA的有效性及其脱靶率.方法 利用CRISPR网站(http://crispr.mit.edu/)提供的靶向编辑位点筛选工具,针对TCRα C区各设计出了3个编辑位点,并据此构建CRISPR-Cas9-TCR敲除质粒,将构建好的质粒转染293T细胞系,通过流式细胞术结合PCR产物的T-A克隆测序等方法验证各个gRNA序列的编辑效率.再根据所预测的潜在脱靶位点,设计相应的上下游引物进行PCR扩增后测序,检测其是否出现脱靶.结果 在3组针对TCRα C区的gRNA中,site2-gRNA的编辑效率高,并且无脱靶现象.结论 针对人源TCRα C基因设计的site2-gRNA对TCRα C区具有很好的编辑效果,且无脱靶现象,为消除杂合TCR分子的产生和改善TCR修饰的T细胞(TCR-T)过继性免疫治疗奠定了基础.
