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姜黄素对MDA-MB-361乳腺癌细胞DLC1基因表达影响及其机制探讨
目的 DLC1下调与多种肿瘤的发生相关,DLC1基因启动子区CpG岛甲基化可能是其基因表达下调或缺失的重要机制.本研究探讨姜黄素对MDA-MB-361人乳腺癌细胞株DLC1基因表达的影响及其机制.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及量子点免疫荧光细胞化学(quantum dots immunofluorescence cytochemistry,QDICC)检测不同浓度姜黄素(10、20、40 μmol/L)处理乳腺癌细胞株MDA-MB-361前后DLC1基因启动子甲基化状态、DLC1 mRNA及蛋白表达水平变化.结果 MDA-MB-361细胞DLC1基因启动子区CpG岛呈甲基化状态,10 μmol/L姜黄素无去甲基化作用,无DLC1 mRNA和蛋白表达.经过20和40 μmol/L姜黄素处理后,DLC1基因启动予区呈现一定程度的去甲基化,其mRNA和蛋白表达增加,mRNA相对表达量分别为0.88±0.14和1.31±0.11,DLC1蛋白均(++).不同浓度姜黄素处理组间差异有统计学意义,F=157.344,P＜0.001.40 μmol/L姜黄素较20 μmol/L姜黄素处理细胞后mRNA和蛋白表达稍增加,但差异无统计学意义,F=16.325,P=0.016.结论 MDA-MB-361乳腺癌细胞中DLC1基因表达沉默与启动子甲基化有关,20和40μmol/L姜黄素能部分逆转该细胞的DLC1基因甲基化状态,恢复该基因表达.
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EZH2和DLC1在乳腺癌组织和细胞中的表达及相关性
目的:研究果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer ofzeste homolog 2,EZH2)和肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC1)在乳腺癌组织及细胞中的表达水平,并探讨二者之间的相互关系.方法:首先采用免疫组织化学法检测120例乳腺癌组织及63例癌旁正常组织中EZH2和DLC1蛋白的表达情况;随后分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测20例乳腺癌以及癌旁正常组织,以及乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞及正常乳腺上皮细胞HBL100中EZH2和DLC1 mRNA及蛋白的表达水平.通过脂质体法将特异性针对EZH2基因的siRNA转入MDA-MB231细胞,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测MDA-MB231细胞中EZH2及DLC1 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果:免疫组织化学检测结果提示,EZH2蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于其在癌旁正常组织中的阳性表达率(P=0.000),DLC1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于其在癌旁正常组织中的阳性表达率(P=0.008).乳腺癌组织中EZH2和DLC1蛋白的阳性表达率与肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P值均＜ 0.05).实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测结果显示,EZH2 mRNA和蛋白在乳腺癌组织和乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞中的表达水平均明显高于癌旁正常组织和正常乳腺上皮细胞HBL100 (P值均＜0.01),而DLC1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于癌旁正常组织和正常乳腺上皮细胞HBL100 (P值均＜0.01).沉默MDA-MB231细胞中EZH2基因表达后,DLC1 mRNA及蛋白的表达水平均明显上调(P值均＜ 0.05).结论:EZH2与DLC1在乳腺癌中的表达呈负相关,抑制EZH2的表达可以恢复DLC1的表达,提示EZH2可能通过抑制DLC1的表达促进肿瘤的发生和发展.
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DLC1基因启动子甲基化和蛋白在散发性乳腺癌及乳腺腺病良性病变组织中的表达
目的 探讨散发性乳腺癌(Sporadic breast cancer,SBC)、乳腺异型导管上皮增生(Breast atypital ductal hyperplasia,BADH)及乳腺腺病(Breast adenosis,BA)组织中肝癌缺失基因1(Deleted in liver cancer-1,DLC1)启动子甲基化状态及其蛋白表达的关系,及DLC1基因异常的表遗传学作用与SBC发生的关系.方法 采用甲基特异性聚合酶链反应(Methylation specific polrmerase chain reaction,MSP)研究 42例 SBC、14例BADH、20例BA组织及5例健康成人女性外周血淋巴细胞中DLC1基因启动子甲基化状态并用免疫组织化学(EnVision法)研究SBC、BADH和BA中DLC1蛋白表达情况.结果 5例健康成人女性外周血淋巴细胞均为DLC1基因启动子甲基化阴性;SBC、BADH和BA中DCL1基因启动子CpG岛甲基化率分别为38.1%、35.7%和0.SBC和BADH的DLC1基因启动子甲基化阳性率显著高于BA;SBC与BADH之间DLC1基因启动子甲基化阳性率差异无统计学意义.SBC中DLC1蛋白表达阴性26例,表达下调16例,BADH中DLC1蛋白阴性6例,表达下调8例;BA未见DLC1蛋白表达阴性或下调.16例发生DLC1甲基化的SBC,有14例蛋白表达阴性,2例表达下调.5例发生甲基化的BADH组织,3例蛋白表达阴性,2例表达下调.SBC、BADH的DLC1蛋白的阳性率显著低于BA;SBC的DLC1蛋白阳性率显著低于BADH.DLC1非甲基化组其蛋白表达的强度明显高于甲基化组,差异有统计学意义.结论 DLC1基因启动子CpG岛甲基化是SBC发生过程中的早期事件,是其蛋白表达下降乃至失活的重要原因,可能在乳腺癌变过程中起重要生物学作用.
关键词： 散发性乳腺癌 乳腺异型导管上皮增生 DLC1基因 DNA甲基化 免疫组织化学 -
DLC1基因在人脑胶质瘤组织中的表达
目的 探讨抑癌基因DLC1在人脑胶质瘤组织中的表达和功能.方法 收集广州医学院第二附属医院神经外科自2007年1月至2009年6月手术切除的胶质瘤标本39例及同期行颅脑减压术治疗的颅脑损伤患者的正常脑组织10例,实时荧光定量PCR检测DLC1 mRNA的表达;将质粒pCS2-DLC1转染体外常规培养的人胶质瘤细胞株U251,同时用空载体pCS2-MT转染作为对照组,转染后36 h应用Western blot检测DLC1表达标签蛋白Mvc,应用MTT检测U251细胞增殖能力的变化.结果实时荧光定量PCR结果显示胶质瘤组织中DLC1 mRNA表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P=0.000),且Ⅰ级胶质瘤组织DLC1 mRNA的表达水平高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级,差异有统计学意义(平均秩次分别为44.20、30.23、32.25、31.0,H=18.818,P=0.001);Western blot检测结果显示DLC1标签蛋白Mvc在pCS2-DLCI转染组细胞呈过表达,在pCS2-MT转染组细胞无明显表达;MTT检测显示pCS2-DLC1转染组U251细胞吸光度值高于pCS2-MT转染组,差异有统计学意义(P=0.002).结论 高表达的DLC1可能促进胶质瘤的形成和发展.
