首页 > 文献资料
-
γ-氨基丁酸B型受体对结肠癌HCT116细胞周期的影响
目的 利用人结肠癌细胞株HCT116细胞为研究模型,探究γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)/核转录因子(NF-κB)信号通路对结肠肿瘤细胞HCT116周期的影响,明确GABABR调控结肠癌细胞增殖的机制.方法 使用人结肠癌细胞株HCT116细胞为模型,构建针对GABABR的shRNA,流式细胞仪检测不同刺激条件下HCT116细胞周期分布,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)法检测细胞的增殖能力变化.结果 GABABR可调控HCT116细胞的增殖.GABABR激动剂巴氯芬将HCT116细胞滞留在G1期,GSK-3β激动剂wort能逆转巴氯芬对结肠癌的该作用;GSK-3β抑制剂SB216763处理后,HCT116细胞增殖得到抑制,而NF-κB激动剂PMA可以阻断此作用;NF-κB激动剂PDTC能够回救敲低GABABR所引起的HCT116细胞增殖抑制,Akt抑制剂MK-22062HCl能逆转巴氯芬、SB216763对HCT116细胞增殖的抑制作用.结论 GABABR/GSK-3β/NF-κB信号通路可以调控结肠癌细胞增殖,通过抑制GSK-3β的活性,抑制NF-κB信号通路的激活,将HCT116细胞滞留在G1期.GABABR/GSK-3β/NF-κB信号通路可以作为临床预防和治疗结肠癌的潜在药物靶点之一.
-
γ-氨基丁酸与哮喘的关系
γ-氨基丁酸(GABA)是哺乳动物中枢神经系统重要的抑制性神经递质之一,也存在于气道平滑肌细胞及气道上皮细胞等周围组织.研究表明,GABA系统与哮喘有密切关系.GABA受体主要分为A型和B型两类.GABAA受体激动剂蝇蕈醇能松弛由速激肽、组胺引起的气道平滑肌的收缩,并能减轻乙酰胆碱引起的气道通气压力增大;而GABAA受体抑制剂能抑制小鼠过敏性哮喘时杯状细胞增生及黏液过度分泌;GABAB受体激动剂可抑制神经诱导的胆碱能和速激肽介导的气道平滑肌收缩,微血管渗漏及过敏反应.由此可见,GABA系统可影响哮喘疾病发病过程中一些病理生理过程,因此GABA系统对治疗哮喘疾病具有重要价值.
关键词： γ-氨基丁酸 γ-氨基丁酸A型受体 γ-氨基丁酸B型受体 哮喘 -
缬草波春对肠易激综合征大鼠结肠GABABR表达的影响
目的 探讨缬草波春(valepotriats)对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠结肠组织γ-氨基丁酸B型受体(Gamma-aminobutyric acid B recepter,GABABR)表达的影响及其意义.方法 Wistar大鼠32只,体重(360±20) g,将其随机分为正常组、模型组、缬草组、吗啡组,每组8只.应用正丁酸钠溶液灌肠法建立IBS大鼠模型,利用生理信号仪记录大鼠结肠张力-运动曲线,分析缬草波春对大鼠结肠运动的影响;用免疫组织化学方法检测大鼠结肠GABABR的表达.结果 模型组结肠运动平均张力显著高于正常组(P＜0.01),缬草组显著低于模型组(P＜0.01);模型组结肠肌间神经丛GABABR表达低于正常组 (P＜0.05),缬草组结肠肌间神经丛GABABR表达较正常组和模型组均明显增高(P＜0.01).结论 缬草波春可以降低结肠运动平均张力,解除结肠平滑肌痉挛,缓解IBS,机制可能与GABABR介导的调节有关.
关键词： 肠易激综合征 缬草波春 γ-氨基丁酸B型受体 -
γ-氨基丁酸B型受体对紫杉醇诱发神经痛大鼠海马核因子-κB通路的影响
目的 利用y-氨基丁酸B型(GABAB)受体激动剂(巴氯芬)和核因子-κB (NF-κB)通路抑制剂(SN50),观察GABAB受体对紫杉醇诱发神经痛大鼠海马NF-κB通路的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠50只,体重160 ～ 180 g,采用腹腔注射紫杉醇的方法制备大鼠紫杉醇诱发神经痛模型,取模型制备成功的大鼠40只[机械缩足阈值(MWT) ＜6 g],采用随机数字表法,根据鞘内给药(共20μl)的不同分为4组(n=10):紫杉醇对照组(D1组):生理盐水10μl+生理盐水10 μl;巴氯芬组(D2组):巴氯芬0.5μg/10μl+生理盐水10μl;SN50组(D3)组:SN50 200 ng/10μl+生理盐水10μl;SN50+巴氯芬组(D4)组:SN50 200 ng/10μl+巴氯芬0.5μg/10μl.另取10只同周龄正常大鼠腹腔注射生理盐水并鞘内置管作为正常对照组(C组),鞘内注射生理盐水10 μl+生理盐水10 μl.5组大鼠于腹腔给药后第14天(T1)、鞘内给药前(T2)、鞘内给药后120 min(T3)分别测定大鼠50％ MWT,然后取大鼠海马组织,采用Western blot法测定海马GABAB1受体、NF-κB p65及炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.结果 与C组比较,D1、D2、D3、D4组MWT在T1[D1组:(5.73±0.89)g;D2组:(5.02 ±0.75) g;D3组:(5.35±1.04)g;D4组:(5.21±1.18)g]、T2时点[(D1组:(5.16±1.14) g;D2组:(5.56±1.26) g;D3组:(5.61±1.56) g;D4组:(5.05±1.35)g]降低(P＜0.05),D1组GABAB1受体蛋白(0.58±0.12)表达下降,NF-κB p65(1.27±0.09)、炎性因子IL-1β(1.52 ±0.16)及TNF-α蛋白(1.33±0.07)表达上调(P＜0.05);与T1时点比较,D2组、D3组及D4组MWT[D2组:(9.54±0.78) g;D3组:(8.11±0.75)g;D4组:(11.15±0.65)g]在T3时点升高(P＜0.05];与D1组比较,D2、D3组及D4组MWT[D2组:(9.54±0.78) g;D3组:(8.11±0.75)g;D4组:(11.15±0.65) g]在T3时点升高(P＜0.05),GABAB1受体蛋白(D2组:0.88±0.03;D3组:0.79±0.09;D4组:0.95±0.02)表达上调,而NF-κBp65(D2组:1.01±0.12;D3组:0.98 ±0.10;D4组:0.78±0.17)、炎性因子IL-1β(D2组:1.07±0.04;D3组:1.08±0.06;D4组:0.88±0.09)及TNF-α蛋白(D2组:0.98±0.07;D3组:1.00±0.04;D4组:0.71 ±0.08)表达下降(P＜0.05).结论 紫杉醇可下调大鼠海马GABAB1受体、上调NF-κB及下游炎性因子IL-1β、TNF-α蛋白表达,诱发神经痛;激活GABAB受体可协同提高NF-κB通路抑制剂作用,改善大鼠疼痛状态.NF-κB在其中发挥关键作用.
关键词： 紫杉醇 神经痛 γ-氨基丁酸B型受体 核因子-κB -
p38丝裂原活化蛋白激酶通路对紫杉醇诱发细胞凋亡中γ-氨基丁酸B型受体表达变化的影响
目的 通过给予p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPKs)抑制剂(SB203580),探讨紫杉醇诱发细胞凋亡中p38MAPKs通路对γ-氨基丁酸B型受体(GABAB受体)表达变化的影响及其作用机制.方法 随机选取原代培养5d,浓度约为1×109/L的海马细胞,给予不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00 μmol/L)紫杉醇,采用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测法分别检测海马神经元细胞抑制率(n=3)及凋亡率(n=4)变化,以此确定紫杉醇诱发细胞凋亡的适浓度.另选取原代培养5d的海马细胞随机分为4组:对照组(C组)、10 μmol/L SB203580处理组(K组)、紫杉醇适浓度处理组(N组)、10 μmol/L SB203580+紫杉醇适浓度混合组(K+N组),培养时间为24h,保持各组加液量一致,Western blot法测定海马细胞GABAB受体及核因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平(n=3).结果 紫杉醇对海马细胞活力的抑制具有时间和浓度的交互作用(F=9.127,P＜0.05),根据MTT法(n=3)和流式细胞仪法(n=4)检测结果,各浓度紫杉醇处理24h对海马神经元凋亡率的影响差异有统计学意义(F=64.523,P＜0.05),并计算出紫杉醇诱发细胞凋亡的适浓度为1 μmol/L[早期凋亡率达(48.63±5.76)％].蛋白表达结果显示(n=3):与C组比较,N组和K+N组GABAB受体与NF-κB表达均明显增高(P＜0.05),而K组GABAB受体与NF-κB表达均降低(P＜0.05);与K组比较,N组和K+N组NF-κB和GABAB受体表达均增高(P＜0.05);与N组比较,K+N组NF-κB和GABAB受体表达均降低(P＜0.05).结论 在紫杉醇诱发细胞凋亡过程中,抑制p38MAPKs通路可上调GABAB受体表达,而其下游因子NF-κB可能是其调控GABAB受体表达变化的关键靶点.
关键词： 紫杉醇 p38丝裂原活化蛋白激酶 γ-氨基丁酸B型受体 核因子-κB -
紫杉醇对海马神经元γ-氨基丁酸B型受体表达的影响及核因子-κB通路的调控作用
目的 通过给予核因子-κB(NF-κB)抑制剂(SN50)及其上游通路p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPKs)抑制剂(SB203580),观察紫杉醇对海马神经元γ-氨基丁酸B型受体(GABAB受体)表达影响及p38MAPKs/NF-κB通路在其中的调控作用.方法 选取原代培养5d、浓度为1 ×109/L的海马神经元随机分为6组:对照组(C组)、10 μmol/L SB203580处理组(SB组)、53 mg/LSN50处理组(SN组)、1μmol/L紫杉醇处理组(N组)、10 μmol/L SB203580+1μmol/L紫杉醇处理组(SB+N组)、53 mg/L SN50+1μmol/L紫杉醇处理组(SN +N组),培养时间为24 h,观察6组海马神经元形态学变化、早期凋亡率、NF-κB及GABAB受体蛋白表达变化.结果 与C组比较,N、SB +N和SN+N组海马神经元的轴突和树突分枝均有所减少,而SB组及SN组的神经元形态结构基本正常.N、SB +N和SN+N组的海马神经元GABAB受体表达与NF-κB蛋白表达及早期凋亡率变化一致:与C组比较,N、SB+N和SN +N组的NF-κB蛋白(N组:3.452±0.654;SB +N组:1.729±0.461;SN+N组:1.604±0.361)、早期凋亡率[N组:(49.16±3.12)％;SB +N组:(31.18±3.02)％;SN +N组:(28.47±3.75)％]及GABAB受体表达(N组:0.381 ±0.014;SB +N组:0.243 ±0.013;SN+ N:0.268 ±0.027)均明显增高(P＜0.05),SN组的NF-κB蛋白、早期凋亡率及GABAB受体表达则均显著降低(P＜0.05),而SB组的GABAB受体表达及早期凋亡率则无显著变化(P＞0.05);与N组比较,其余5组海马神经元NF-κB蛋白表达、早期凋亡率及GABAB受体均显著降低(P＜0.05),但与SB组或SN组比较,SB +N组与SN +N组NF-κB蛋白、早期凋亡率及GABAB受体表达的增高幅度明显减少(P＜0.05).而SB组与SN组,SB +N组与SN +N组比较,上述3项指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 紫杉醇可通过上调NF-κB蛋白诱发海马神经元凋亡及GABAB受体表达增多,阻断NF-κB通路可下调GABAB受体表达,以减缓紫杉醇引起的细胞凋亡等中枢神经毒性,NF-κB在其中发挥关键调控作用.
关键词： 紫杉醇 海马神经元 γ-氨基丁酸B型受体 p38丝裂原活化蛋白激酶 核因子-κB -
γ-氨基丁酸B型受体对糖尿病神经痛合并抑郁大鼠海马脑源性神经生长因子表达的影响
目的 利用γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)受体激动剂(巴氯芬)和拮抗剂(CGP55845),观察作用GABAB受体对糖尿病神经痛合并抑郁大鼠海马脑源性神经生长因子(BDNF)表达的影响.方法 将100只雄性SD大鼠随机分为两组,正常对照组(C组)20只和糖尿病神经痛合并抑郁模型组(D组)80只,分别腹腔注射生理盐水或链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg).结合强迫游泳实验,3周后,D组大鼠模型制备成功.两组大鼠均行鞘内置管.根据鞘内给药不同将D组大鼠随机分为4组(n=20):D1组:生理盐水10 μl+生理盐水10μl;D2组:巴氯芬0.5 μg+生理盐水10 μl; D3组:CGP55845 10 μg+生理盐水10 μl; D4组:CGP55845 10 μg+巴氯芬0.5 μg.C组:生理盐水10μl+生理盐水10μl.5组大鼠2次鞘内注药间隔15 min,连续4d,分别于第4天给药完成后2 h(T1)、给药完成后2周(T2)测定50％缩足阈值(PWT)和强迫游泳实验不动时间(IMFST),并在T1、T2时间点每组大鼠取海马组织,采用免疫组织化学法和分子生物学方法测定BDNF表达变化.结果 与C组比较,D组各时间点PWT明显降低[(13.02±1.68)g比(3.46±0.84)g,P＜0.05],IMFST明显延长[(47.14 ±3.65)s比(178.12±12.49)s,P＜0.05],BDNF阳性细胞数减少[(34.10±3.37)个比(16.50±2.41)个,P＜0.05],其mRNA(0.93 ±0.04比0.52±0.09,P＜0.05)及蛋白(1.09±0.06比0.56 ±0.09,P＜0.05)表达显著下降.与D1组比较,D2、D3组大鼠各时间点IMFST明显缩短(P＜0.05)、BDNF表达明显增多(P＜0.05),D2组大鼠各时间点PWT显著升高(P＜0.05),而D3组PWT无明显变化(P ＞0.05);D4组与D1组比较,各项指标无显著变化(P＞0.05).上述指标各组T1与T2时间点比较均无明显变化(P＞0.05).结论 激活或阻断GABAB受体均可通过上调海马组织BDNF表达,改善糖尿病神经痛大鼠的抑郁状态.
关键词： 糖尿病 脑源性神经营养因子 疼痛 抑郁 γ-氨基丁酸B型受体
