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干扰素调节因子3及其可变剪接体在膀胱癌组织中的表达及意义
目的 探讨干扰素调节因子3(IRF-3)及其4种可变剪接体在膀胱癌发生发展中的作用.方法 采用Trizol法提取正常尿路上皮原代细胞、769-P人肾透明细胞癌细胞株、EJ膀胱癌细胞株3种细胞及北京大学第一医院2012年9月至2013年1月诊治的24例膀胱癌患者的膀胱癌和癌旁正常组织总RNA,采用RT-PCR技术对IRF-3及其4种可变剪接体(IRF-3a、-3c、-3d、-3e)表达情况进行检测,并对组织IRF-3 cDNA开放阅读框架进行测序,检测突变点,分析实验数据.结果 正常尿路上皮中IRF-3d未见表达,IRF-3e的表达较769-P、EJ细胞株的表达弱.48例病理标本中,IRF-3、-3a广泛表达,-3a的表达水平与膀胱肿瘤的分期相关(P=0.01);-3d、-3e呈现出肿瘤特异性表达趋势(P＜0.05);-3c在膀胱肿瘤中表达也较正常组织广泛,但表达水平与正常组比较差异无统计学意义(P＞0.05).对IRF-3突变点检测发现有2种氨基酸的变异引起该分子蛋白二级结构发生变化.结论 IRF-3在正常及肿瘤组织中普遍存在表达,但其可变剪接体尤其是IRF-3d、-3e与膀胱肿瘤的发生相关,-3a的表达水平还与膀胱肿瘤的分期相关.
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乙酰肝素酶可变剪接体Splice5在CHO细胞中的稳定转染及其亚细胞定位研究
目的 建立乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株,并进行亚细胞定位分析.方法 将表达乙酰肝素酶全长的质粒和乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5质粒转染入CHO细胞,经G418进行筛选后,挑取单克隆进行培养,RT-PCR检测筛选克隆.用激光共聚焦显微镜测定其亚细胞定位.结果 成功获得乙酰肝素酶可变剪接体Splice 5稳定转染株,并研究了其亚细胞定位情况.野生型乙酰肝素酶以颗粒状分布于细胞质中,Splice 5以弥散状分布于细胞质中,且在内质网、高尔基体、溶酶体、细胞膜均有分布.结论 Splice 5和野生型乙酰肝素酶在CHO细胞中分布形式和定位的不同,提示Splice 5可能具有其他的生物学功能.
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前列腺癌耐药机制的研究进展
药物治疗是前列腺癌有效的治疗手段之一,而耐药性的问题极大干扰了对前列腺癌患者的治疗.本文对前列腺癌的耐药机制研究进展进行了详细的综述,为抗前列腺癌药物的治疗提供新思路和新靶标.
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锌指结构蛋白148可变剪切体在结直肠癌发生发展中的作用
目的:探讨锌指结构蛋白148(zinc finger protein 148,ZNF 148)基因的两种可变剪接体对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响及相关作用机制.方法:RT-PCR检测人结肠癌SW480细胞中的ZNF 148两种剪接体的表达,构建ZNF148干扰载体和过表达载体,将构建成功的ZNF148干扰载体及过表达载体转染至人结肠癌SW480细胞中,分为ZNF 148FL-siRNA组、ZNF148FL-Over express组、ZNF 148△N-siRNA组、ZNF148△N-Over express组、Control siRNA组、Control Over express组以及Normal control组.RTPCR检测各组细胞mRNA表达水平,MTT、Transwell、划痕实验和流式细胞术检测人结肠癌SW480细胞的增殖、体外细胞侵袭、迁移和凋亡情况.结果:RT-PCR扩增获得全长分别为2 385 bp以及2 004 bp的ZNF148FL与ZNF148△N两种不同剪接体产物.ZNF 148FL-siRNA组ZNF 148FL的表达量明显下降,但ZNF148△N的表达水平上升;ZNF148FL-Over express组ZNF148FL的表达量明显上升,而ZNF148△N的表达水平下降(均P＜0.05).ZNF148△N-siRNA组的ZNF148△N表达水平明显下降,但ZNF148FL的表达水平上升;ZNF148AN-Over express组ZNF148△N表达水平升高,而ZNF148FL的表达水平下降(均P＜0.05).ZNF148FL-Over express组及ZNF 148 △N-siRNA组SW480细胞增殖能力增强,而ZNF148FLsiRNA组和ZNF 148△N-Over express组SW480细胞增殖能力下降(均P＜0.05).ZNF 148FL-siRNA组和ZNF148△N-Over express组穿膜SW480细胞数量及迁移活性显著下降,而凋亡率显著上调;ZNF148FL-Over express组和ZNF 148△N-siRNA组穿膜细胞数及迁移活性显著上调,而凋亡率显著下调(均P＜0.05).结论:ZNF148FL表现为增加结直肠癌细胞的增殖、侵袭和转移活力,而ZNF△N作用与之相反,ZNF148的ZNF148FL与ZNF△N两种剪接体对于结直肠癌的恶性生物活性可能表现出了互相拮抗作用.
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牙髓干细胞向成牙本质细胞诱导分化过程中Oc t4可变剪接体表达改变的研究
目的：研究多能性转录因子Oct4可变剪接体在人牙髓干细胞（hDPSCs）向成牙本质细胞定向分化过程中的表达改变。方法：矿化液诱导hDPSCs向成牙本质细胞分化，RT－PCR检测未经分化诱导、分化诱导7、14 d时Oct4可变剪接体（Oct4A，Oct4B）以及干性分子Sox2、Klf4和DSPP的表达改变；激光共聚焦显微镜（CLSM）检测Oct4A在分化过程中的表达和定位。结果：hDPSCs高表达CD146、CD105、CD90、CD29；CD45及CD34表达阴性。矿化液诱导细胞分化后牙本质涎磷蛋白（DSPP）的总蛋白和mRNA表达阳性。在hDPSCs未经分化诱导、分化诱导7、14 d时，Oct4A和Sox2、Klf4均有表达，分化诱导后表达量明显降低（P＜0．05），14 d时hDPSCs表达均低于7 d（P＜0．05）；Oct4B在hDPSCs未经分化诱导、分化诱导7、14 d 时表达均为阴性， TIP110与Oct4A在hDPSCs成牙本质分化过程中表达趋势相同。未经分化诱导hDPSCs剪接体Oct4A主要表达于细胞核，而分化诱导21 d后主要表达于细胞质。结论：hDPSCs向成牙本质细胞分化过程中伴随着其干性降低、剪接体Oct4A表达降低和核浆穿梭效应的发生，提示Oct4A在维持hDPSCs干性中发挥着一定作用。
