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HIV和HCV合并感染对患者外周血中A3GmRNA及干扰素α表达的影响
目的：研究HIV和HCV（HIV／HCV）感染对患者外周血单个核细胞（PBMC）中A3G mRNA表达及外周血中内源性干扰素（ IFN）-α水平的影响。方法以未经抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者（ HCV单一感染组，43例）、艾滋病患者（ HIV单一感染组， CD4＋T 淋巴细胞＜200个／μL，45例）和HIV／HCV合并感染组（ CD4＋T淋巴细胞＜200个／μL，45例）为研究对象，并以23名我院门诊健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测A3G mRNA，酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测血浆中内源性IFN-α的表达量。组间比较采用秩和检验，相关性分析用Spearman秩相关分析。结果 HIV单一感染组、HIV／HCV合并感染组、HCV单一感染组和健康对照组PBMC中A3G mRNA的表达量分别为4.89（0.59），4.85（0.71），3.89（1.08）和3.69（0.81）lg拷贝／mL。其中，HIV单一感染组和HIV／HCV合并感染组PBMC中A3G mRNA的表达量均明显高于健康对照组（ Z＝－6.306和－6.280，P＜0.01）和HCV单一感染组（Z＝－7.358和－7.275，P＜0.01）。 HIV单一感染组、HIV／HCV合并感染组、HCV单一感染组和健康对照组血浆中 IFN-α表达量分别为2.79（1.25），2.05（1.29），2.32（1.84）和2.16（2.19） pg／mL，其中 HIV 单一感染组血浆中 IFN-α表达量稍高于HIV／HCV合并感染组（Z＝－2.332，P＜0.05），其他各组血浆中IFN-α表达量比较差异均无统计学意义（P值均＞0.05）。血浆中 IFN-α水平与 A3G mRNA 表达水平未见明显相关性（rs ＝0.04，P ＞0.05），A3G mRNA 及 IFN-α表达量与HIV 及 HCV RNA 载量亦无明显相关性（P 值均＞0.05）。结论 HIV感染者PBMC高表达A3G，合并HCV感染对艾滋病患者的A3G表达无明显影响；A3G mRNA与IFN-α无明显相关性，且对HIV、HCV RNA载量的影响并不明显。
关键词： HIV感染 肝炎 丙型 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G 干扰素类 -
APOBEC3G对HIV-1及其Vif缺失株的抑制作用
目的 研究细胞内在抗病毒因子APOBEC3G对HIV-1及其Vif缺失株的抑制作用.方法 HIV-1野生株病毒(BH10 WT)和Vif缺失株病毒(BH10 ΔVif)分别由转染293T细胞获得,通过感染MT4和H9细胞,分别检测其反转录酶活性.用分子克隆技术构建APOBEC3G与绿色荧光蛋白融合表达的质粒pEGFP-3G.HIV-1野生株和Vif缺失株质粒与不同剂量的pEGFP-3G共转染293T细胞,APOBEC3G-GFP在细胞内融合表达定位通过荧光显微镜观察.所生成的子代病毒粒子的感染力分别由MAGI检测和反转录酶活性检测方法 定量.结果 BH10 WT病毒在H9细胞和MT4细胞中均有所复制,在感染MT4细胞后4 d已经具有较高的反转录酶活性.BH10 ΔVif病毒感染H9细胞产生的子代病毒的反转录酶活性接近细胞对照水平,而其在MT4细胞中产生的子代病毒的反转录酶活性在感染后12 d有所显现,即非允许性H9细胞内APOBEC3G对ΔVif病毒株具有很强的抑制作用.与绿色荧光蛋白融合表达的APOBEC3G蛋白定位于细胞质.BH10 ΔVif转染293T细胞后生成的病毒滴度为2.75×104 U/mL,随着pEGFP-3G共转染量的升高,所产生的子代病毒滴度从1.48×103 U/mL显著降至0.33×103 U/mL.与0.2 μg质粒pEGFP-3G共转染产生的BH10 ΔVif病毒的感染力比不表达APOBEC3G的相同病毒的感染力降低近20倍.结论 APOBEC3G具有抗HIV活性,同时HIV Vif在病毒复制过程中发挥关键作用,两者之间相互作用的量效关系为我们构建抗病毒药物筛选平台奠定了可靠的实验基础.
