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大鼠终板软骨细胞体外自然退变过程中Asporin基因的表达及意义
目的 通过大鼠终板软骨细胞体外自然传代的退变模型,探讨大鼠终板软骨细胞体外自然退变过程中Asporin基因的表达及意义.方法 取大鼠腰椎终板软骨细胞,酶消化法及自然传代法分离培养大鼠终板软骨细胞,选取P1代及P5代,体外培养6d,在倒置显微镜下观察细胞形态,利用HE染色及甲苯胺蓝染色对软骨细胞进行观察及鉴定.用RT-PCR及Western blot检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖及Asporin基因变化.结果 随着细胞传至P5代,细胞形态上有梭形变趋势,Ⅱ型胶原( P5/P1=0.111767,P=0.009842)及蛋白多糖表达(P5/P1=0.328965,P=0.002371)明显下调,Asporin蛋白表达明显上调.结论 终板软骨细胞传至P5代,细胞发生自然退变,Asporin基因表达明显上调,提示Asporin基因表达与终板软骨的退变具有重要联系.
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瘢痕疙瘩与正常皮肤的蛋白质组学研究
目的 通过比较瘢痕疙瘩与正常皮肤组织的蛋白质组表达差异,筛选出与瘢痕疙瘩产生相关的蛋白质.方法 2010年1月至6月运用蛋白质组学技术,对8例瘢痕疙瘩组织和3例正常皮肤组织进行差异双向凝胶电泳(2D-DIGE),选择差异蛋白质斑点,进行基质辅助激光解离飞行时间(MALDI-TOF/TOF)质谱分析和生物学信息分析.结果 成功建立瘢痕疙瘩和正常皮肤组织的双向凝胶电泳图谱,瘢痕疙瘩和正常皮肤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为2978和3053,其中表达差异超过4倍的斑点共有40个,质谱分析和数据库检索共鉴定出32种蛋白质,包括上调蛋白有20种,下调蛋白有12种.从功能上可分为载体蛋白(3种)、信号转导蛋白(4种)、增殖凋亡相关蛋白(2种)、细胞骨架蛋白(6种)、细胞外基质蛋白(8种)、免疫因子(3种)、肿瘤相关蛋白(2种)和未知功能蛋白(4种).结论 蛋白质组学能较好地显示瘢痕疙瘩与正常皮肤组织间的蛋白质表达差异.对这些差异蛋白质进一步深入研究,将有助于揭示瘢痕疙瘩的发病机制,也为发现新的治疗靶点提供线索和依据.
关键词： 瘢痕疙瘩 蛋白质组学 Asporin 膜联蛋白V 表皮型脂肪酸结合蛋白 -
Asporin在结直肠癌及癌旁正常组织的表达差异
目的 探究Asporin在结直肠癌及癌旁正常组织的表达差异. 方法 选择32例结直肠癌及其对应癌旁正常黏膜组织的石蜡标本,使用免疫组化方法检测Asporin的表达;12例新鲜切取的结直肠癌组织及配对癌旁正常组织通过Western Blot检测Asporin的表达.比较癌组织及癌旁正常组织Asporin表达的差异. 结果 免疫组织化学结果显示,相对于癌旁组织,Asporin在结直肠肿瘤组织中异常高表达,32例结直肠癌Asporin高表达率为68.75％(22/32).蛋白免疫印迹结果显示,12例新鲜肿瘤标本发现有9例Asporin呈高表达(P＜0.01). 结论 Asporin可能做为一种癌基因,参与结直肠癌的发生发展.
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正畸加载对自体移植牙牙周组织Asporin表达影响的动物实验
目的 观察术后加载正畸力对自体移植牙牙周愈合过程中Asporin、骨形成蛋白2(bone morphogenetic proteins-2,BMP-2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)基因及牙周膜相关蛋白1(periodontal ligament associated protein-1,PLAP-1)表达的影响,探讨正畸加载对自体牙移植后牙周愈合的影响机制.方法 将4只纯种比格犬的32颗上下颌切牙按照同颌对侧交换原则进行自体移植,分为4组:术后不加力组(对照组)和术后1、2、4周加力组(每只犬每组2颗牙),术后8周灌注、翻瓣,截取移植牙及牙槽骨,研磨后用实时定量PCR及蛋白质印迹法检测牙周组织中Asporin、BMP-2和ALP mRNA以及PLAP-1的表达情况.结果 对照组与术后1周加力组的Asporin、BMP-2、ALP mRNA表达量差异均无统计学意义(P＞0.05).术后2周加力组Asporin mRNA表达水平(2.047± 0.281)高,与其他组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).术后2周加力组BMP-2 mRNA表达水平(1.358±0.095)比对照组、术后1周加力组显著降低(P＜0.05),同时ALP mRNA表达水平高(1.710 ±0.051).术后2周加力组PLAP-1蛋白表达量(1.054±0.113)高,与对照组、术后4周加力组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 正畸加力可促进Asporin及其蛋白PLAP-1的表达;自体牙移植术后2周开始加力,Asporin基因及其蛋白PLAP-1表达活跃.
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细胞外基质蛋白Asporin的研究进展
近年来，随着对人类疾病认识的加深，细胞外基质(extracellular matrix，ECM)蛋白引起了学者们的广泛关注。Asporin是近年来在ECM中新发现的一种富含亮氨酸的小分子蛋白多糖(small leucine rich proteoglycan，SLRP)。目前很多研究表明，Asporin在人类多种疾病(炎症性疾病、退化性疾病和肿瘤)的发生、发展中发挥着重要的作用。本文就Asporin在人类疾病中的研究现状作一综述。
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高表达asporin对L929细胞中TGF-β1及Col2α1的影响
目的：构建高表达 asporin 基因 L929细胞株，研究其对子小鼠正常成纤维细胞 L929 TGF-β1及Col2α1表达的影响。方法：运用RT-PCR技术从小鼠下颌骨组织中扩增asporin cDNA ，连接酶连接至真核表达载体pcDNA3．1（-），所得的重组质粒pcDNA3．1（-）-ASPNⅢ用脂质体法转染小鼠成纤维细胞L929，经过G418筛选，使用 RT-PCR 以及 Western blot 技术筛选 asporin 基因高表达的细胞株。并使用 RT-PCR 以及Western blot技术检测asporin 基因高表达对细胞TGF-β1及Col2α1表达的影响。结果：成功获得asporin 高表达的L929细胞株。RT-PCR以及Western blot技术检测高表达asporin对TGF-β1及Col2α1的表达有明显的抑制作用。结论：asporin基因在L929细胞中高表达能抑制细胞TGF-β1及Col2α1的表达。
