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血清外泌体对小鼠烫伤创面愈合的影响
目的 探讨血清来源的外泌体对小鼠烫伤伤口愈合的促进作用及机制.方法 提取、分离并鉴定鼠血清中的外泌体.选取NIH小鼠建立皮肤深II度烫伤模型.造模后用外泌体进行治疗,评估外泌体的疗效,观察皮肤组织的病理变化.检测血清外泌体对小鼠成纤维细胞增殖的影响以及血清外泌体对表皮Hacat细胞迁移的影响.结果 成功建立小鼠深II度皮肤烫伤模型.血清外泌体可以明显缩小烫伤疤痕的面积.且能有效修复皮肤的附属结构和改善胶原纤维的排列.血清外泌体也能促进成纤维细胞的增殖和表皮Hacat细胞的迁移.结论 血清外泌体能促进烫伤小鼠皮肤的愈合,有望为临床烫伤的治疗带来新方法.
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血清外泌体miR-210作为肾透明细胞癌非侵入性诊断生物标志物的研究
目的 探讨肾透明细胞癌组织细胞来源的血清外泌体miRNA作为肾癌诊断的生物标志物的价值.方法 收集2015年6月至2016年6月我院行手术治疗的30例肾透明细胞癌患者的组织标本和相应的血清标本,男20例,女10例.年龄45 ～ 70岁,平均57岁.选取同期与患者年龄、性别匹配的30例排除肿瘤的健康者作为对照,男20例,女10例.年龄42 ～ 70,平均56岁.结合肾透明细胞癌组织microarray芯片检测结果,利用实时定量PCR检测比较miR-210、miR-224、miR-452、miR-34a等4个miRNAs在肾癌组织、肾癌患者血清和肾癌患者血清外泌体的表达差异,以及在癌旁组织和健康者血清中的表达情况.利用ROC曲线计算诊断肾透明细胞癌的敏感性和特异性.结果 miR-210、miR-224、miR-452在肾癌组织中表达明显高于癌旁组织,相对的倍数变化分别为20.51、54.08和2.48,差异有统计学意义(P ＜0.05);miR-34a表达的相对的倍数变化为1.53,差异无统计学意义(P＞0.05).肾癌患者血清中miR-210的表达明显高于健康者,相对的倍数变化为2.45,差异有统计学意义(P＜0.05);但miR-224、miR-452、miR-34a表达的相对的倍数变化分别为1.26、1.03和1.22,差异无统计学意义(P＞0.05).miR-210在肾癌患者血清外泌体中表达明显高于健康者,相对的倍数变化为2.32,差异有统计学意义(P＜0.05).ROC曲线表明血清外泌体miR-210诊断肾透明细胞癌的敏感性和特异性分别为92.1％和80.0％,曲线下面积为0.8789.结论 检测血清外泌体miR-210对于肾透明细胞癌早期诊断具有一定的价值.
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血清外泌体miRNA-184在非小细胞肺癌中的表达水平及其诊断效能
目的 分析血清外泌体miRNA-184在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及其对NSCLC的诊断效能.方法 回顾性分析NSCLC患者(66例)、肺炎患者(60例)的临床资料及同期健康体检者(30例)的体检结果.3组受试者均采集血清标本,提取经纯化鉴定的血清外泌体中miRNA,检测并比较3组受试者的血清外泌体miRNA-184的表达情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清外泌体miRNA-184在NSCLC中的诊断效能.结果 3组受试者血清外泌体miRNA-184的表达水平比较,差异有统计学意义(P﹤0.05);NSCLC患者血清外泌体miRNA-184表达水平明显高于肺炎患者和体检健康者(P﹤0.01).ROC曲线分析显示,miRNA佳的相对表达量临界值为1.26,曲线下面积为0.915(95％CI:0.84～0.99),血清外泌体miRNA-184诊断NSCLC的灵敏度为77.4％,特异度为96.8％.结论 相对于肺炎患者和健康体检者,NSCLC患者的血清外泌体miRNA-184表达水平较高,其临床诊断效能较高,可能是诊断早期NSCLC的潜在的生物学标志物.
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微小RNA-181a-5p在甲基苯丙胺依赖大鼠血清外泌体中的表达及生物信息学分析
目的 检测甲基苯丙胺依赖大鼠和健康大鼠血清外泌体中微小RNA(miR)-181a-5p的表达,并对miR-181a-5p进行靶基因预测及相关生物信息学分析.方法 用甲基苯丙胺复制大鼠条件性位置偏爱(CPP)模型.按照体重将雄性SD大鼠随机分为2组(每组10只):正常组(0.9％ NaCl),实验组(2mg·kg-1甲基苯丙胺).实验组上午8:00皮下注射甲基苯丙胺,下午16:00皮下注射0.9％ NaCl溶液,连续4d.正常组同时皮下注射等体积0.9％ NaCl溶液.实验组与正常组上午处置后,立即置于白箱训练1h;下午皮下注射0.9％NaCl溶液后,立即置于黑箱训练1h,连续训练4d.在末次处置1d后,进行位置偏爱测定,记录大鼠15 min内在白箱中停留时间及运动路程.用RT-qPCR技术检测大鼠血清外泌体中miR-181a-5p的表达水平;以TargetScan、miRanda及miRBD预测miR-181a-5p靶基因;用DAVID数据库对其靶基因进行功能聚类分析(G0)和生物通路(KEGG pathways)分析;以STRING在线分析软件对其靶基因蛋白进行相互作用分析.结果 CPP训练后,2组在白箱中停留时间(s)及运动路程(cm):正常组分别为202.67±28.24,3349.26±412.28;实验组分别为460.47±66.71,4475.97±585.74.实验组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).正常组、实验组血清外泌体中miR-181a-5p表达分别为3.39±1.79,10.23±4.32,组间差异有统计学意义(P＜0.01).预测得到miR-181a-5p靶基因108个,其功能主要富集于神经元的生成和分化、基因表达调控及谷氨酸转运等生物学过程,涉及内质网蛋白加工信号通路.miR-181a-5p靶基因编码蛋白之间存在复杂的相互作用,其中RAD23B、PRKCD、MAP2K1、NCBP1、GABRA1等在蛋白互作网络中具有核心地位.结论 miR-181a-5p可能通过调控基因表达及谷氨酸转运等生物过程,作用于内质网蛋白加工信号通路,进而调节下游靶蛋白参与甲基苯丙胺成瘾的发生过程.
关键词： 甲基苯丙胺 条件性位置偏爱 微小RNA-181a-5p 血清外泌体 生物信息学 -
外泌体源性微小核糖核酸在慢性乙型肝炎患者自然史不同阶段中的表达及研究
目的 探讨CHB患者自然史不同阶段的血清外泌体中差异表达的miRNA及其临床意义.方法 2014年1月至2017年1月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心C HB初治患者92例,其中免疫耐受期24例,免疫清除期24例,低复制期24例,再活动期20例.采用ExoQuick试剂盒抽提250μL血清中的外泌体,通过蛋白免疫印迹法检测外泌体蛋白标志物LAMP2和TSG101的表达;实时荧光定量PCR技术检测miRNA-122、miRNA-125a、miRNA-29c、miRNA-200c在血清外泌体中的表达.组间差异比较采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H检验;关联性分析采用皮尔逊相关系数;用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC曲线)来评估预测效能.结果 蛋白质免疫印迹法检测外泌体表面特异性标志物LAMP2和TSG101阳性.CHB患者血清外泌体中的miRNA-122(H=41.06)、miRNA-125a(H=29.31)、miRNA-29c(H=49.14)和miRNA-200c(H=31.73)在自然史不同阶段表达差异均有统计学意义(均P<0.01).根据肝功能指标及肝穿刺结果,与无炎症组相比,炎症组血清外泌体的miRNA-122(U=804)、miRNA-29c(U=317)和miRNA-200c(U=574)均下调(均P<0.05),而miRNA-125a上调(U=279,P<0.01).miRNA-200c与ALT呈负相关(r=-0.3932,P<0.01),而miRNA-125a与ALT呈正相关(r=0.5981,P<0.01).通过ROC曲线来评价外泌体源miRNA-122、miRNA-125a、miRNA-29c和miRNA-200c对炎症的诊断价值,曲线下面积分别为0.6193、0.8396、0.8243和0.6883,其中miRNA-125a曲线下面积大,敏感度为84.62％,特异度为74.47％.而ALT区分肝穿刺有无炎性反应的ROC曲线下面积为0.7953,敏感度为81.08％,特异度为70.97％.结论 外泌体源性miRNA在CHB患者自然史不同阶段中的表达存在明显差异,与炎性反应相关的外泌体源miRNA有望成为诊断肝脏炎性反应的新型无创生物学标志物,帮助确定C HB患者临床用药治疗的佳时机.
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血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的表达水平及其诊断效能
目的 分析血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的表达水平,及其对非小细胞肺癌的诊断效能.方法 选取非小细胞肺癌患者112例、肺炎患者60例、体检健康者40例作为研究对象,分别收集3组血浆标本,提取经纯化鉴定的血清外泌体中miRNA,采用QRT-PCR法检测3组血清外泌体miR-184的表达水平,利用ROC曲线评价血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的诊断效能.结果 本研究纯化的样品中含有大量外泌体颗粒且具备既往报道的外泌体特性;3组血清外泌体miR-184的表达量,组间两两比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),且非小细胞肺癌患者血清外泌体miR-184表达量明显高于肺炎患者和体检健康者(P＜0.05);ROC曲线图下血清外泌体miR-184对非小细胞肺癌的诊断敏感性为92.54％,特异性为84.19％,其曲线下面积为0.913 [95％CI (0.726,1.031)].结论 血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中呈高表达,其临床诊断效能较高,可能成为非小细胞肺癌早期诊断的生物学标志物.
