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RAP1B在胃癌中的表达及其意义
目的 研究RAP1B在胃癌中的表达,探讨新的有效治疗方法.方法 收集100例术前未进行放化疗,且经病理证实为胃癌组织的临床标本.同时取30例距胃癌组织5cm以上的癌旁组织作为对照.制作组织蜡块标本,切片,通过免疫组化技术检测RAP1B在胃癌及癌旁组织中的表达情况.结果 免疫组化实验示胃癌组织中RAP1B高表达率达72％;结论 RAP1B在胃癌组织比较癌旁正常组织中的表达阳性率及阳性程度上升.
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冷应激对大鼠肝脏组织中Rap1b表达的影响
目的 探讨冷应激对大鼠肝脏组织中Rap1b表达的影响.方法 将20只Wistar大鼠随机分为常温饲养组和冷应激组,每组10只,正常饲养温度为(24.0±0.1)℃,冷应激温度为(4.0±0.1)℃.经12 h冷刺激后,采集大鼠肝脏组织,提取总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测Rap1b基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平.结果 冷应激组大鼠肝脏组织中Rap1b基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著高于常温饲养组(P＜0.01).结论 冷应激可显著提高大鼠肝脏组织中Rap1b基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平.
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Rap1b在斑马鱼神经嵴中表达情况的初探
目的：研究Rap1b与斑马鱼颅面部发育的关系。方法：利用模式动物斑马鱼，取由神经嵴发育而来的颅面部组织做实时定量RT-PCR，观察不同时期Rap1b的mRNA表达情况。再通过Rap1b整体原位杂交观察其在斑马鱼发育过程中时间和空间的表达情况，并与神经嵴特异性标志基因Crestin原位杂交表达情况在时间和空间上对比。结果：实时定量RT-PCR结果显示，Rap1b在神经嵴形成、迁移、分化过程中在颅面部均有表达。原位杂交结果显示，Rap1b与Crestin在斑马鱼中的表达在时间和空间上有重叠。结论：Rap1b可能通过调节神经嵴发育参与颅面部发育。
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Rap1b对鼠前成骨细胞Mc3T3-E1成骨分化早期的影响
目的 探讨Rap1b对鼠前成骨细胞Mc3T3-E1成骨分化早期的影响.方法 利用成骨诱导液诱导Mc3T3-E1成骨向分化,利用实时定量PCR分别检测诱导后0、3、7 d的Rap1b mRNA的相对表达量.同时向实验组细胞分别转染Rap1b-mus-462和Rap1b-mus-703,4 d后进行ALP染色,同时测定Rap1b的mRNA相对表达量,并对转染后细胞中成骨指标ALP、Runx2和Osterix 0、3、7 d时的mRNA相对表达量进行测定.再利用划痕实验观察siRNA转染对Mc3T3-E1细胞迁移能力的影响.结果 Real-time PCR结果显示在成骨诱导早期的不同时间点,Rap1b的表达量随诱导时间的增加而增加.当Rap1b的表达降低时,各成骨指标ALP、Runx2和Osterix的表达量也随之降低,Mc3T3-E1细胞迁移能力也有所减弱.结论 Rap1b对Mc3T3-E1细胞成骨分化早期以及细胞迁移有一定的促进作用.
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hoxb4转基因斑马鱼造血发育中rap1b基因的表达
目的 为了发现在早期造血发育中关键的调控因子,利用hoxb4转基因斑马鱼研究rap1b基因的表达变化情况,以期明确hoxb4与rap1b在早期造血发育中的关系.方法 选取过表达hoxb4的斑马鱼系为研究对象,分为3组:实验组(表达hoxb4-EGFP的斑马鱼),实验对照组(表达EGFP的斑马鱼),空白对照组(野生型斑马鱼).通过流式分选技术将实验对照组和实验组18hpf(斑马鱼胚胎受精发育18h)、24、30、36、48hpf胚胎中带有绿色荧光(enhanced green fluorescent protein,EGFP)信号的细胞分选出来,利用实时荧光定量PCR检测分选出的细胞中的rap1b基因的表达变化;然后收集野生型斑马鱼多时相胚胎,制备rap1b基因的反义mRNA探针,通过胚胎原位杂交观察探针在3组斑马鱼胚胎18、24、30、36、48hpf杂交信号表达部位.结果 qRT-PCR结果显示实验组30、36、48hpf的斑马鱼胚胎的rap1b基因的表达明显增强(P＜0.05);制备了rap1b基因的反义mRNA探针,胚胎整体原位杂交结果显示:rap1b基因在3组斑马鱼胚胎18 ～ 48 hpf之间神经发育和造血发育部位都有表达.结论 在过表达hoxb4转基因斑马鱼中rap1b基因表达有明显的升高趋势,提示rap1b基因与hoxb4基因可能共同参与调节早期造血发育过程.
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Rap1 b在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的：探讨Rap1b在人非小细胞肺癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组化法检测65例非小细胞肺癌组织和52例癌旁组织中Rap1b的表达，分析其与临床病理特征之间的关系。结果：Rap1b在65例非小细胞肺癌组织中的表达率为72.3％，明显高于癌旁组织23.1％（P<0.05）。与肿瘤分化程度明显相关（ P<0.05）。结论：Rap1b在非小细胞肺癌中高表达，提示其可能发挥癌基因的功能。
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靶向 Rap1b 基因 shRNA 慢病毒载体的构建及其对食管鳞癌细胞 Rap1b基因表达的沉默
目的：设计以 Rap1b 基因为靶点的短发夹状 RNA（shRNA），构建重组慢病毒表达载体并转染食管鳞癌细胞，观察其在食管鳞癌细胞中的表达。方法：应用重组 DNA 技术，将设计好的4条基因特异性 shRNA 序列插至慢病毒表达载体 pGLV3- GFP 中，构建 pGLV3- GFP - Rap1b - shRNA1/2/3/4。并应用脂质体法转染293T 细胞，进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量 PCR（RT - PCR）及 Western blot 分别从 mRNA 和蛋白水平检测转染食管鳞癌细胞株 Eca109后 Rap1b 基因的表达情况。结果：测序证实慢病毒载体构建成功，并测定滴度为1×109 TU/ ml，pGLV3- GFP - Rap1b - shRNA3/4转染后72h 和96h 均可显著抑制 Rap1b 基因mRNA 及蛋白的表达。结论：成功构建 Rap1b 基因的 shRNA 慢病毒载体，所介导的 RNAi 能有效抑制食管鳞癌细胞 Eca109中 Rap1b 基因的表达。
