普罗帕酮对兔心室肌细胞动作电位的影响及对快钠电流的使用依赖性阻滞作用

目的：探讨普罗帕酮对兔心室肌细胞动作电位（AP）的影响及对快钠电流的张力性阻滞和使用依赖性阻滞作用。方法：选取10只成年新西兰大白兔，急性分离兔心脏，应用消化酶消化分离获得单个心室肌细胞（n=10），采用微电极技术记录AP的大舒张期电位、0相大上升速率（Vmax）、AP振幅，以及复极化20%、50%和90%时的动作电位时程（依次简写为APD20、APD50和APD90）。应用全细胞膜片钳技术检测兔心室肌细胞快钠电流的I-V曲线及不同频率下的峰值电流，并用10μmol/L普罗帕酮溶液灌流干预，后进行统计分析。结果：与普罗帕酮灌流前相比，普罗帕酮灌流后，兔心室肌细胞大舒张电位无明显变化[（-80±6）mV vs （-82±5） mV，P>0.05]，AP振幅显著降低[（95±12）mV vs （125±10）mV，P<0.05]，Vmax明显减慢[（330±43） V/s vs （420±54） V/s，P<0.05）]，APD20[（8±2）ms vs （6±2）ms，P>0.05]、APD50[（16±3）ms vs （12±3）ms，P>0.05]和APD90[（86±14） ms vs （85±12）ms，P>0.05]无显著变化。普罗帕酮干预后，快钠电流的I-V曲线较干预前明显上移，峰值电流下降[（3001±383）pA vs （4193±378）pA，P<0.05]。分别予0.06、1、2、5、10 Hz频率刺激，普罗帕酮干预前快钠电流均未显示出使用依赖性阻滞作用，第10个刺激与第1个刺激诱发的快钠电流之间的差异无统计学意义（P>0.05）。普罗帕酮干预后，在2、5、10 Hz频率刺激下，阻滞率分别为（22±11）%、（38±14）%和（52±17）%，与普罗帕酮灌流前及普罗帕酮在0.06 Hz和1 Hz刺激时的阻滞率间的差异有显著统计学意义（P<0.05），三组间两两比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。结论：普罗帕酮减慢AP的Vmax，降低AP振幅，对APD无显著影响。普罗帕酮对快钠电流不但有张力性阻滞作用，更有显著的使用依赖性阻滞作用，这样不但减轻了对QT间期的影响，也可减少心动过缓的发生。

利多卡因对兔心室肌细胞动作电位的影响及对快钠电流的阻滞作用

目的：探讨利多卡因对心室肌细胞动作电位(AP)的影响以及对快钠电流(INa-T )的张力性阻滞和使用依赖性阻滞作用。方法急性分离新西兰大白兔心脏,并予消化酶消化获得单个心室肌细胞,采用微电极技术检测 AP 相关参数：大舒张期电位、零相大上升速率(Vmax)、AP 振幅,以及复极化20%、50%和90%时的 AP 时程(APD20、APD50、APD90)。采用全细胞膜片钳技术检测兔心室肌细胞的 I Na-T。用100μmol/ L 利多卡因溶液灌流干预,观察各参数的变化。结果100μmol/ L 利多卡因灌流后,兔心室肌细胞大舒张电位无明显变化[(-81±7) mV 比(-80±6)mV,P =0.102], AP 振幅显著降低[(100±12) mV 比(127±9) mV,P =0.002],Vmax 明显减慢[(328±41) V/ s 比(422±45) V/ s, P =0.004],APD90显著缩短[(66±8) ms 比(85±10) ms,P =0.021],峰值钠电流明显降低[(2468±389)pA 比(3223±367)pA,P =0.003]。在5 Hz 频率刺激下,利多卡因灌流前第40个刺激与第1个刺激诱发的电流分别为(3145±323)pA 和(3287±432)pA (P =0.087),灌流后电流分别为(1125±298)pA 和(2365±376)pA(P =0.013)。结论利多卡因降低 AP 振幅,减慢 Vmax,缩短 APD90,对 INa-T不但有张力性阻滞,更有显著的使用依赖性阻滞作用。

心房颤动不同阶段人心房肌细胞快钠电流重构特征的研究

伊布利特对兔心房细胞快钠电流活性的影响

目的 观察不同浓度伊布利特对心房细胞快钠通道的影响.方法 新西兰纯种大耳白兔40只,随机分为正常对照组(Con),伊布利特10-7mol/L、10-6 moL/L 和10-5 mol/L浓度组.利用胶原酶酶解法分离心房肌细胞,应用膜片钳全细胞记录方法,记录对照组及伊布利特3种浓度组心房细胞INa活性,并与正常对照组进行比较分析.结果 INa峰值电流密度在对照组为-87.12±4.67pA/pF;伊布利特10-7mol/L、10-6mol/L和10-5 mol/L组分别为-68.82±4.43,-45.26±3.46和-33.46±3.11pA/pF,伊布利特组较对照组有明显下降(P＜0.05或0.01),伊布利特3组之间也有显著差异且呈浓度依赖性(P＜0.05).伊布利特组的INa稳态失活曲线浓度依赖性左移,INa再恢复明显减慢.结论 伊布利特浓度依赖性的抑制心房细胞0相快钠电流,这可能是伊布利特治疗房性心律失常的部分离子通道机制.

雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流的影响

目的 研究雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流的影响.方法 运用全细胞膜片钳记录方法了解雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流的作用,并了解其是否存在使用依赖性阻滞作用.结果 30μmol/L雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流有明显的抑制作用,其IC_(50)为(39.3±2.0)μmol/L,并且随着刺激频率的增加其作用加强,存在使用依赖性.结论 雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流有一定的抑制作用,其存在使用依赖性阻滞作用.

模拟缺血对兔三层心室肌细胞快钠通道的影响

目的探讨心肌缺血时折返性心律失常发生的离子机制.方法以酶解法分离兔心室肌三层细胞,先后用正常和缺血液灌流模拟正常和缺血状态,并采用膜片钳全细胞记录法观察三层心室肌细胞快钠通道的活性和异质性变化.结果(1)缺血后三层细胞的钠电流(INa)电压依赖性、I-V曲线的形态轨迹未变,INa峰电流密度减小,三层细胞间峰电流密度差异发生变化.(2)缺血后三层细胞失活曲线均左移,失活加速,三层细胞间INa失活半电压差异发生变化.(3)缺血30min时INa灭活后恢复曲线由原来的三层细胞间无统计学差异(P＞0.05)变为有统计学差异(P＜0.05).各层细胞自身INa灭活后恢复随着缺血时间延长而减慢,但无统学差异.结论心肌缺血使钠通道活性改变,影响三层细胞间INa的异质性及三层细胞离子通道电流平衡,构成心律失常发生的基质,可部分解释三层细胞在正常和缺血状态对药物的不同反应.

兔左室各层心肌细胞快钠通道特性的跨壁异质性

目的:研究新西兰纯种大白兔左心室游离壁3层心肌细胞的形态特征及其快钠通道电流(INa)特性的异质性.方法:采用胶原酶酶解法分离兔左室游离壁3层心肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录快钠电流的动力学特性.结果:①兔左室游离壁3层心肌细胞的形态特征相似;②3层细胞的INa I-V曲线均呈电压依赖性,形态轨迹一致.3层细胞中M细胞的I-V曲线低,心内膜和心外膜层的依次向上.INa峰值电流密度在-20 mV时M, Epi和Endo细胞分别为-31±8、-16±7和-12±2 pA/pF(n=12 cells),M细胞的INa电流密度明显大于Epi、Endo.M细胞的INa稳态失活曲线在左边,向右依次为Epi和Endo细胞,M的INa失活快.3层细胞的INa失活后恢复曲线无显著性差异.结论:兔左室游离壁3层心肌细胞的形态特征相似,INa的分布及动力学特性存在异质性,可能是动作电位形态的差异和折返性心律失常发生的离子基础.

成年大鼠心室肌细胞表达多种电压门控钠通道α亚型

目的 观察成年大鼠心室肌细胞上电压门控钠通道不同亚型的表达情况.方法 采用酶解消化法分离成年大鼠心室肌细胞,利用免疫荧光染色结合激光共聚焦技术检测心室肌细胞钠通道 α亚型Nav1.1、Nav1.2、Nav1.3、Nav1.5、Nav1.6、Nav1.7的表达及分布情况,采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞钠电流.结果 成年大鼠心室肌细胞除表达心脏型钠通道亚型Nav1.5之外,还表达神经型钠通道亚型Nav1.1、Nav1.6和Nav1.7,不表达Nav1.2和Nav1.3.Nav1.5分布于横小管周围,Nav1.1和Nav1.7亦呈点状分布于横小管区域.Nav1.6表达稍弱,沿心室肌细胞长轴纵向分布,闰盘处未见钠通道各 α亚型的表达.膜片钳结果显示成年大鼠心室肌细胞表达快钠电流(I Na,T)及晚钠电流(I Na,L).结论 成年大鼠心室肌细胞表达心脏型钠通道亚型(Nav1.5)和多种神经型钠通道亚型(Nav1.1、Nav1.6和Nav1.7),这可能有助于维持心肌细胞的正常电生理活动.

雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流的影响及使用依赖性阻滞作用

目的 研究雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流的影响及其是否存在使用依赖性阻滞作用.方法 应用全细胞膜片嵌记录方法,了解雷诺嗪对兔单个心房肌细胞快钠电流的作用,及在不同刺激频率(1Hz、3.3Hz、5Hz)时对快钠电流的影响.结果 30μmmol/L雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流有明显的抑制作用,其IC_(50)为(25.6±1.8)μmmol/L,并且随着刺激频率的增加其作用加强,存在使用依赖性.结论 雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流有一定的抑制作用,其存在使用依赖性阻滞作用.