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大鼠肝再生相关基因LRRP1的克隆化
目的:利用抑制性消减杂交技术构建大鼠肝脏部分切除术后差异表达基因的cDNA文库,并通过同源引物反转录PCR的方法克隆大鼠肝再生相关基因LRRP1的全长序列.方法:分别提取肝脏部分切除术后24h以及对照大鼠肝脏mRNA,以之为模板合成cDNA,称为测试和驱动.酶切消化后将测试分成两组,分别与不同的接头连接,分别与驱动进行杂交,然后混合两份杂交液,加入过量的驱动不经变性进行第二次杂交即消减杂交.之后进行两次PCR扩增,将产物克隆入质粒载体,构建差显文库,测序后以生物信息学技术进行序列同源性比较.通过同源引物反转录PCR的方法克隆基因全序列,并用软件分析其蛋白结构.结果:成功构建大鼠肝脏部分切除术后的cDNA差显文库,消减效果良好.将所得的部分基因进行测序分析,选择一个未知序列,通过同源引物反转录PCR的方法克隆到大鼠肝再生相关基因LRRP1的全长序列,并初步分析了其蛋白结构.结论:确定了大鼠肝再生相关蛋白LRRP1的基因序列,并证明其在大鼠肝再生过程中高度表达.
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庚型肝炎病毒感染550例临床分析
自1995年底Simmons和1996年初Linnen等[1,2]成功分离了庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV,简称HGV),关于HGV的致病性一直争论不休.我国也证实了HGV感染的存在并对其基因进行克隆,测定了该基因全序列.由于HGV多为重叠或混合其他病毒感染,研究比较困难.至今仍未能证明HGV是肝炎或其他已知肝病的病原,以及它的致病性.笔者于1997年1月至1999年12月对HGV的致病性进行了研究,现将结果报告如下.
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庚型肝炎的研究进展
随着分子生物学技术的迅速发展及广泛利用,一些传统的病毒鉴定方法已被盲克隆(blind cloning)、表达蛋白质,免疫筛选及核酸序列检测等技术所替代,使得病毒性肝炎的研究取得了较快的发展.1989年东京国际会议正式命名:HAV、HBV、HCV、HEV5型肝炎病毒.并建立了5型肝炎病毒的测检方法.但仍有一部分肝炎患者的病原学无法查明.在我国的输血后肝炎中除乙型外,约90%为丙型,其中10%的患者不能进行病原学诊断,这都预示着是否有新的肝炎病毒存在.1995年美国学者发现了一种新型肝炎病毒一庚型肝炎病毒.我国也证实了HGV感染的存在并对其基因进行克隆,测定了其基因全序列[1.2].由于HGV多为重叠或混合其它病毒感染,研究比较困难.至今仍未能证明GBVC/FGV是肝炎或其它已知肝病的病原,以及其它的致病性.现将有关HGV的发现,感染流行病学,HGV分子生物学结构特点,及致病性的研究进展综述如下.