首页 > 文献资料
-
人胰腺细胞cDNA 文库中丙型肝炎病毒NS4B 结合蛋白基因的筛选
目的 从人胰腺细胞cDNA 文库中,采用酵母双杂交方法 筛选HCV NS4B 包膜蛋白的相互作用蛋白.方法 人胰腺细胞cDNA 文库先进行扩增,随后纯化及鉴定,然后将鉴定好的人胰腺细胞cDNA 文库质粒转化入酵母菌株Y187.构建pGBKT7-NS4B 作为诱饵质粒,随之转化酵母菌株AH109,用色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)筛选阳性菌落.配合两种重组酵母菌株AH109 与Y187,用四缺培养基及X-α-gal 筛选蓝色酵母菌落,提取相应质粒,电转化感受态菌DH5α后再提取质粒,测序仪测序,结果 使用PUBMED 进行序列比对.结果 成功构建pGBKT7-HCV NS4B 重组质粒,并从人胰腺cDNA 文库中筛选出7 种与HCV NS4B 蛋白相结合的蛋白基因,包括CDK5RAP3、辅脂肪酶、胰石蛋白、凝乳蛋白、弹性蛋白酶2A、糜蛋白酶和胆盐刺激酯酶.结论 HCV NS4B 蛋白可能通过与所筛选出前述蛋白中参与代谢过程的相关蛋白结合,影响糖、脂类代谢过程.
-
丙型肝炎病毒核心蛋白与NS4B融合蛋白的构建和表达
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(core)与NS4B融合表达克隆,并在大肠埃希菌中表达.方法:应用PCR方法从抗HCV阳性血清中扩增出HCV核心蛋白基因和NS4B基因的cDNA片段,将两部分基因片段拼接成一条完整cDNA,连接到表达载体pET28a上,菌落PCR和测序方法选择阳性核心蛋白-NS4B-pET28a重组质粒.将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BI21中进行表达,分别用SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表达的重组融合蛋白.结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示,成功获得核心蛋白基因和NS4B基因,并成功拼接成一条完整cDNA;菌落PCR和测序结果表明重组融合克隆核心蛋白-NS4B-pET28a构建成功.SDS-PAGE结果表明重组融合质粒在大肠埃希菌BL21中成功表达,蛋白质印迹结果显示表达的重组蛋白与抗HCV阳性血清具有反应性.结论:成功构建了HCV核心蛋白与NS4B的重组融合克隆,并成功在大肠埃希菌中表达.
