首页 > 文献资料
-
大肠埃希菌Ⅰ类整合子与耐药性分析
目的:了解Ⅰ类整合子在临床分离大肠埃希菌和健康人群大肠埃希菌中分布流行状况.方法:根据NCCLS推荐的琼脂稀释法进行药敏试验;PCR扩增Ⅰ类整合酶基因.结果:患者大肠埃希菌Ⅰ类整合子检出率为45.4%;健康人大肠埃希菌Ⅰ类整合子检出率为5.4%.108株患者大肠埃希菌对12种抗菌药物耐药率,高为氨苄西林97.2%,低为亚胺培南0.93%.结论:Ⅰ类整合子在患者大肠埃希菌中的存在已经相当普遍,健康人群大肠埃希菌也携带有Ⅰ类整合子,应加强基因水平耐药监测.
关键词： 大肠杆菌/遗传学/药物作用 整合子/药物作用 抗药性 细菌/遗传学 -
大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及耐药基因检测
目的:了解大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药情况与耐药基因携带情况.方法:使用K-B法检测大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类抗生素的耐药基因以明确其基因型.结果:40株大肠埃希菌中耐氨基糖苷类抗生素菌株32株,耐药率为80.0%(32/40),其中aac(3)-Ⅰ2株,占6.3%(2/32),aac(3)-Ⅱ 28株,占87.5%(28/32),aac(6')-Ⅰ 12株,占37.5%(12/32),aac(6')-Ⅱ 8株,占25%(8/32),ant(2")-Ⅰ 4株,占18.8%(6/32),ant(3")-Ⅰ 9株,占28.1%(9/32).结论:耐氨基糖苷类抗生素的大肠埃希菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以sac(3)-Ⅱ和aac(6')-Ⅰ为主.
-
铜绿假单胞菌普通菌毛与耐药性R质粒的关系
目的:检测铜绿假单胞菌耐药株PA36的耐药性R质粒与菌毛及粘附性的关系.方法:应用琼脂糖凝胶电泳试验、电镜照片制备及观察、粘附试验及质粒消除试验.结果:PA36含有一条相对分子质量是3.3×106的R质粒;电镜下观察PA36具有周毛型菌毛;粘附试验于光镜下可见该菌大量粘附到脱落的尿道上皮细胞上;该R质粒消除后该菌株的耐药性与菌毛一起消失,粘附性明显减弱.结论:铜绿假单胞菌菌株PA36编码普通菌毛、决定粘附性的基因主要是在相对分子质量为3.3×106的一个R质粒上.
-
16S-23S rRNA基因区间细菌鉴定实验研究
目的:探讨16S-23S rRNA基因区间对细菌鉴定的应用.方法:以16S-23S rRNA基因区间为靶序列设计引物,采用聚合酶链反应检测标准菌株及临床菌株DNA.结果:对27株代表27个菌种的标准菌株进行PCR扩增,分别出现不同的DNA图谱,该图谱能直接或经核酸内切酶处理后用于细菌分类,敏感性可达2.5 CFU/ml的细菌,与人外周血白细胞DNA和真菌及病毒无交叉.32株临床细菌标本均扩增出与相应标准菌株一致的图谱.结论:16S-23S rRNA基因区间PCR扩增技术检测细菌,具有敏感、特异、快速、准确的优点,为临床败血症病原的快速诊断提供了新的方法.
关键词： 细菌/遗传学 基因rRNA 聚合酶链反应 16S-23S rRNA基因 -
人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选
目的:构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体(scFv)库,筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2(HER2)特异性scFv,为HER2和CXC趋化因子受体4 (CXCR4)双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列.方法:取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织,提取总RNA;构建可变区基因的T载体库,将重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因与pCANTAB连接肽连接,获得pCANTAB-scFv,电转化感受态大肠杆菌TG1;以M13K07辅助噬菌体进行感染,获噬菌体抗体库;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测筛选后获得的噬菌体抗体活性,以免疫组织化学法检测抗体亲和力,并通过测序进一步鉴定.结果:成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库,获得的scFv长度为750 bp,VH和VL长度分别为375和330 kb;电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确,得到库容为2.48×108的大容量抗体库;通过噬菌体展示和淘洗筛选,富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库;所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性,对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力;测序结果与人IgG抗体进行对比,所获得的scFv具有高度的人源性.结论:主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库,并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv,为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体.
-
细菌药物钝化酶基因分布及其表达诱导与抑制机制的研究
目的:了解临床常见病原菌药物钝化酶基因及其优势基因携带模式,抗生素诱导药物钝化酶基因表达上调的作用及其与细菌组氨酸激酶的关系.方法:采用PCR和测序法,了解金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌临床菌株携带的β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类钝化酶基因.采用实时荧光定量RT-PCR,了解抗生素诱导及组氨酸激酶阻断剂氯氰碘柳胺抑制药物钝化酶基因表达的作用.结果:63株大肠埃希菌中检出4种β-内酰胺类、2种氨基糖苷类和1种大环内酯类钝化酶基因,优势基因携带模式为[TEM+CTX-M]+aac(3)-Ⅱ+ mphA 16株(25.4％)和[TEM+CTX-M]+aac (6’)-Ⅰb13株(20.6％).24株金黄色葡萄球菌中检出2种β-内酰胺类、3种氨基糖苷类钝化酶基因,优势基因携带模式为aph (3')(41.7％)或aac(6)-Ⅰ e-aph(2)-Ⅰ a(25.0％).28株肺炎克雷伯菌中检出4种β-内酰胺酶、2种氨基糖苷类钝化酶基因,优势基因携带模式为[TEM +SHV]+[aac(6’)-Ⅰ b+aac(3)-Ⅱ](28.6％)和[TEM+SHV]+[aac (6')-Ⅰ b+aac(3)-Ⅱ]+mphA(17.8％).鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌也以携带两类或三类药物钝化酶基因为优势模式.1/4 MIC青霉素、头胞噻肟和链霉素,能诱导3种β-内酰胺类和4种氨基糖苷类钝化酶基因表达显著上调(P＜0.05),该诱导作用可被氯氰碘柳胺所抑制(P＜0.05).结论:上述临床常见病原菌多携带多类药物钝化酶基因并存在不同的优势基因携带模式.低浓度抗生素可能诱导药物钝化酶基因表达上调,但可被组氨酸激酶阻断剂所抑制.
-
耐药鲍曼不动杆菌扩增片段长度多态性分析指纹图谱数据库的建立
目的:建立鲍曼不动杆菌扩增片段长度多态性分析(AFLP)指纹图谱数据库.方法:采用NCCLS 2004年版抗生素敏感性判断方法研究药物敏感性,采用AFLP技术研究鲍曼不动杆菌基因型,以AFLP结果建指纹图谱立数据库.结果:药敏结果和AFLP指纹图谱数据库进行的聚合分析结果具有一致性.结论:AFLP指纹图谱数据库具有实用价值.
-
耶氏肺孢子菌对磺胺类药物耐药相关基因突变的研究进展
肺孢子菌肺炎是由耶氏肺孢子菌引起的,发生在免疫功能低下人群中的机会性感染.大量证据表明,耶氏肺孢子菌对磺胺类药物耐药性增加与二氢叶酸合成酶(DHPS)基因和二氢叶酸还原酶(DHFR)基因突变有关,但具体机制尚不清楚.DHPS和DHFR基因突变增加可能是药物选择性压力所致,也可能是耶氏肺孢子菌基因多态性自然发展和传播的结果.本文对耶氏肺孢子菌 DHPS 和DHFR基因突变产生的原因、分子流行病学研究进展及其与临床结局的关系进行了综述.
-
医院内多重耐药非发酵菌产金属酶的研究
目的 研究北京天坛医院多重耐药非发酵菌产金属酶情况.方法 收集北京天坛医院多重耐药铜绿假单胞菌44株、鲍曼不动杆菌20株和嗜麦芽窄食单胞菌4株,通过双纸片协同试验对68株非发酵菌进行金属酶的表型筛选,对金属酶基因IMP、VIM进行聚合酶链式反应及序列分析.结果 68株非发酵菌中,4株菌扩增出IMP-1型金属酶,并且均分离自铜绿假单胞菌,未检测到VIM型金属酶基因.结论 对于北京天坛医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌,产IMP-1型金属酶是一种重要的耐药机制.
