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小儿常见感染菌16S-23S rRNA基因区间的分子生物学研究
目的探讨聚合酶链反应(PCR)加限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析在细菌rDNA区间检测中的应用.方法以16S-23SrRNA基因区间为靶序列,设计引物,选择合适的内切酶,采用PCR法加RFLP法检测标准菌株及临床菌株的rDNA区间.结果26株不同的标准菌株经PCR扩增后,分别出现一条带,两条带,三条带及多条带的不同DNA图谱,敏感性试验可检出2.5CFU的细菌,与人类基因组DNA、真菌及病毒无交叉反应.其中14种菌经一步PCR扩增即可区分.另12种菌除肺炎克雷伯氏菌与坚韧肠球菌经HinfI或Alu I酶切后仍不能区分外,其余经其中一内切酶酶切后均能区分.32例血培养阳性标本均扩增出与相应标准菌株相一致的图谱.结论16S23S rRNA区间基因PCR扩增加RFLP技术检测细菌rDNA区间,具有特异、敏感、快速、准确的特点,为细菌感染的病原诊断提供新的科学依据.
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应用16S-23S rRNA基因区间对败血症常见菌的鉴定
目的建立检测不同菌种细菌的 16S-23S rRNA基因区间的特异图谱.方法应用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)、分子克隆及测序技术,对临床常见的代表20个属26个种的标准菌株及相应的临床分离菌株共61株进行PCR扩增,同时对临床标本进行培养并与PCR-RFLP比较,探讨其在临床应用中的价值.结果 26株不同的标准菌株行PCR扩增后,分别出现1条带,2条带,3条带及多条带的不同DNA 图谱,其敏感性为2.5 CFU,与人类基因组DNA、真菌及病毒无交叉反应.其中14种菌经PCR扩增即可区分,另10种经Hinf I或Alu I 酶切后才能区分.肺炎克雷伯菌与坚韧肠球菌间的差异在第779位碱基上不同,Xma Ⅲ酶能进行区别.临床42例血培养15例阳性,阳性率35.7%;而PCR阳性27例,阳性率达64.3%,其阳性率明显高于血培养(P<0.01).6例脑脊液标本中1例培养为表皮葡萄球菌,其PCR也阳性,2例培养阴性标本,其PCR也阳性,经图谱分析为葡萄球菌,1例培养为新型隐球菌的脑脊液标本PCR检测为阴性.另2例PCR及培养均阴性.结论建立了PCR加RFLP技术快速检测细菌16S-23S rRNA基因区间的方法,进一步为临床细菌感染的病原诊断提供了新的科学依据.
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16S-23S rRNA基因区间细菌鉴定实验研究
目的:探讨16S-23S rRNA基因区间对细菌鉴定的应用.方法:以16S-23S rRNA基因区间为靶序列设计引物,采用聚合酶链反应检测标准菌株及临床菌株DNA.结果:对27株代表27个菌种的标准菌株进行PCR扩增,分别出现不同的DNA图谱,该图谱能直接或经核酸内切酶处理后用于细菌分类,敏感性可达2.5 CFU/ml的细菌,与人外周血白细胞DNA和真菌及病毒无交叉.32株临床细菌标本均扩增出与相应标准菌株一致的图谱.结论:16S-23S rRNA基因区间PCR扩增技术检测细菌,具有敏感、特异、快速、准确的优点,为临床败血症病原的快速诊断提供了新的方法.
关键词： 细菌/遗传学 基因rRNA 聚合酶链反应 16S-23S rRNA基因
