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针康法对脑缺血大鼠神经功能及缺血半暗区皮层细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 观察针康法对脑缺血大鼠神经功能及缺血半暗区cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-3和细胞凋亡抑制蛋白1 (cIAPl)表达的影响.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠90只,随机分为假手术组、模型组、针刺组、康复组和针康组,每组再分为3d、7d和14d亚组,每个亚组6只.后四组采用改良Koizumi线栓法制备脑缺血模型.假手术组和模型组不予治疗,针刺组行头穴丛刺治疗,康复组行跑台康复训练,针康组同时进行以上两种治疗.预定时间点采用改良神经功能缺损评分(mNSS)、转棒测试进行评定,Western blotting检测脑缺血半暗区cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-3、cIAP1蛋白表达.结果 术后各时间点,与模型组比较,各治疗组mNSS评分均降低(P＜0.05),转棒上停留时间均延长(P＜0.05),cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-3蛋白表达均下降(P＜0.05),cIAP1蛋白表达均上调(P＜0.05);术后7d、14d,与针刺组、康复组比较,针康组mNSS评分进一步降低(P＜0.05),转棒上停留时间进一步延长(P＜0.05),cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-3蛋白表达进一步下调(P＜0.05),cIAPI蛋白表达进一步上调(P＜0.05).结论 针康法能改善脑缺血大鼠神经功能,促进运动功能恢复,优于单纯针刺、康复训练,可能与抑制caspase-8、aspase-3蛋白活化,促进cIAP1蛋白表达,从而抑制caspases介导的细胞凋亡级联反应有关.
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c-IAP1在食管鳞癌中的表达及其对化疗敏感性的影响
目的:探讨食管鳞癌细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)表达与化疗敏感性的相关性.方法:食管鳞癌组织芯片免疫组织化学染色,分析食管鳞癌组织及其配对癌旁食管上皮中c-IAP1的表达和定位及其与肿瘤,临床分级的关系.免疫印迹分析食管癌细胞C-IAP1和Smac表达,用RNA干扰技术敲降Smac表达,MTT法检测细胞对化疗药物敏感性的影响.统计分析采用卡方检验.结果:与癌旁食管上皮(54%,28/52)相比,c-IAP1在食管癌组织中高表达(67%,35/52),但与肿瘤病理分级、年龄和}生别无关.c-IAP1定位于组织细胞质和细胞核,在46%(24/52)的肿瘤组织中,细胞质c-IAP1表达水平显著高于配对癌旁食管上皮4%(2/52),具有统计学意义(P＜0.001).食管癌EC0156、KYSE510、KYSE30、KYSE1 80和KYSE170细胞普遍表达c-IAP1,其中KYSE170细胞表达高.经RNA干扰敲降Smac分子,可显著降低KYSE170细胞对化疗药物的敏感性.结论:c-IAP1蛋白在食管癌组织细胞质中表达率高,经化疗药物处理后,Smac介导c-IAP1降解,增加了食管癌细胞对化疗药物的敏感性,c-IAP1在调控食管癌化疗敏感性中发挥重要作用.
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沉默cIAP-1基因对肝癌SMMC-7721细胞放疗敏感性的影响
目的 探讨细胞凋亡抑制蛋白1(cIAP-1)对肝癌SMMC-7721细胞放疗敏感性的影响.方法 首先构建特异性沉默cIAP-1基因的pGCsi-H1-shRNA载体;然后通过CCK8试验、蛋白印迹检测(Western blot)、实时定量-PCR(qRT-PCR)、流式细胞仪和凋亡检测等方法分析照射处理后细胞活性、细胞周期以及细胞凋亡的变化.结果 分别在不同照射剂量(1 Gy、4 Gy、7 Gy、10 Gy)条件下检测肝癌SMMC-7721细胞24h细胞增殖率.与对照组(pGCsi-H1-control)比较,沉默cIAP-1基因细胞组(pGCsi-H1-shRNA)在各个照射剂量条件下细胞增殖率均明显降低,并且存在照射剂量依赖性(P＜0.05).与未照射处理组比较,照射处理组SMMC-7721细胞明显阻滞在G1/G0期(P＜0.01),处于S期细胞比例也明显降低(P＜0.01).与对照组比较,沉默clAP-1基因组细胞周期明显阻滞在G1/G0期(P＜0.05),沉默cIAP-1基因组细胞周期凋亡百分比显著增加(P＜0.05).结论 沉默cIAP-1表达可提高肝癌对放疗的敏感性,并能协同放疗抑制肝癌细胞的增殖率.
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c-IAP1蛋白与肺癌细胞辐射敏感性关系研究
目的 探讨细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)水平与肺癌细胞辐射敏感性间的关系.方法 采用噻唑蓝(MTT)和细胞克隆形成实验检测6种人肺癌细胞系(A549、H460、H1299、H358、HCC827、H1650)的存活率和增殖水平;彗星实验检测辐射对肺癌细胞的DNA损伤效应;Western Blot和实时定量PCR分别测定c-IAP1蛋白水平及其mRNA表达.结果 MTT和克隆形成实验结果表明,不同肺癌细胞的辐射敏感性亦不同,其中H358和H460细胞的辐射敏感性强,H1650和HCC827细胞次之,而H1299和A549细胞弱.彗星实验结果显示,经辐射处理后,6种肺癌细胞均受到不同程度的DNA损伤,且H358细胞受损明显.Western Blot和实时定量PCR结果证明,c-IAP1蛋白水平与肺癌细胞的辐射敏感性呈负相关,c-IAP1蛋白水平越高,细胞的辐射敏感性越弱,且敏感性亦受线粒体促凋亡蛋白(Smac)蛋白水平的影响.结论 c-IAP1是肺癌细胞保持高辐射抗性的原因之一,此结论对于肿瘤细胞的耐辐射机制和肿瘤辐射增敏研究具有重要的现实意义.
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沉默cIAP-1基因表达对胰腺癌细胞放疗敏感性的影响
目的 观察沉默细胞凋亡抑制蛋白1(cIAP-1)基因表达对胰腺癌细胞HS766T放疗敏感性的影响.方法 将HS766T细胞随机分为对照组、空载组和观察组,观察组和空载组分别转染沉默cIAP-1基因质粒cIAP-1-RNAi和阴性基因质粒NC-RNAi,对照组不转染处理,分别采用Real-time PCR法和Western blotting法检测细胞中的cIAP-1 mRNA及蛋白;取观察组cIAP-1稳定沉默HS766T细胞及其对照组HS766T细胞,用CCK-8 法测算2、4、6、8 Gy X线照射24 h的细胞存活率,流式细胞仪测算6 Gy X线照射12、24、48 h的细胞凋亡率.结果 观察组较空载组和对照组cIAP-1 mRNA 及蛋白相对表达量降低(P均<0.05),空载组和对照组cIAP-1 mRNA 及蛋白相对表达量无统计学差异.随着照射剂量增加,细胞存活率呈下降趋势;同等照射剂量下,观察组细胞存活率低于空载组和对照组(P均<0.05),空载组和对照组细胞存活率无统计学差异.随着照射时间的延长,各组细胞凋亡率呈现递增趋势;同一时点内,观察组细胞凋亡率高于空载组和对照组(P均<0.05),空载组和对照组细胞凋亡率无统计学差异.结论 沉默cIAP-1基因表达,可抑制胰腺癌细胞存活、促进细胞凋亡,增强胰腺癌细胞的放疗敏感性.
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新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时细胞凋亡抑制蛋白1的变化
目的探讨在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)细胞凋亡抑制蛋白1(cIAP1)的变化.方法建立新生大鼠HIBD动物模型,采用RT-PCR技术检测缺氧缺血(HI)后不同时间点缺血侧脑组织中cIAP1基因表达的变化.结果正常组中有cIAP1基因表达,HI组cIAP1基因表达明显下调,且随HI后时间的延长,cIAPI基因表达在HI后6 h开始下调,24 h下调明显,48～72 h有所回升.结论脑缺氧缺血引起的神经细胞凋亡可能与cIAP1基因表达下调有关.
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地塞米松对脑缺氧缺血新生大鼠细胞凋亡抑制蛋白1 mRNA及Caspase-3活性的影响
目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后细胞凋亡抑制蛋白1(cIAP1)基因表达、Caspase-3活性的变化及地塞米松(DEX)对其影响,阐明DEX预处理对HIBD神经保护的可能机制.方法 7日龄SD大鼠24只,随机分成DEX组、9 g/L盐水组(NS组)、HIBD组、健康对照组.DEX、NS、HIBD组大鼠采用Rice方法制备HIBD模型.DEX和NS组在缺氧缺血前12 h腹腔内分别注射DEX、等量9 g/L盐水.取HIBD动物模型实验侧大脑半球,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测cIAP1基因表达,比色法测定Caspase-3活性.结果 与健康对照组比较,HIBD组大鼠cIAP1基因表达明显下降(P＜0.01),Caspase-3活性明显上升(P＜0.01).与HIBD组比较,DEX组cIAP1基因表达明显上升,而Caspase-3活性明显下降.结论 脑缺氧缺血可导致cIAP1基因表达下调,Caspase-3活性升高.DEX能通过上调cIAP1基因表达,抑制Caspase-3活性,抑制细胞凋亡,起到神经保护作用.
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TFPI基因转染对血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白的调控
目的 研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因转染对大鼠血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白(IAP)表达的影响,探讨TFPI诱导细胞凋亡的可能机制.方法 将含有人TFPI基因的重组腺病毒或含β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的重组腺病毒或DMEM在体外分别转染大鼠血管平滑肌细胞,用ELISA方法测定转染后细胞中TFPI蛋白的表达水平,用RT-PCR方法测定基因转染后不同时间点细胞中c-IAP1mRNA的表达,用Western-blot方法检测基因转染后不同时间点细胞中survivin的表达.结果 基因转染后1天在血管平滑肌细胞中即可检测到TFPI蛋白表达,峰值出现在转染后第3天;基因转染后3天和7天,TFPI组c-IAP1 mRNA的表达与对照组相比明显减少(P＜0.05);基因转染后3、5、7天,TFPI组survivin的表达与对照组相比明显减少(P＜0.05),且具有明显的时间依赖性.结论 TFPI可能通过抑制IAP的表达来发挥诱导平滑肌细胞凋亡的作用,从而抑制冠状动脉介入治疗后再狭窄发生.
