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小鼠CD4+记忆性T淋巴细胞的产生、纯化、鉴定及皮肤移植的检测
目的 建立CD4+记忆T细胞(memory T lymphocytes,Tm)的免疫磁珠分离方法,并检测其体外部分功能.方法 借助小鼠皮肤移植模型,制备受鼠脾细胞悬液,运用免疫磁珠方法分离CD4+Tm,用台盼蓝染色法和流式细胞仪检测分选所得细胞的活性和纯度,并在体外用ELISPOT技术检测其不同抗原刺激时IFN-γ活性分泌频数.结果 小鼠皮肤移植皮片平均存活时间为(13.6±0.9)d;分离所得CD4+Tm的活细胞百分率为(98.4±0.7)%;流式细胞术检测表型,其中CD4+CD8-细胞比例占(96.06±2.49)%,CD44+CD62L-细胞比例占(94.13±2.36)%,CD4+CCR7-细胞比例占(96.39±1.93)%;在无刺激物作用或者大鼠脾细胞、供体脾细胞、刀豆素A等刺激物作用时,IFN-γ活性分泌频数分别为3±1、6±3、339±14、108±9个/104,差异有统计学意义.结论 通过小鼠皮肤移植模型及免疫磁性分离技术,可制备高纯度无菌的CD4+Tm,其细胞活力不受影响,作用具有良好的供体特异性.这为深入研究Tm在移植物免疫方面的作用提供了技术资料.
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CD34+造血细胞免疫磁性高效富集仪CMSI-100的研制及应用
根据免疫磁性分离原理,选用能产生高磁场强的磁性材料钕铁硼,其核心是将其设计成由低碳钢间隔的4块钕铁硼,并且使每块钕铁硼的规格必须限制在3.5cm×2.0cm×0.3cm,以确保每块钕铁硼平面所具有的磁场强度平均可达2 700高斯.当所切磨的钕铁硼规格达不到该标准时,由此产生的磁场强度>2 700高斯或<2 700高斯, 对CD34+造血细胞的分离效果均不理想.经对人正常骨髓CD34+造血细胞的免疫磁性分离证实,采用CMSI-100富集后的CD34+造血细胞纯度平均＞90%,细胞活力＞95%,达到国际上好水平,其性能完全可与国际通用先进的IsolexTM50磁性分离系统相媲美.
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早期肺癌外周血中肿瘤细胞的检测及其临床意义探讨
目的探讨检测早期肺癌循环肿瘤细胞(CTCs)的可行性及临床意义.方法应用免疫磁性分离(IMS)+免疫细胞化学(ICC)法及RT-PCR法检测3组标本(A组:早期肺癌组,15例;B组:肺部良性病变组,20例;C组:健康志愿者组,20例)的CTCs,并对A组患者进行了6～9个月的随访.结果应用IMS+ICC法检测,A组有5例阳性,B、C组均为阴性;应用巢式RT-PCR法检测,A组7例、B组8例、C组6例检测为阳性.A组患者随访中有2例术前及术后检测均为阳性的患者发生了复发.结论 IMS+ICC法是检测早期肺癌CTCs的敏感方法;早期肺癌患者CTCs的检出可能与临床预后有一定的关系.
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免疫磁性分离法检测水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的影响因素
隐孢子虫和贾第鞭毛虫是两种严重危害水质安全的病原性原生动物.美国国家环保总局(USEPA)制定并发布的1623方法是目前国际上为常用的检测标准方法,其中,免疫磁性分离(IMS)是保证检测过程特异性的关键步骤.该文总结了IMS过程中回收率的主要影响因素,包括待测样品中的颗粒物质和溶解性物质,隐孢子虫和贾第鞭毛虫的浓度、育龄和活性等特征,以及磁珠添加比例、反应时间、反应体积、解离方式等操作参数.分析认为,将1623方法应用于环境样品或污水再生处理系统时,复杂的水质成分会显著影响IMS过程的回收效果,但可通过适当改进操作参数对IMS过程进行优化.
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O157:H7大肠埃希菌的检测方法及其进展
随着对O157:H7研究的不断深入及免疫学、分子生物学等相关学科的快速发展,检测O157:H7的方法不断获得改进和提高.在传统检测方法的基础上更加敏感、特异和快速的检测方法不断出现,对预防和阻断O157:H7的传播发挥着越来越重要的作用.本文从免疫磁性分离、改进的聚合酶链反应及芯片技术等方面介绍O157:H7的检测方法及其各自特点.
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食品污染产单核李斯特菌不同检测方法学评估
目的 评价以不同方法检测食品中污染产单核李斯特菌(LMO)效果,并对其检测方法进行优化.方法 同时用国标法、改良国标法、改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法对深圳市2004～2006年食品样品进行LMO分离鉴定并进行比较.结果 228份样品中8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性,其中6份LMO细菌培养阳性.国标法、改良国标法,改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法都能检出LMO,检出率分别为2.63%、2.63%、3.50%、2.63%.深圳市食品中LMO的污染率为2.63%(国标法),速食类冻品污染率为12.8%(国标法).结论 荧光PCR法检出率高,将检测时间由原来的至少4～5d缩短至1d,可用于食品污染LMO状况调查的初筛和食物中毒的快速诊断;国标法与改良国标法的检出率相等,而后者的操作更方便.免疫磁性分离法的检出率低.
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小鼠CD4+CD25+T细胞的分离、鉴定和体外功能的检测
目的建立CD4+CD25+T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能.方法分离C57BL/6小鼠和Balb/c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4+CD25+T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能.结果MACS分选法分选出的CD4+CD25+T细胞活性>97%,纯度>95%;此方法获得的CD4+CD25+T细胞在体外不增殖,经丝裂原活化后可以抑制同品系小鼠和异品系小鼠的CD4+CD25-T细胞增殖,这种抑制作用具有剂量依赖性.结论MACS法可简单迅速分选出高纯度无菌CD4+CD25+T细胞,且不影响细胞活力.CD4+CD25+T调节性细胞在体外具有免疫无能和免疫抑制作用;丝裂原活化的该细胞免疫抑制功能具有剂量依赖性,但不具有抗原特异性.
关键词： CD4+CD25+T细胞 免疫磁性分离 AlamarBlue 免疫无能 免疫抑制
