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同时失活HtrA和ClpP对变异链球菌适应性耐酸能力的影响
变异链球菌的适应耐酸能力是它适应牙菌斑中动态变化酸性环境的关键致龋机制.本实验前期构建变异链球菌htrA-clpP双基因缺陷株(简称htrA-clpP 缺陷株),来探究HtrA和ClpP两种蛋白在变异链球菌耐酸性过程中相互作用机制.将标准株和htrA -clpP缺陷株常规复苏,收集细菌沉淀物用生理盐水适当稀释成菌液备用,用TPY液体培养液分别对两种菌液进行稀释,培养至对数中期后得到细菌沉淀物分成两份,分别加入与上清液等体积的pH5.5(预酸化处理)或7.0 TPY液体培养基中培养5h后收集4种细菌沉淀物,将其加入等体积pH3.0 TPY液体培养液中,在0、1.0、2.0、3.0h取菌液进行逐步稀释,在TPY固体培养基计数,计算生存率,实验步骤重复3次.
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HtrA与子痫前期相关性的研究进展
子痫前期（preeclampsia）是妊娠期特有的疾病，目前仍是重要的公共卫生问题，是发展中国家孕产妇死亡的主要原因之一。研究表明子痫前期与细胞凋亡、血管痉挛、凝血系统激活、炎症反应等密切相关，其病理变化起始于胎盘浅着床和胎盘血管重铸障碍，导致胎盘组织的缺血缺氧，引起子痫前期的发生。HtrA（high temperature requirement A）系丝氨酸蛋白酶家族，该蛋白家族在细胞热休克、氧化应激、炎症、缺血再灌注和肿瘤等应激条件下，降解细胞胞质内错误折叠的蛋白质，参与细胞凋亡、关节炎、胚胎形成、神经变性和神经肌肉障碍以及癌症等的病理生理过程，研究表明其亚型与子痫前期密切相关。总结近年来与子痫前期有关的HtrA的研究进展及其介导的调控网络，对进一步了解子痫前期的发病机制及提供新的治疗途径有重要意义。
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htrA、clpP基因缺失对变异链球菌生长影响的初步观察
目的:研究htrA、clpP基因缺失对变异链球菌生长情况的影响.方法:采用浊度法测定变异链球菌标准株、htrA单基因缺陷株、clpP单基因缺陷株及htrA-clpP双基因缺陷株生长6h中每小时的吸光度,采用MTT实验测定4种菌株的不同时间甲臜吸光度变化情况并探究其与平板计数活菌量之间的关系.结果:在正常营养条件下,浊度法1～6h及MTT法2、4h及6h变异链球菌标准株的生长快于htrA、htrA-clpP缺陷株(P＜0.01)；浊度法1～6 h及MTT法1～3hclpP缺陷株生长快于其他两种缺陷株(P＜0.01)；变异链球菌标准株、htrA缺陷株及htrA-clpP缺陷株1～4h、clpP缺陷株1～3 h甲臜吸光度与活菌量呈正相关(r分别为0.860、0.761、0.790及0.773,P＜0.05或P＜0.01).结论:htrA、clpP 单独或同时缺失可抑制变异链球菌的生长,MTF实验可在一定时间和一定菌数范围内反映标准株与3种缺陷株的活菌数.
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Three-dimensional structures of virulence proteins of Legionella establish targets for new antibacterials
Legionella pneumophila,the causative agent of Legionnaires' disease,has been recognized as a major health problem responsible for an estimated number of 15 000-30 000 cases of severe pneumonia per year in Germany alone.Despite of the high clinical relevance,many aspects of the intracellular life cycle of Legionella,especially details on interactions with host cells,are not well understood.Structural information on virulence proteins helps unravel basal pathogenicity mechanisms and is a prerequisite for the rational development of effective drug molecules.Here we discuss structures of three important virulence proteins ofLegionella that have been determined in our laboratory.The structure of the macrophage infectivity potentiator (Mip) protein of Legionella pneumophila is the first of a novel subgroup within the family of FK506-binding protein (FKBP) peptidyl-prolyl cis/trans isomerases.On the basis of the Mip structure,promising antibacterial agents are being designed.Recently,structures of two equally exciting Legionella proteins have been reported.The ferrous iron transport protein FeoB is a transmembrane protein responsible for Fe2+ aquisition after entry of the pathogen into the host cell.The structure of the cytoplasmic domain of FeoB provides insights into the family of prokaryotic G proteins and allows a detailed comparison with structures of related FeoBs.Furthermore,the characterization of DegQ,a periplasmatic chaperone-protease involved in protein quality control represents an intriguing example of how enzymatic activity is regulated by oligomerization as well as by an intrinsic loop activation cascade,depending on subtle conformational rearrangements.
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乳牙高毒力变异链球菌 HtrA 缺陷株的构建及转化力的研究
目的：构建乳牙高毒力变异链球菌 HtrA 基因缺陷株（简称 HtrA 缺陷株），比较 HtrA 缺陷株和高毒力株的转化力。方法：将乳牙变异链球菌 HtrA 高毒力菌株复苏，厌氧培养，应用基因同源重组技术进行 HtrA基因缺陷株的构建。以含有 HtrA 基因的变异链球菌标准株 DNA 作为参照进行 PCR 鉴定。将乳牙变异链球菌HtrA 高毒力株与 HtrA 缺陷菌株分别在 TPY 液体培养基中增菌，厌氧培养，以菌落计数来比较二者的转化力。结果：凝胶自动成像分析结果显示，HtrA 缺陷株在500 bp 未出现 HtrA 基因片段的特异性电泳条带，而在710、1200、1100 bp 处分别出现了红霉素抗性基因片段、HtrA 基因上游引物序列合并红霉素抗性基因引物 HtrAUF／P1以及 HtrA 基因下游引物序列合并红霉素抗性基因引物 HtrAUR／P2的特异性条带。而 HtrA 高毒力株的表现则相反。转化力检测结果显示：6、9、12、24、48 h，高毒力株的菌落数量均明显多于 HtrA 基因缺陷株（P ＜0．05）。结论：通过基因重组等方法可以将变异链球菌高毒力株中的 HtrA 基因敲除，构建高毒力变异链球菌 HtrA 基因缺陷株；变异链球菌高毒力株的转化力高于 HtrA 基因缺陷株，提示 HtrA 与变异链球菌的致龋性有关。
