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PY20抗体检测慢性髓系白血病细胞内酪氨酸磷酸水平的临床应用
本研究探讨PY20抗酪氨酸磷酸单克隆抗体检测在慢性髓系白血病(CML)诊断中的特异性及其临床应用的可能性.采用抗PY20和CD45抗体标记,通过流式细胞术检测28例初诊CML患者治疗前后PY20阳性率,比较其与her-abl融合基因及Ph染色体结果的符合率.另外,随访监测7例异基因造血干细胞移植后CML患者的PY20阳性率、bet-abl融合基因及Ph染色体的变化.结果表明:①528例初诊CML患者PY20在慢性期、加速期、急变期表达率分别为(40.31±1.22)%、(77.28±1.14)%,(78.12±1.32)%.CML慢性期PY20表达率低于加速期或急变期(P<0.05),加速期和急变期之间无显著差异(P>0.05).②28例初诊CML患者经治疗后获得CR、PR、NR患者的PY20阳性率分别为(15.56±1.51)%、(38.73±2.31)%、(60.43%±2.04)%.CR患者PY20阳性率明显低于PR及NR的患者(P<0.05).PR患者低于NR患者(P<0.05). ③初诊患者PY20与RT-PCR bcr-abl检测的阳性符合率为92.31%,阴性符合率为95.45%;PY20与Ph染色体检测的阳性符合率为88.46%,阴性符合率为95.46%.④7例患者移植后Ph染色体均为阴性,移植后bcr-abl融合基因持续阴性5例,持续阳性2例.此7例PY20细胞表达均为阴性.结论:①流式细胞术检测CML细胞酪氨酸磷酸化水平阳性率有较好的特异性及敏感性,可应用于CML的早期、快速辅助诊断.②PY20阳性率对CML分期、病情监测及疗效判断有一定的临床指导意义.③流式细胞术、RT-PCR及染色体核型分析能相互补充提高CML的诊断率.
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PY20抗体检测bcr-abl阳性细胞内磷酸化酪氨酸的临床应用
目的探讨酪氨酸磷酸化抗体PY20检测bcr-abl阳性细胞的特异性及其可能的临床应用.方法采用多色直接免疫荧光标记方法,同时标记膜CD45和胞质PY20抗体,应用流式细胞术检测bcr-abl阳性细胞系(K562、MEG-01)和阴性细胞系(Jurkat、MCF-7)的酪氨酸磷酸化水平.并利用bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化特异性阻断剂伊马替尼作用K562细胞和MEG-01细胞,观察PY20抗体的特异性.检测了49例白血病患者和3名正常人的骨髓细胞,包括慢性粒细胞白血病(CML)、Ph+急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)、Ph-ALL、急性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病.PY20+细胞占白血病细胞群的10%以上定义为阳性.以阳性细胞的平均荧光强度(MFI)表示其酪氨酸磷酸化水平.结果bcr-abl阳性细胞系、10例初诊CML和8例Ph+ALL患者PY20抗体均为阳性,而bcr-abl阴性细胞系、20例bcr-abl阴性白血病患者和3名正常人PY20抗体均为阴性.伊马替尼作用后K562细胞和MEG-01细胞的酪氨酸磷酸化水平随作用时间的延长逐渐下降.10例初诊和9例伊马替尼治疗有效的CML患者PY20+细胞占有核细胞的比例分别为(54.20±19.82)%和(14.84±6.17)%(P《0.05),而2例伊马替尼耐药者PY20+细胞比例分别为64.3%和57.2%.2例伊马替尼耐药患者和9例伊马替尼治疗有效患者的CML细胞的MFI分别为99.42±4.87和46.41±4.67(P《0.01).结论酪氨酸磷酸化抗体PY20对bcr-abl阳性细胞具有相对特异性,有可能应用于bcr-abl阳性疾病如CML和Ph+ALL的早期快速辅助诊断,同时有可能作为判断该类疾病对伊马替尼敏感性的一个辅助指标.
