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AML1-ETO阳性急性髓系白血病患者c-kit突变及其临床意义
本研究探讨AML1-ETO融合基因阳性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者c-kit突变的发生情况及其临床意义.采用PCR和直接测序法检测31例AML1-ETO阳性AML患者c-kit基因17外显子突变的发生情况,并分析c-kit基因突变与患者的临床、实验室特征以及疗效的关系.结果表明:31例患者中14例检测到c-kit突变,突变率为45.16％,突变组男性患者的比例为71.43％、初诊时白细胞计数＞10×109/L患者的比例为78.57％和伴有髓外浸润患者的比例为21.43％,均明显高于无突变组(29.41％、41.18％、0％,P=0.020,0.036,0.045),两组患者的年龄和骨髓原始细胞比例无明显差异(P=0.437和0.510).c-kit突变和无突变组化疗完全缓解(CR)率(64.29％:80％)和复发率(58.33％:21.43％)的差异无统计学意义(P=0.344和0.054),而死亡率(57.14％)在c-kit突变组明显高于无突变组(20％,P=0.039).结论:AMLl-ETO阳性AML患者c-kit突变常见,突变患者预后差,常规检测c-kit突变对患者的危险度分层、预后评估和选择有效治疗方案有重要意义.
关键词： 急性髓系白血病 AML1-ETO融合基因 C-KIT突变 -
伴有性染色体丢失的t(8;21)急性髓系白血病实验室检测资料分析
目的探讨12例伴有性染色体丢失的t(8;21)急性髓系白血病患者的临床和生物学特征.方法结合临床、形态学,采用RHG显带、一组单抗、逆转录-聚合酶链反应等方法对其染色体、免疫分型和分子生物学等进行分析.结果本组病例大多有下述形态学改变:白血病细胞有核凹陷、近核浅染区、胞浆嗜碱性、伴有成熟分化和核浆发育不平衡等;有CD13、CD33表达抗原;经逆转录-聚合酶链反应检测均检出AML1-ETO融合基因转录本.结论性染色体丢失是t(8;21)急性髓系白血病常见的附加异常,主要和急性粒细胞白血病有关,具有独特的形态学、免疫学和临床特征.
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用定量多色荧光原位杂交检测t(8;21)急性髓系白血病的异质性及亚克隆间的进化关系
目的 用定量多色荧光原位杂交(QM-FISH)的方法检测t(8;21)急性髓系白血病(AML)中是否存在异质性亚克隆,及不同亚克隆之间在遗传学上的承继关系.方法 在UCSC Genome Bioinformatics数据库中定位检索含目的基因AML1、ETO、WT1、c-kit和p27的细菌人工染色体(BAC)克隆,用缺口平移的方法将荧光素染料标记的dUTP或dCTP连接到目的基因上制成五色FISH探针.白血病细胞低渗、固定后湿法滴片.将制备好的FISH探针杂交到患者标本上,经荧光显微镜采集荧光信号从而获得清晰稳定的多色图像.计数AML1-ETO阳性细胞中AML1-ETO融合基因及基因AML1、ETO、WT1、c-kit和p27的拷贝数.将各个基因拷贝数相同的细胞定义为同一亚克隆,统计同一患者标本中亚克隆的种类及比例,进而推测不同亚克隆之间的进化关系;比较配对的初诊、复发患者中优势亚克隆的演变,推测与白血病复发、耐药相关的基因异常.结果 共检测36例初诊的t(8;21)AML患者骨髓标本,1例与初诊患者配对的复发标本.在36例初诊患者中,4例(11.1％)具有AML1-ETO融合信号增加,3例(8.3％)有AML1信号增加,10例(27.8％)有AML1信号缺失,并且这种信号缺失具有性别差异,主要出现在男性患者中,4例(11.1％)有ETO信号增加,20例(55.6％)有WT1信号增加,15例(41.7％)有p27信号增加,14例(38.9％)有c-kit信号增加;28例(77.8％)可检测到异质性亚克隆,不同亚克隆之间呈线性或树状进化关系;1例复发病例标本与配对的初诊病例标本相比较,表现出明显的克隆演变,包括优势克隆比例改变及亚克隆的消失与新生.结论 t(8;21)AML的遗传学异常具有广泛异质性,亚克隆之间不仅具有承继关系,而且处于动态进化演变状态.
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AML1-ETO 融合基因对儿童急性髓系白血病 M2型预后的影响
目的：探讨 AML1-ETO 融合基因对急性髓系白血病 M2型患儿治疗效果及预后的影响。方法收集2006年至2012年于我院小儿血液病房首次确诊并进行治疗的48例急性髓系白血病 M2型患儿,经细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学分型后 AML1-ETO 融合基因阳性的患儿为 A 组(31例),AML1-ETO 融合基因阴性的患儿为 B 组(17例)。比较两组第一疗程完全缓解(complete remission, CR)率、第二疗程 CR 率、总 CR 率、无事件生存(event-free survival,EFS)、总体生存(overall survival,OS)和复发率等情况。并分析与 AML1-ETO 融合基因阳性患儿预后相关的因素。结果入选患儿中 A 组总 CR率为90.3％,B 组 CR 率为94.1％。A 组5年 EFS 为(60.9±9.6)％,B 组5年 EFS 为(25.5±11.0)％,A组5年 OS 为(69.3±8.6)％,B 组5年 OS 为(31.9±12.7)％,A、B 两组的 EFS、OS 比较差异有统计学意义。A、B 两组复发率分别为22.6％、58.8％。有无脾脏肿大、初诊时的白细胞计数、有无 CD56、CD71、第一疗程是否达到完全缓解及危险度分型、AML1-ETO 融合基因是否转阴与 AML1-ETO 阳性患儿预后有相关性。结论 AML1-ETO 融合基因是影响 AML-M2型患儿预后的良好因素。有无 CD56、CD71、第一疗程是否达到完全缓解及危险度分型、AML1-ETO 融合基因是否转阴与 AML1-ETO 阳性患儿预后有显著相关性。
关键词： 儿童急性髓系白血病M2型 AML1-ETO融合基因 预后 -
AML1-ETO转基因小鼠的建立及初步表型分析
目的:建立AML1-ETO融合基因转基因小鼠,在整体动物水平研究AML1-ETO融合蛋白在白血病发病中所起的作用.方法:构建hCG/AML1-ETO转基因质粒,通过显微注射将该质粒转入小鼠受精卵中,植入假孕母鼠输卵管,获得G0代转基因小鼠;用聚合酶链反应(PCR)方法检测融合基因的整合情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测融合基因的表达情况和组织表达谱.结果:PCR法共检出10只G0代转基因阳性小鼠,其中8个系均产下F1代小鼠,由此建立了8个AML1-ETO转基因小鼠系.RT-PCR法证实AML1-ETO融合基因在22系中稳定表达,但血常规、肝脏、脾脏等组织未见异常变化;对该系小鼠的组织表达谱检测表明,融合基因在肝脏、脾脏、心脏和肌肉组织存在不同程度的表达,但在脑组织中不表达.结论:AML1-ETO融合基因能在转基因小鼠的骨髓等组织中表达,但尚不足以引发白血病,推测其他致病基因在小鼠白血病的发生中也起一定作用.
关键词： AML1-ETO融合基因 转基因小鼠 白血病 -
急性髓系白血病患者AML1-ETO融合基因动态监测及分析
目的：总结分析急性髓系白血病（ AML）患者AML1-ETO融合基因表达水平的动态变化及动态监测的临床价值。方法选择2008年12月至2012年12月濮阳市人民医院收治的20例急性髓系白血病患者为研究对象，均经药物化疗进行诱导缓解、巩固治疗，在初诊时、诱导化疗结束时、复发时分别采集骨髓标本，利用RQ-PCR方法监测AML1-ETO融合基因的表达水平，总结分析AML1-ETO融合基因的表达水平与临床参数之间的相关性。结果20例患者在初诊时监测AML1-ETO表达水平在160%~650%，AML1-ETO表达水平与骨髓幼稚细胞比、性别、粘连、白细胞、血小板以及血红蛋白均无显著相关性（ P﹥0.05）。20例患者诱导结束时获得12份骨髓样本， AML1-ETO表达水平在130%~210%。随访中7例在巩固化疗之后血液学缓解，AML1-ETO表达水平下降至10-2水平；3例在巩固化疗结束后3个月时经骨髓细胞形态学诊断为复发，AML1-ETO表达水平在300%~400%，经DA化疗方案化疗后完全缓解；2例患者持续未缓解，其AML1-ETO表达水平在410%以上，且染色体高度异常改变。结论 AML1-ETO融合基因的表达水平直接与病情有密切关系，动态监测AML1-ETO融合基因的表达水平对疾病分子水平诊断和疗效判断均有重要指导价值。
关键词： 急性髓系白血病 AML1-ETO融合基因 表达水平 动态监测 -
定量监测AML1-ETO融合基因表达水平在急性髓系白血病治疗中的临床价值
目的 探讨急性髓系白血病治疗过程中AML1-ETO融合基因表达水平的变化规律.方法 采用基于TaqMan探针的RQ-PCR技术,以AML1-ETO融合基因为靶分子,定量监测15例急性髓系白血病患者初诊和随访时融合基因的表达水平,分析该基因表达水平的变化与临床特征的相关性.结果 患者初诊时,AML1-ETO融合基因的表达水平为198%～788%,该基因的表达水平与相应的骨髓幼稚细胞比例及患者年龄、性别、初诊外周血白细胞计数、血红蛋白量和血小板计数之间均无相关性(P＞0.05);长期缓解(＞1年)患者该基因表达水平降至0.001%～0.01%;复发患者该基因表达水平较缓解时升高,并提前于骨髓细胞形态学复发;AML1-ETO融合基因表达水平大于0,并不能提示临床复发.结论 应用RQ-PCR技术对AML1-ETO融合基因进行定量监测,是判断和追踪该基因阳性的白血病患者疗效的良好指标,可以较好地反映患者微小残留病的动态变化.
关键词： 急性髓系白血病 AML1-ETO融合基因 定量PCR 微小残留病 -
AML1-ETO融合蛋白致细胞转化的分子机制
急性髓系白血病(AML)-M2b通过其特征性染色体易位t (8;21)而致AML1-ETO融合蛋白,该融合蛋白主要通过抑制AML1靶基因的活化致细胞转化,它除竞争性地抑制AML1靶基因的活化外,还通过募集核共抑制复合物主动地抑制AML1靶基因的基础转录.此外,它还通过蛋白-蛋白相互作用影响非AML1靶基因的功能,干扰细胞正常的增殖与分化而致细胞转化.AML1-ETO融合蛋白的转化潜力是有限的,白血病的发病除了它外尚需其它基因突变事件的参与.
关键词： 急性髓系白血病 AML1-ETO融合基因 细胞转化 -
WT1基因和AML1-ETO融合基因表达水平在儿童急性髓细胞白血病微小残留病监测中的临床意义
目的 探讨WT1基因和AML1-ETO融合基因相对表达水平在监测儿童急性髓细胞白血病(AML)微小残留病(MRD)和预测AML复发中的诊断价值.方法 选择2007年5月至2015年3月,四川省人民医院儿科收治的13例初治AML1-ETO融合基因阳性AML患儿和本科同期收治的15例初治白血病融合基因阴性AML患儿为研究对象,分别纳入融合基因阳性组(n=13)和融合基因阴性组(n=15).采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术,同时动态监测初治及随访期融合基因阳性组患儿骨髓标本的WT1基因和AML1-ETO融合基因相对表达水平,以及监测融合基因阴性组患儿的初治及随访期骨髓标本的WT1基因相对表达水平.采用SPSS统计软件对WT1基因和AML1-ETO融合基因相对表达水平进行相关性分析;计算并比较MRD预测AML复发的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比及阴性似然比;采用Kaplan-Meier法进行组间无复发生存(RFS)率比较,评估MRD对AML复发的预测能力.本研究遵循的程序符合四川省人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员批准,征得受试对象及监护人的知情同意.结果 ①共收集融合基因阳性组患儿初治和随访期的骨髓标本83份,其WT1基因和AML1-ETO融合基因相对表达水平呈显著正相关关系(R2=0.874,P＜0.001),拟合直线回归方程为y=0.07+2.294x.②两组患儿初诊、缓解及复发时,AML1-ETO融合基因及WT1基因相对表达水平比较,差异均无统计学意义(H=1.788,1.846,1.853;P＞0.05).③首次诱导缓解后,融合基因阳性组患儿AML1-ETO融合基因预测AML复发的诊断指标中,敏感度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均高,分别为85.7％,76.9％,75.0％和80.0％;阴性似然比低,为0.29.融合基因阴性组患儿WT1基因预测AML复发的特异度高,为71.4％.④首次诱导缓解后,融合基因阳性组13例患儿中,8例AML1-ETO融合基因相对表达水平＞0.01,其中6例复发,复发率为75.0％;5例AML1-ETO融合基因相对表达水平＜0.01,其中1例复发,复发率为20.0％;二者复发率比较,差异有统计学意义(x2=13.0,P=0.000).至随访截止时间,AML1-ETO融合基因相对表达水平＞0.01的患儿RFS率显著低于基因相对表达水平＜0.01患儿,且差异有统计学意义(P=0.001).⑤首次诱导缓解后,融合基因阴性组15例患儿中,8例WT1基因相对表达水平＞0.01,其中6例复发,复发率为75.0％;7例WT1基因相对表达水平＜0.01,其中1例复发,复发率为14.3％,二者复发率比较,差异有统计学意义(x2=15.0,P=0.000).至随访截止时间,WT1基因相对表达水平＞0.01患儿RFS率显著低于相对表达水平＜0.01的患儿,且差异有统计学意义(P=0.004).结论 AML1-ETO融合基因适合监测融合基因阳性患儿的MRD.WT1基因更适合作为无特殊分子异常的AML患儿检测MRD和预测复发的指标.WT1和AML1-ETO基因表达水平显著升高预示AML复发.
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四川地区AML1-ETO融合基因与急性髓系白血病临床特征的相关性及预后因素分析
目的 分析四川地区AML1-E TO融合基因与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)临床特征的相关性,探讨AML-M2型患者预后影响因素.方法 选取AML1-ETO融合基因阳性AML-M2患者94例与AML1-ETO融合基因阴性AML-M2患者51例,回顾性比较分析其临床特征、治疗反应,并随访观察两组患者的预后情况.结果与AML1-ETO融合基因阴性AML-M2患者相比,AML1-ETO融合基因阳性AML-M2患者的临床症状差异无统计学意义(P＞0.05),主要以贫血、发热、出血为主;两组患者的红细胞(RBC)、血小板(PLT)、粒红比、粒系(NC)％、CD34、人类白细胞DR抗原(HLA-DR)、CD56、CD19差异有统计学意义(P＜0.05),数据的中位数值除RBC、PLT偏低外,其余均偏高;两组患者疗效与生存曲线分布差异无统计学意义(P＞0.05);在AML-M2患者的长期生存影响因素分析中,CD56、骨髓原粒细胞百分比是长期生存的不利因素,完全缓解因素对长期生存有利.结论 四川地区AML1-ETO融合基因阳性AML-M2人群与阴性人群相比,临床症状无特异,除部分血液、骨髓、流式实验数据有差异外,其他临床特征相似.两组患者的生存分析和预后也无明显差异,AML-M2疗效和预后影响因素多,准确评价AML1-ETO的预后诊断作用,应采用分层分析.
关键词： 急性髓系白血病 预后 AML1-ETO融合基因 -
定量监测AML1-ETO融合基因表达水平在急性髓系白血病治疗中的临床价值
目的分析定量检测AML1-ETO融合基因表达水平在急性髓系白血病治疗中的临床价值。方法选取20例急性髓系白血病患者，将AML-1ETO融合基因作为靶分子测量患者初诊及随访时融合基因水平，分析ANL1-ETO基因水平变化在急性髓系白血病治疗中的临床价值。结果初诊时AML1-ETO融合基因表达水平与骨髓幼稚细胞比例、年龄、性别无相关性，长期缓解患者的AML1-ETO融合基因表达水平处于0.001%~0.01%。表达水平显著升高或表达水平>0.01%可提示可能存在复发，检测到AML1-ETO融合基因不能作为预测复发的指标。结论定量检测急性髓系白血病患者AML1-ETO融合基因表达水平可判断患者的预后状况和病情变化，可反映微小残留病的动态变化。
关键词： AML1-ETO融合基因 急性髓系白血病 RQ-PCR
