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抑癌基因 DLC-1作为非小细胞肺癌研究新靶点的进展
肺癌是严重威胁人类健康且预后差的恶性肿瘤之一，近年来由于肺癌危险因素的改变及人口老龄化等多重作用下，我国肺癌发病率及病死率呈持续增高趋势。据世界卫生组织（ WHO ）预测，到2025年，我国每年新增的肺癌病死例数将超过100万［1］，肺癌将成为我国常见的恶性肿瘤之一。世界各国的肺癌病死率不尽相同，有文献统计其5年生存率约为5～16％［2］。其中非小细胞肺癌（ NSCLC ）约占所有肺癌的80％，手术治疗是早期NSCLC治疗的主要手段，但术后复发率较高；约75％的患者首次确诊时已属晚期，已失去了外科手术的佳时机，5年生存率很低。因此提高NSCLC的早期诊断、寻找新的预后指标及治疗方式，是当前肿瘤研究的重要课题。
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甲基化特异性PCR检测肝癌复发转移患者血清DLC-1甲基化的价值研究
目的 研究血清DLC-1基因甲基化检测与肝细胞癌复发转移的关系.方法 收集73例HCC及正常健康体检者血清标本,HCC患者均经过病理证实.依据临床以及病理学特征分为高侵袭组和低侵袭组;采用甲基化特异性PCR对不同侵袭组HCC之间血清DLC-1基因甲基化表达进行分析.结果 DLC-1甲基化表达率高侵袭组明显高于低侵袭组,二者之间差异有统计学意义(X2=4.4652,P<0.05).研究HCC患者与对照组肝硬化患者(B组)和健康体检者(C组)血清标本中DLC-1甲基化关系发现:HCC患者与正常人和良性肝部疾病患者血清DLC-1基因甲基化检出率比较差异有统计学意义;研究血清DLC-1甲基化与HCC TNM分期的关系发现分期越晚,DLC-1甲基化程度越高;短期随访发现DLC-1甲基化的HCC患者中位生存期低于非甲基化患者(P<0.05).结论 DLC-1基因甲基化检测可作为肝细胞癌复发转移监测指标.
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PCR方法检测肝癌患者血清DLC-1基因表达的临床价值
目的 研究血清DLC-1基因与肝细胞癌(HCC)复发转移的关系.方法 收集南通大学附属肿瘤医院2005年3月至2006年10月间73例HCC及正常健康体检者血清标本,HCC患者均经过病理证实.依据临床以及病理学特征分为高侵袭组和低侵袭组;采用PCR对所有血清标本DLC-1基因表达进行分析.结果 HCC高侵袭组DLC-1基因表达明显低于低侵袭组,二者之间差异有统计学意义(χ2=4.2719,P<0.05).短期随访发现DLC-1阴性表达的HCC患者中位生存期低于阳性表达患者,且易复发(χ2=3.85,P<0.05).结论 定期动态监测高危人群的血清DLC-1基因表达可能对肝癌患者早期转移复发有一定的临床诊断价值.
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pcDNA3.1/DLC-1重组质粒的构建及其在HT-29细胞中的表达
目的 构建和表达DLC-1(deleted in liver cancer)基因重组质粒.方法 用PCR法得到DLC-1基因片段,此基因片段带有Xba I和BamH I两个酶切位点,然后将此片段和真核表达载体pcDNA3.1连接,转化大肠杆菌DH5a,利用脂质体介导将pcDNA3.1/DEC-1重组质粒转染到结肠癌HT-29细胞中,再用RT-PCR法检测重组质粒的表达.结果 重组质粒经Xba I和BamH I双酶切和测序与DLC-1基因序列一致;利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒导入HT-29细胞,获得了DLC-1基因的表达.结论 成功构建pcDNA3.1/DLC-1重组质粒并在HT-29细胞内表达.
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结肠癌中DLC-1与Moesin的表达及临床病理学意义
目的 探讨结肠癌组织中DLC-1及Moesin表达的相关性与临床病理学意义. 方法 收集结肠癌标本72例及相应癌旁结肠黏膜组织,分别应用Western blotting和免疫组化方法检测DLC-1及Moesin蛋白质的表达. 结果 结肠癌组织中DLC-1蛋白表达水平及其阳性表达率明显低于癌旁结肠黏膜组织,而Moesin蛋白表达水平及其阳性表达率明显高于癌旁结肠黏膜组织,两者表达呈负相关.低分化结肠癌组织中DLC-1阳性表达率低于高、中分化结肠癌组织,而Moesin阳性表达率高于高、中分化结肠癌组织;Ⅲ、Ⅳ期结肠癌组织中DLC-1阳性表达率低于Ⅰ、Ⅱ期结肠癌组织,而Moesin阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ期结肠癌组织;淋巴结转移及5年内病情复发或者死亡病例结肠癌组织中DLC-1阳性表达率分别低于无淋巴结转移及5年内无复发病例,而Moesin阳性表达率分别高于无淋巴结转移及5年内无复发病例,差异均具有统计学意义. 结论 结肠癌组织中DLC-1低表达,Moesin高表达,两者表达呈负相关.DLC-1低表达及Moesin高表达与结肠癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关.
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DLC-1基因表达与肝细胞癌复发转移的关系
目的已报道人类染色体8p缺失可能与肝癌转移有关,本文应用实时定量聚合酶链反应(RQPCR)研究位于8p的DLC-1基因mRNA表达与肝细胞癌侵袭转移的关系.方法收集51例复旦大学中山医院外科手术切除的肝细胞癌(HCC)及癌旁正常组织标本,根据临床病理学指标,分为高低侵袭性两组,用RQ-PCR对不同侵袭性HCC之间的DLC-1基因表达进行分析.对不同侵袭转移潜能MHCC 97-L、MHCC97 H、HCCLM3、Hep3B及HepG2肝癌细胞系用同样方法分析DLC-1基因的表达差异.结果非转移细胞系Hep3B和HepG2与转移细胞系MHCC97-L、MHCC97-H和HCCLM3之间DLC-1基因表达差异有统计学意义(P＜0.01),并随着侵袭与转移潜能的逐步提高DLC-1表达水平也相应逐步降低;HCCLM3细胞系显著低于MHCC97-L细胞系(P＜0.01).HCC组织中,高侵袭性HCC组DLC-1基因表达明显低于低侵袭性HCC组(P＜0.05).结论DLC-1基因表达与肝癌的侵袭转移的抑制相关,其表达可能在抑制肝癌的侵袭转移中发挥重要作用.
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DLC-1过表达抑制结肠癌细胞生长及与Wnt/β-catenin信号通路的关系
目的:探讨在结肠癌细胞中抑癌基因DLC-1的作用及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系.方法:以结肠癌SW480细胞系为实验对象,分为实验组(pcDNA3.1 (+)-DLC-1组),阴性对照组[pcDNA3.1(+)组]及空白对照组(SW480组).用携带抑癌基因DLC-1的重组慢病毒表达载体转染各组,用MTT法检测各组细胞增殖活性,用流式细胞仪检测各组凋亡率,用real-timePCR及Western blot分别检测各组Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、GSK-3β和c-myc的表达水平.结果:慢病毒介导DLC-1过表达使结肠癌细胞SW480的增殖受到抑制,增殖率为0.546,凋亡率明显增加,为42.422+3.413.转染DLC-1基因的结肠癌SW480细胞中β-catenin和c-myc的mRNA及蛋白表达水平较空白对照组及阴性对照组均明显下降,而GSK-3β的mRNA及蛋白表达水平较空白对照组及阴性对照组则明显上升,差异具有统计学意义(P均=0.000).结论:慢病毒介导DLC-1过表达在结肠癌中有明显的抑癌作用,这种作用与Wnt/β-catenin信号通路密切相关.DLC-1可能是Wnt/β-catenin信号通路的上游调节因子.
关键词： DLC-1 抑癌基因 结肠癌 Wnt/β-catenin信号通路 -
5-碘代杀结核菌素对HT-29细胞DLC-1基因的去甲基化作用
目的 探讨5-碘代杀结核菌素(5-iodotubercidin,ITU)对人结肠癌细胞HT-29株增殖凋亡及DLC-1基因表达的影响.方法 不同浓度(0.1、0.5、1、2、4、6、8、10 μmol/L)ITU作用于HT-29细胞48 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HT-29细胞的增殖活性;ITU(0、2、4、6μmol/L)作用于HT-29细胞48 h,流式细胞仪检测其凋亡率;ITU(0、2、4、6μmol/L)作用于HT-29细胞48 h,亚硫酸氢盐克隆测序法(BSP)检测DLC-1基因启动子区CpG岛甲基化情况;同上的处理细胞的方法,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝癌缺失基因-1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)mRNA的表达;Western blot检测DLC-1基因蛋白表达.结果 ①ITU可明显抑制HT-29细胞活力,在一定范围内随着药物浓度增加抑制细胞活力的作用越强(P＜0.05),以6 μmol/L组对HT-29细胞影响大,IC50=(5.92±0.62) μmol/L.②分别以0、2、4、6 μmol/L ITU作用于HT-29细胞后,流式细胞仪检测各组凋亡率,分别为(9.56±2.21)％、(22.18±3.16)％、(34.23±3.16)％、(40.50±3.16)％,表明随着ITU浓度增加,对HT-29细胞的促凋亡作用越强.③经0、2、4、6 μmol/L ITU处理后DLC-1基因启动子区CpG岛甲基化率分别为91.67％、75.00％、61.67％、43.33％,表明ITU可以引起DLC-1基因启动子区甲基化程度降低.④在HT-29细胞中可检测到少量DLC-1 mRNA和蛋白的表达;相同条件经0、2、4、6μmol/L ITU处理细胞后检测显示DLC-1基因mRNA和蛋白的表达增加,并随浓度增长,mRNA及蛋白表达随之增加.结论 ITU可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,促进HT-29细胞凋亡,而这种抑制增殖作用可能和ITU降低DLC-1基因启动子区甲基化水平而诱导DLC-1基因上调有关.
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抑癌基因DLC-1与结肠癌的关系
结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,其发生、发展和演进是一个多步骤、多因素综合作用的复杂生物学过程,涉及到许多基因表达的异常.目前研究发现,某些抑癌基因的表达抑制是触发结肠癌的重要机制.肿瘤抑癌基因已成为分子生物学研究的热点和前沿.这一领域的研究对终揭开结肠癌发生、发展的机制,实现结肠癌的基因靶向治疗,具有重大的理论和临床意义.寻找结肠癌相关的特异性抑癌基因,可进一步从分子水平阐明结肠癌的发病机制,为结肠癌的诊断和治疗等提供新的依据.DLC-1即是一种近几年研究较多的抑癌基因,涉及了结肠癌等多种恶性肿瘤的发病机制.本文就DLC-1的结构、生物学功能、在结肠癌中的失活机制和在结肠癌发生、发展中的作用作一综述.
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DLC-1基因在原发性肝癌组织中表达的临床意义研究
目的 研究DLC-1基因与肝癌发生、转移乃至复发的临床意义.方法 收集南通大学附属肿瘤医院2005年3月～2006年10月间73例HCC及癌旁正常组织(其中12例含癌栓)和24例肝血管瘤手术切除标本,标本均经过病理证实.依据临床以及病理学特征分为高侵袭组和低侵袭组,采用PCR对所有组织标本DLC-1基因表达进行分析.结果 研究发现肝血管瘤、癌旁组织、部分肝癌组织中表达的DLC-1基因大约为450bp,肝癌组织、癌旁组织和肝血管瘤中DLC-1基因表达阳性率依次为69.86%,97.26%和100%,统计学分析这三种组织之间有明显差异(P<0.05).DLC-1基因表达在HCC高侵袭组明显低于低侵袭组,二者之间有明显的差异(P<0.05).短期随访发现DLC-1表达阴性者的HCC患者中位生存期低于表达阳性患者,且易复发(P<0.05).结论 定期动态监测高危人群的DLC-1基因表达可能对肝癌患者早期转移复发有一定的临床诊断价值.
