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Olig对少突胶质细胞介导脱髓鞘大鼠髓鞘再生的影响
目的 探讨Olig在少突胶质细胞介导的脱髓鞘大鼠髓鞘再生中的作用.方法 40只健康Wistar大鼠,随机分成正常组、模型对照组、模型组、实验组,用形态学观察和免疫组织化学检测Oligl和Olig2的表达.结果 正常组Oligl位于少突胶质细胞的胞质,模型组胞核表达明显增多,实验组Oligl又重新转移至胞质;正常组Olig2表达位于胞核,模型组中有少量表达于胞质.结论 在Olig1和Olig2同时缺失时,导致全脑不能形成少突胶质细胞,严重影响髓鞘的再生.
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Olig基因与中枢神经系统疾病的研究进展
Olig1和Olig2是Olig家族主要成员,近年来研究发现Olig1和Olig2与脱髓鞘疾病、胶质瘤、缺血缺氧性脑损伤等疾病的发生及恢复密切相关,它们不仅参与了少突胶质早期定向分化和晚期成熟分化的转录调控过程,而且对中枢神经系统的正常发育及髓鞘的形成有着至关重要的作用.有关Olig基因与中枢神经系统疾病关系的研究成为国内外研究的热点.
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Olig1转录因子在大鼠脊髓发育过程中的表达
目的:检测Olig1转录因子在大鼠脊髓发育过程中的表达情况.方法:选取胚胎14.5 d、18.5 d和出生后当天、出生后3 d、7 d、2周、4周及成年的大鼠脊髓,采用免疫荧光法和RT-PCR检测Olig1在脊髓的表达.结果:从胚胎14.5 d到成年大鼠的脊髓中Olig1均有表达.结论:Olig1在少突胶质细胞不同发育时期均有表达.
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重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP的构建与鉴定
目的:转录因子Olig1调控了少突胶质前体细胞的分化和成熟,并参与了脱髓鞘损伤后的修复,是治疗脱髓鞘疾病的候选基因,在缺血性脑血管病的治疗中具有极大的应用价值.本实验旨在构建携带Olig1基因的重组腺病毒载体.方法:pDC315-Olig1为模板,聚合酶链反应扩增酶切Olig1片段,连接到带有eGFP标记基因的载体质粒pDC315-eGFP上,构建穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP,经PCR,酶切及测序鉴定后,利用AdMax包装系统,通过脂质体2000的介导与骨架质粒pBHGIox_E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组后产生复制缺陷型重组腺病毒栽体Ad5-Olig1-eGFP,应用PCR对毒种进行鉴定,传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒.以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度.结果:经聚合酶链反应,酶切鉴定和测序分析,得到大小700 bp(Olig1)目的片段,证实正确构建重组穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP和重组腺病毒Ad5-Olig1-eGFP,测得重组腺病毒颗粒数为2.3×1011v.P./mL.结论:成功构建携带Olig1的重组腺病毒栽体Ad5-Olig1-eGFP,为缺血性脑血管病的基因治疗提供基因栽体并奠定实验基础.
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实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠大脑Olig基因表达的变化规律
目的 研究实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)大鼠大脑Olig1,Olig2和Nkx2.2基因的表达规律.方法 采用注射豚鼠脊髓匀浆的方法制作Wistar大鼠EAE模型.实时RT-PCR检测基因表达的相对值.结果 正常大鼠大脑Olig1,Olig2和Nkx2.2都低水平表达.EAE大鼠症状发作后第6天,其表达水平达高峰,与正常组比较,相差显著(P＜0.05).三者的变化规律一致.结论 Olig基因表达量的增高程度可能是EAE大鼠髓鞘修复不完全的因素之一.
关键词： 实验性态反应性脑脊髓炎 Olig1 Olig2 Nkx2.2 -
Olig1过表达对大鼠神经干细胞向少突胶质细胞分化的影响
目的:Olig1基因修饰的神经干细胞(NSCs)移植治疗中枢神经脱髓鞘疾病具有重要的应用前景.本研究目的是构建大鼠Olig1真核表达载体,并观察其过表达对大鼠NSCs向少突胶质细胞分化的影响.方法:采用RT-PCR,以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增ohg1基因,定向克隆到pEGFP-N3载体中;用电穿孔方法转染pEGFP-N3-Olig1表达载体至NSCs中,然后用RT-PCR鉴定Olig1的表达,免疫荧光染色鉴定NSCs向少突胶质细胞的分化情况.结果:成功构建了pEGFP-N3-Olig1真核表达载体,Olig1在重组质粒转染的NSCs中能够高效表达.重组质粒转染的NSCs在体外诱导分化后,能够较空质粒转染的NSCs产生更多的少突胶质细胞(P<0.01).结论:Olig1过表达能够显著促进大鼠NSCs向少突胶质细胞方向分化.
