内皮素-1对人肾小球系膜细胞层黏连蛋白的影响

内皮素-1(endothelin-1,ET-1)是一种强烈的缩血管活性肽,与血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)具有很多相似之处,且二者之间具有相瓦促进作用[1].阻断肾素-血管紧张素(RAS)系统已被广泛应用于慢性肾脏病(CKD)的治疗,但是ET系统拮抗剂还未得到重视.本实验通过研究ET-1及其受体拮抗剂(Bosentan)对层黏连蛋白(laminin,LN)代谢的影响,为ET-1受体拮抗剂应用于CKD的治疗提供依据.

Bosentan 对DOCA-盐敏感型高血压大鼠血管重构的影响

目的:观察Bosentan对DOCA-盐敏感型高血压大鼠血管重构的影响,探讨其血管重构的机制.方法: 40只160～180g的雄性SD大鼠,切除左侧肾脏,一周后随机分为4组.1组为空白对照组,饮自来水.术后一周,2、3、4组予脱氧皮质酮(DOCA)皮下注射,50mg/kg/w,饮1%盐水;在开始DOCA上皮下注射的同时,予药物灌胃,2组:安慰剂:3组:Bosentan 100mg/kg/d;4组;依那普利20mg/kg/d,持续4周.每周测尾动脉压.4周后,抽血并处死动物取材,放免法测内皮素(ET)、血浆肾素活性(PRA).光镜下观察主动脉组织学改变,测主动脉厚度、直径.结果:血压:2周后,2～4组血压轻度升高,与对照组相比,P＜0.05;4周后,Bosentan可以减缓血压上升幅度.血浆ET浓度:安慰剂组、依那普利组、对照组差别无显著性:Bosentan组与对照组比显著升高(P＜0.01);血浆PRA浓度:对照组比其他3组显著增高,差异显著(P＜0.01);依那普利组比安慰剂组更低,差异显著(P＜0.01);血管厚度:安慰剂组、依那普利组显著高于对照组(P＜0.05);Bosentan组与对照组于显著差异,明显低于安慰剂组(P＜0.01);依那普利组与安慰剂组差别无显著性,(P＞0.05).结论:Bosentan可延缓DOCA-Salt-rat血压上升幅度,改善血管重构.

Bosentan对培养乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的:以内皮素(ET-1)诱导培养的乳鼠心肌细胞肥大,观察内皮素受体拮抗剂bosentan对肥大心肌细胞的抑制作用.方法:以胰酶消化法分离乳鼠心肌细胞,分4组进行细胞培养.对照组常规培养,不加任何干预因素,其余3组分别加入bosentan10-8 mol*L-1、 ET-1 10-10 mol*L-1、 ET-1 10-10+bosentan10-8 mol*L-1,培养72 h后观察心肌细胞生长情况并用放免法测定培养液中ET-1和心钠素(ANP)含量.结果:各组ANP测定水平分别为:对照组 6.46±0.38 μg*L-1, bosentan组4.87±0.56 μg*L-1,ET-1组 13.60±1.12 μg*L-1,ET-1+bosentan组 9.42±0.58 μg*L-1.镜下观察见ET-1刺激乳鼠心肌细胞肥大,加用bosentan能使心肌细胞肥大程度减轻.结论:ET-1可刺激乳鼠心肌细胞肥大,bosentan可使心肌细胞分泌心钠素减少,抑制ET-1诱导的心肌细胞肥大作用.

Bosentan预防大鼠低氧性肺动脉高压形成的作用

目的 研究Bosentan预防低氧诱导的肺动脉高压发生的药效作用,探讨内皮素-1(ET-1)在慢性高原病发病中的作用.方法 30只Wistar大鼠随机均分为常氧对照组、低氧对照组和Bosentan组,将低氧对照组和Bosentan组放入模拟海拔为5.5 km的低氧、低压环境中.常氧对照组和低氧对照组ig 0.9%生理盐水,Bosentan组ig 100 mg·ml-1 Bosentan水剂,每天2次.饲养15 d后,测量大鼠平均肺动脉高压(PAP)、左右心室比重[RV/(LV+s)]比值.结果 Bosentan组大鼠血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hot),ET-1与低氧对照组相比无差异,而PAP、RV/(LV+S)均显著低于低氧对照组(P<0.01).结论 Bosentan可显著预防低氧性肺动脉压的升高,缓解低氧对心肌细胞和血管平滑肌细胞的损伤,但不能抑制红细胞的过度增生.

Bosentan对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后一氧化氮及一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察非选择性内皮素受体阻断剂Bosentan对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)后一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)表达的影响及其意义.方法 健康雄性SD大鼠90只,建立SCIRI模型,分为正常组、假手术组、单纯缺血组(I)、生理盐水(NS)干预对照组、Bosentan干预组(Bos),NS和Bos组又以再灌注(IR)时间分为3、6、12、24、48、72h组,测定血清NO含量,免疫组织化学染色检测nNOS、iNOS和eNOS表达变化.结果 ①SCIRI后血清NO表达呈双峰样改变,峰值分别出现于IR3h及24h,Bosentan可显著降低第二个峰值(P＜0.05).②SCIRI后nNOS、iNOS、eNOS在脊髓中的表达均逐渐增加,并分别于IR后24、48、24h达峰值,Bosentan可显著下调nNOS、iNOS表达(P＜0.05),上调eNOS表达(P＜0.05).③SCIRI后脊髓FADD蛋白、TrkA蛋白表达均逐渐增加,分别于IR后24、12h达峰值,Boscntan干预可下调FADD表达(P＜0.05),上调TrkA含量(P＜0.05).结论 Bosentan可影响大鼠SCIRI病理过程中NO及nNOS、eNOS、iNOS的表达,其机制可能与调节FADD及TrkA表达有关.

VEGF及其受体在脊髓缺血再灌注损伤中的表达及Bosentan干预的研究

目的 现察内皮素受体阻断剂Bosentan对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)后血管内皮因子(VEGF)及其两个受体表达的变化和意义.方法 成年SD大鼠120只建立SCIRI模型,随机分为正常组、假手术组、单纯缺血组、生理盐水对照组(NS)、Bosentan干预组(Bos),NS组和Bos组按照再灌注(IR)时间分为6、12、24h和3、5、7d组,测定血清VEGF含量,采用逆转录-Real-time PCR、免疫组织化学染色检测Bosentan干预后Flk及Flt的表达变化.结果 ①IR后各时间点血浆VEGF含量均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),以24h高(P＜0.01),同时间点Bosentan干预组较IR血浆VEGF含量均显著增高(P＜0.05).②Bosentan干预后各时间点VEGF、FLK、FLT的蛋白表达均较NS组显著增强(P＜0.05或P＜0.01),以24h明显(P＜0.05或P＜0.01).VEGF不仅在脊髓前角神经元表达,在Bosentan干预12、24h和3d时胶质细胞中亦有表达.FLK、FLT的蛋白仅在神经元胞浆中表达.③Bosentan干预后各组VEGF mRNA、FLK mRNA(7d除外)、FLT mRNA(7d除外)含量均较IR生理盐水对照组显著增高(P＜0.05或P＜0.01),以24h为显著(P＜0.05或P＜0.01).结论 缺血再灌注损伤本身可诱导VEGF及其受体的表达,内皮素受体阻断剂Bosentan可使VEGF及其受体的表达增加,改善脊髓病理形态,对SCIRI过程的改善可能有益.

脊髓缺血再灌注损伤的研究现状

脊髓损伤后恢复血液供应的过程中存在着缺血-再灌注损伤,其机制包括Ca2+超载、自由基损伤、炎症细胞及炎症因子、兴奋性氨基酸、脂质过氧化和细胞凋亡等.现有多种针对发病机制的防止脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)的药物及手段,临床上也多采用综合手段,但效果均不理想.因此,SCIRI的发病机制仍需进一步深入研究.

Background: Lung hypoplasia, pulmonary persistent hypertension of the newborn and its morphological changes are the main features in congenital diaphragmatic hernia (CDH). This study was undertaken to investigate if antenatal use of sildenafi l and/or bosentan attenuates vascular remodeling, promotes branching, and improves alveolarization in experimental nitrofeninduced CDH.
Methods: Nitrofen (100 mg) was gavage-fed to pregnant rats at post conception day (PCD) 9 to induce CDH. The rats were randomized to 5 groups: 1) control; 2) nitrofen; 3) nitrofen+sildenafil 100 mg/kg per day at PCD 16-20; 4) nitrofen+bosentan 30 mg/kg per day, at PCD 16-20, and 5) nitrofen+bosentan+sildenafil, same doses and administration days. After cesarean delivery, the offsprings were sacrifi ced. The diaphragmatic defect and pulmonary hypoplasia were identifi ed, and the lungs were dissected. Arterial wall thickness, bronchiolar density and alveolarization were assessed.
Results: The offsprings with CDH were characterized by severe pulmonary hypoplasia (lung weight-to-body weight ratio: 0.0263 [95% confidence interval (CI) 0.0242-0.0278)] in the nitrofen group versus 0.0385 (95% CI 0.0355-0.0424) in the control group (P=0.0001). Pulmonary arterial wall thickness was decreased to 3.0 (95% CI 2.8-3.7) μm in the nitrofen+sildenafil group versus 5.0 (95% CI 4.1-4.9) μm in the nitrofen group (P=0.02). Terminal bronchioles increased to 13.7 (95% CI 10.7-15.2) μm in the nitrofen+bosentan group in contrast to 8.7 (95% CI 7.2-9.4) μm in the nitrofen group (P=0.002). More significant differences (P=0.0001) were seen in terminal bronchioles in the nitrofen+sildenafil+bosentan group than in the nitrofen group [14.0 (95% CI 12.5-15.4) μm versus 8.5 (95% CI 7.1-9.3) μm]. Pulmonary arterial wall thickness was also decreased in the former group.
Conclusions: In this rat model, antenatal treatment with sildenafi l attenuates vascular remodeling. Bosentan promotes the development of terminal bronchioles in nitrofen-induced CDH.